湖南湘潭縣屠宰生豬沙門氏菌和鏈球菌感染情況調(diào)查及耐藥性分析

王大春，李慶豐

（湘潭縣錦石鄉(xiāng)人民政府農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，湖南 湘潭 411228）

在生豬養(yǎng)殖環(huán)境中存在各種機(jī)會(huì)致病性病原，健康豬群感染此類病原后不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀，但可持續(xù)性攜帶。沙門氏菌屬于革蘭氏陰性菌，該病原可感染多種動(dòng)物（如豬、牛、羊和人等），其中豬感染該病后可出現(xiàn)腸炎和敗血癥，繼而造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前我國(guó)報(bào)道的沙門氏菌有超過(guò)300種血清型，且不同血清型菌株致病性具有差異[1-2]。豬鏈球菌在豬場(chǎng)環(huán)境中廣泛存在，豬群感染該病后可出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀，其中包括敗血癥、腦膜炎等，且豬鏈球菌血清型2型可感染人，且近年來(lái)人鏈球菌病發(fā)生部分原因是由于患者接觸或食用被鏈球菌污染的豬肉所導(dǎo)致[3-4]。

2019年4月至2020年8月，從湘潭縣及周邊地區(qū)屠宰場(chǎng)收集生豬淋巴結(jié)樣品共302份，通過(guò)細(xì)菌分離及鑒定，調(diào)查該地區(qū)健康屠宰豬沙門氏菌和鏈球菌隱性感染情況，同時(shí)對(duì)菌株的血清型進(jìn)行調(diào)查，最后通過(guò)藥敏試驗(yàn)確定不同菌株的耐藥情況，旨在為臨床上沙門氏菌和鏈球菌的防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

2019年4月至2020年8月，從湘潭縣及周邊地區(qū)屠宰場(chǎng)共采集屠宰豬淋巴結(jié)樣品共302份，所有屠宰豬均為肥育豬，且外表健康，無(wú)臨床疾病。記錄采集樣本信息（如來(lái)源、日期等）后將其低溫送至湘潭市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，待檢。

1.2 細(xì)菌分離與鑒定

在超凈工作臺(tái)下用手術(shù)剪和手術(shù)刀將組織切開，使用接種環(huán)蘸取少量組織液接種于鮮血營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，其后挑選疑似鏈球菌或沙門氏菌的單菌落再次接種于鮮血營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行純化，培養(yǎng)后將純化的菌落進(jìn)行革蘭氏染色鑒定。

1.3 血清型鑒定

以PCR法對(duì)豬鏈球菌進(jìn)行血清型鑒定。對(duì)疑似鏈球菌菌株進(jìn)行擴(kuò)增后，以DNA提取試劑盒提取細(xì)菌基因組DNA，設(shè)計(jì)針對(duì)鏈球菌2型、7型和9型血清型檢測(cè)特異性引物[5]，以細(xì)菌基因組DNA為模板，以PCR法對(duì)獲得的鏈球菌進(jìn)行血清型鑒定；根據(jù)參考文獻(xiàn)[3]，參考White-Kauffmann-Le Minor抗原表，對(duì)本文獲得的沙門氏菌菌株進(jìn)行血清型鑒定。

1.4 藥敏試驗(yàn)

用生理鹽水將本研究分離的沙門氏菌或鏈球菌稀釋至0.5 MCF（麥?zhǔn)蠞岫龋?，?0 μL菌液均勻涂布于鮮血瓊脂固體培養(yǎng)基表面，待菌液稍干后在培養(yǎng)基表面貼上含不同抗生素的紙片，在37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后，用卡尺記錄各藥敏紙片的抑菌圈大小，參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)判定菌株對(duì)藥物的敏感性[6]。

2 調(diào)查結(jié)果

2.1 湘潭縣及周邊地區(qū)屠宰生豬來(lái)源樣品沙門氏菌和鏈球菌感染情況調(diào)查結(jié)果

調(diào)查結(jié)果顯示（表1），被檢測(cè)的302份樣品中沙門氏菌和鏈球菌陽(yáng)性樣品分別為17和22份，檢出率分別為5.63%和7.28%，且不同地區(qū)來(lái)源樣品均含有沙門氏菌或鏈球菌陽(yáng)性樣品，但檢出率差異相對(duì)較小，其中湘潭縣、雨湖區(qū)和韶山市來(lái)源樣品中沙門氏菌檢出率分別為4.63%、6.14%和6.25%，而鏈球菌檢出率分別為9.26%、7.02%和5.00%。

表1 湘潭縣及周邊地區(qū)屠宰生豬來(lái)源樣品沙門氏菌和鏈球菌感染情況調(diào)查結(jié)果

2.2 沙門氏菌和鏈球菌血清型檢測(cè)結(jié)果

通過(guò)對(duì)本文獲得的17株沙門氏菌進(jìn)行血清型鑒定，共鑒定出4種血清型，分別為德爾卑沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、肯塔基沙門氏菌和倫敦沙門氏菌，其中德爾卑沙門氏菌所占比例最高，為52.94%（9/17），而鼠傷寒沙門氏菌、肯塔基沙門氏菌和倫敦沙門氏菌所占比例分別為23.53%（4/17）、11.76%（2/17）和11.76%（2/17）；22株鏈球菌中共鑒定出2種血清型，分別為2型和9型鏈球菌，其所占比例分別為27.27%（6/22）和72.73%（16/22）。

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

分別將本文獲得的17株沙門氏菌和22株鏈球菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果如表2所示。本研究分離的沙門氏菌對(duì)頭孢菌素類抗生素、鏈霉素和環(huán)丙沙星較為敏感，其耐藥率分別為0（頭孢他啶）、0（頭孢唑林）、0和5.88%，對(duì)阿莫西林、氟苯尼考等抗生素屬于中介敏感，其耐藥率分別為47.06%和47.06%，對(duì)大觀霉素、慶大霉素和磺胺甲氧嘧啶等抗生素耐藥率較高，分別為76.47%、76.47%和88.24%；而鏈球菌也對(duì)頭孢他啶和頭孢唑林具有高度敏感性，其耐藥率均為0，但對(duì)氟苯尼考、環(huán)丙沙星、氨芐西林等抗生素耐藥性較強(qiáng)，其耐藥率分別為81.82%、72.73%和77.27%。

表2 本研究分離的沙門氏菌和鏈球菌菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果 %

3 討論與分析

豬肉是我國(guó)消費(fèi)最多的肉類之一，而屠宰場(chǎng)來(lái)源肉類食源性致病菌感染（污染）問(wèn)題關(guān)系到食品衛(wèi)生安全，因此對(duì)屠宰場(chǎng)來(lái)源豬肉樣品中沙門氏菌和鏈球菌感染情況進(jìn)行調(diào)查具有較重要的公共衛(wèi)生意義。湘潭縣生豬養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá)，本文選擇該地具有代表性屠宰場(chǎng)進(jìn)行樣品采集，分離沙門氏菌和鏈球菌后進(jìn)行血清型鑒定及耐藥性分析，分別分離出17和22株菌株，其分離率分別為5.63%和7.28%，其中沙門氏菌分離率結(jié)果與方忠意等[2]和高延玲等[7]基本一致，分別為5.63%和6.90%。其研究結(jié)果提示湘潭縣部分地區(qū)屠宰部分肥育豬存在沙門氏菌和（或）鏈球菌感染情況，相關(guān)部門需引起重視。

進(jìn)一步血清型分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，17株沙門氏菌菌株鑒定出4種血清型，分別是德爾卑沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、肯塔基沙門氏菌和倫敦沙門氏菌，其中德爾卑沙門氏菌（52.94%）和鼠傷寒沙門氏菌（23.53%）所占比例較高，這與四川地區(qū)豬肉生產(chǎn)鏈沙門氏菌血清型優(yōu)勢(shì)菌特征基本一致[8]，同時(shí)也提示這兩種血清型沙門氏菌在我國(guó)生產(chǎn)中普遍存在，對(duì)人畜健康威脅較大。此外，22株豬鏈球菌分離株中存在2型和9型血清型，其所占比例分別為27.27%（6/22）和72.73%（16/22），本研究中2型鏈球菌所占比例低于劉澤文等[9]湖北地區(qū)調(diào)查結(jié)果（47.1%，16/34），這可能與樣品來(lái)源及數(shù)量等具有差異有關(guān)，但由于2型鏈球菌是重要的食源性病原，其威脅公共衛(wèi)生安全的問(wèn)題不能忽視。

進(jìn)一步藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，本文獲得的沙門氏菌和鏈球菌均對(duì)頭孢唑林和頭孢他啶敏感，此外，沙門氏菌對(duì)鏈霉素和環(huán)丙沙星也較為敏感，其耐藥率均低于10.0%，對(duì)磺胺甲氧嘧啶、慶大霉素等耐藥率均高于60.0%，但鏈球菌對(duì)四環(huán)素、氟苯尼考等具有較高的耐藥性，故而在臨床上用藥應(yīng)使用對(duì)細(xì)菌敏感的藥物，可采用聯(lián)合用藥方式同時(shí)對(duì)鏈球菌和沙門氏菌進(jìn)行防控。