巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子和細(xì)胞間黏附分子-1 在慢性牙周炎合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型中的表達(dá)分析

龐雪晶

作者單位：昆明市兒童醫(yī)院口腔科，云南 昆明 650000

慢性牙周炎（CP）是發(fā)生于牙周支持組織的一種慢性炎性疾病，伴有進(jìn)行性的牙周組織附著喪失和牙槽骨吸收破壞。動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是心血管疾病發(fā)生率和死亡率的主要原因。流行病學(xué)調(diào)查顯示牙周炎可增加人患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，口腔細(xì)菌感染與心血管疾病之間存在密切聯(lián)系。研究表明牙齦卟啉單胞菌（P.gingivalis）感染導(dǎo)致牙周軟組潰瘍出血，進(jìn)而入血、黏附和侵入血管內(nèi)壁引起局部炎癥反應(yīng)，是促進(jìn) AS 發(fā)展的重要原因。

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（MIF）是一種多功能蛋白 ，作為細(xì)胞因子起作用 ，是炎癥的主要調(diào)節(jié)因子。MIF 作為動(dòng)脈粥樣硬化形成的主要調(diào)節(jié)因子之一，通過(guò)促進(jìn)單核細(xì)胞的募集，激活炎癥信號(hào)通路，將巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為泡沫細(xì)胞以及增強(qiáng)膠原酶表達(dá)和基質(zhì)降解，可導(dǎo)致 AS 斑塊不穩(wěn)定，這直接關(guān)系到疾病的進(jìn)展。將載脂蛋白基因（ApoE-∕-）或低密度脂蛋白受體基因敲除小鼠的 MIF 表達(dá)阻斷，可使已形成的 AS 斑塊退縮變小。由此可見(jiàn) MIF 在AS 病變中具有重要作用 。 細(xì)胞間黏附分子 -1（ICAM-1）的表達(dá)和活性升高是內(nèi)皮功能障礙表型的特征，在 AS 形成期間，內(nèi)皮細(xì)胞使黏附分子表達(dá)升高，啟動(dòng)細(xì)胞骨架重組，這是單核細(xì)胞募集到血管壁中不可或缺的。近年來(lái)，ICAM-1 在牙周炎中的作用逐漸得到關(guān)注，ICAM-1 是牙齦表面的黏附蛋白，主要通過(guò)細(xì)胞間信息傳遞、驗(yàn)證和免疫反應(yīng)參與牙周炎的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。慢性牙周炎組織中的 ICAM-1 升高進(jìn)而影響血清中 ICAM-1 的水平，血液中 ICAM-1 的升高可導(dǎo)致循環(huán)系統(tǒng)中的白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，引發(fā)心血管疾病的發(fā)生。

本研究于 2019年 1—12月通過(guò)建立牙周炎動(dòng)脈粥樣硬化的復(fù)合動(dòng)物模型，在體內(nèi)驗(yàn)證 P.gingivalis 造成的牙周感染是否可使大鼠血清中及動(dòng)脈組織中 MIF、ICAM-1 表達(dá)升高。本研究將為闡明慢性牙周炎感染促進(jìn) AS 樣疾病的發(fā)生發(fā)展提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)菌培養(yǎng)

牙齦卟啉單胞菌菌株常規(guī)復(fù)蘇后接種于 BHI 血瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃厭氧條件（80% 氮?dú)狻?0% 二氧化碳、10% 氫氣）培養(yǎng) 5～7 d，取菌落傳代培養(yǎng) 3～4 d，液體增菌 1～2 d，紫外分光光度計(jì) 600 nm 下調(diào)整菌液濃度至大約 1.0×10CFU∕mL，用于大鼠口腔接種。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

24 只健康的雄性 SD 大鼠，8周齡，體質(zhì)量范圍為（220±10）g，動(dòng)物飼養(yǎng)于 SPF 級(jí)動(dòng)物房。用隨機(jī)數(shù)字法分配為四組，分別為 NC 組、CP 組、AS 組及 CP+AS 組，每組各 6 只。實(shí)驗(yàn)前所有大鼠飲水中給予復(fù)方磺胺甲噁唑片即 1 g∕L 磺胺甲噁唑和 200 mg∕L 的甲氧芐胺嘧啶 3 d 以抑制不利于牙齦卟啉單胞菌定植的內(nèi)源性細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為 SYXK（粵）2019-0074，本研究符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)原則。

1.3 建模方法

NC 組：腹腔注射生理鹽水及口腔內(nèi)涂生理鹽水作為對(duì)照，標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng) 12周。CP組：將牙齦卟啉單胞菌（1.0×10CFU∕mL）接種于上頜第二磨牙齦溝內(nèi)。以后在異氟烷鎮(zhèn)靜下每周接種 2 次，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂飼，每周檢查結(jié)扎絲 1 次，有脫落者及時(shí)重新結(jié)扎。AS 組：先標(biāo)準(zhǔn)飼料喂飼，1周內(nèi)逐漸增加高脂飼料比例直至完全替代標(biāo)準(zhǔn)飼料（高脂飼料喂飼 20～25 g∕d）。在高脂飲食的基礎(chǔ)上于行大鼠左側(cè)頸動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)（參照 Tulis的手術(shù)方法）。同時(shí)腹腔注射維 生素 D3 針劑 60 萬(wàn) IU∕Kg，從第2周每周腹腔注射 1 次維生素 D3 10 萬(wàn) IU∕Kg，共注射 3 次。高脂飼料繼續(xù)喂養(yǎng) 12周。CP+AS組：牙周炎建模處理同 CP 組，動(dòng)脈粥樣硬化建模處理同 AS 組。

1.4 取材

大鼠處死前 12 h 禁食不禁水，將大鼠麻醉后仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上進(jìn)行取材。

1.5 觀察記錄與檢測(cè)

每天觀察大鼠精神狀態(tài)，每周更換新鮮飲水。每 2周進(jìn)行 1 次體質(zhì)量的測(cè)量。由同一人使用 Hu-Friedy 牙周探針測(cè)量上頜左、右第二恒磨牙齦溝出血指數(shù)（SBI）（1971，Muhleman 和Son 記分標(biāo)準(zhǔn)記 0～5 分），取平均值。在放大的體視顯微鏡下（×40）對(duì)染色后的上頜第二磨牙的頰舌側(cè)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的圖像采集。用橡皮泥做兩個(gè)約 3 cm的長(zhǎng)條，將頜平面與長(zhǎng)條垂直，牙齒長(zhǎng)軸與相機(jī)垂直。長(zhǎng)條上有固定參考點(diǎn)來(lái)保證照片的標(biāo)準(zhǔn)化。Image-Pro Plus6.0 軟件分析頰腭側(cè)由釉牙骨質(zhì)界（CEJ）、近遠(yuǎn)中軸線角、牙槽嵴頂所圍成的多邊形面積，比較面積的大小從而推測(cè)骨吸收的多少。頰舌側(cè)面積之和記為該鼠的骨喪失量。將 4% 的多聚甲醛固定的動(dòng)脈組織進(jìn)行脫水石蠟包埋切片，常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色后光學(xué)顯微鏡下觀察，評(píng)估頸動(dòng)脈病變情況。

1.6 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）檢測(cè)血清中 MIF及 ICAM-1 的表達(dá)

從-80 ℃超低溫冰箱中取出血清樣本，在室溫解凍半小時(shí)以上，檢測(cè)前根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果稀釋 ，用 ELISA 試劑盒測(cè)定標(biāo)本中 MIF 及ICAM-1 含量。

1.7 免疫組化檢測(cè)動(dòng)脈組織中 MIF 及 ICAM-1 的表達(dá)

石蠟切片脫蠟，浸泡于 3% 過(guò)氧化氫中，洗滌后，MIF 抗體或者 ICAM-1 抗體（1∶200）4 ℃孵育過(guò)夜，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）洗，37 ℃ 30 min，PBS 沖洗，DAB 顯色，復(fù)染，封片；與抗體相結(jié)合的區(qū)域出現(xiàn)棕黃色的改變，細(xì)胞質(zhì)中的棕黃色程度越高，代表陽(yáng)性反應(yīng)越強(qiáng) 。 通過(guò)圖像分析軟件 Image-pro Plus 6.0 對(duì)動(dòng)脈組織中 MIF 和 ICAM-1 陽(yáng)性區(qū)域進(jìn)行半定量分析：在高倍鏡下（×200），每張切片隨機(jī)選取 3 個(gè)不同視野，對(duì)血管組織中 MIF 和 ICAM-1 染色陽(yáng)性部位的透光強(qiáng)度進(jìn)行分析，結(jié)果用平均吸光度表示，將 3 個(gè)視野的平均值作為此片 MIF 和 ICAM-1含量的最終數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 牙槽骨吸收水平分析

體視顯微鏡圖示（圖1），IPP 圖像分析軟件顯示：NC 組牙槽骨吸收面積為（5.11±0.99）mm，CP 組 為（9.46±3.07）mm，AS 組為（5.50±0.74）mm，CP+AS 組 為（9.58±3.53）mm。CP 組及 CP+AS 組牙槽骨吸收面積高于其他兩組（

P

＜0.05）。結(jié)合 SBI 數(shù)據(jù)結(jié)果，可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn) CP 組及CP+AS 組成功建立起牙周炎動(dòng)物模型。

2.2 血脂的檢測(cè)分析

血脂檢測(cè)結(jié)果顯示 AS 組、CP+AS 組三酰甘油、總肝固醇、LDL 均較 NC 組、CP組升高（

P

＜0.05），其中 AS 組升高最為明顯，其次為CP+AS 組；AS、CP+AS 組 HDL 較 NC、CP 組降低（

P

＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清血脂水平比較∕（mmol∕L

2.3 頸動(dòng)脈組織病理組織學(xué)檢查結(jié)果

病理組織學(xué)檢查顯示：NC 組可見(jiàn)內(nèi)膜、中膜和外膜分界清楚，管腔面由單層血管內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋，細(xì)胞完整，中膜主要可見(jiàn)排列整齊平滑肌細(xì)胞。CP 組與 NC 組病理表現(xiàn)相似，但中膜平滑肌細(xì)胞增生，動(dòng)脈壁略增厚，有極少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。AS 組、CP+AS 組管壁內(nèi)皮細(xì)胞脫落，內(nèi)膜增厚，突出的斑塊內(nèi)含有壞死物質(zhì)，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)以及少量的泡沫細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞減少，排列紊亂，嗜堿性增強(qiáng)，中膜明顯萎縮，可見(jiàn)小血管管腔。結(jié)合血脂數(shù)據(jù)結(jié)果可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn) AS 組及 CP+AS 成功建立了大鼠動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型，見(jiàn)圖2。

2.4 血清 MIF 及 ICAM-1 表達(dá)水平分析

2.4.1 血清 MIF 表達(dá)水平分析 血清 MIF 表達(dá)水平四組間比較：NC 組（42.93±2.63）μg∕L、CP 組（45.57±2.59）μg∕L、AS 組（50.88±4.20）μg∕L 及 CP+AS 組（59.40±3.92）μg∕L（

F

=36.723，

P

=0.011）。 AS 組 及CP+AS 組血清 MIF 水平高于 CP 組及NC組（

P

＜0.05），其中 CP+AS 組最高（

P

＜0.05）；CP 組 與 NC 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。2.4.2 血清 ICAM-1 表達(dá)水平分析血清 ICAM-1表達(dá)水平四組間比較：NC 組（1.33±0.25）μg∕L、CP 組（3.99±0.44）μg∕L、AS 組（4.19±0.89）μg∕L 及 CP+AS 組（6.77±1.47）μg∕L（

F

=33.821，

P

=0.002）。CP+AS 組高于其他三組（

P

＜0.05），AS 組與 CP 組高于 NC 組（

P

＜0.05），AS 組與 CP 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。

2.5 動(dòng)脈組織中 MIF 與 ICAM-1 表達(dá)水平分析

2.5.1 動(dòng)脈組織中 MIF 表達(dá)水平分析 免疫組織化學(xué)染色顯示，MIF 在動(dòng)脈組織全層中均呈陽(yáng)性表達(dá)，且 分 布面積 較廣（圖3A～3D）。四組 間比較 ：NC 組MIF 吸 光 度 為（0.096±0.010），CP 組 為（0.010±0.011），AS 組為（0.127±0.011），CP+AS 組為（0.152±0.022）（

F

=48.271，

P

＜0.001）。CP+AS 組 MIF 水平高于其他三組（

P

＜0.05），AS 組 MIF 水平高于 CP 組及NC 組（

P

＜0.05），CP 組與 NC 組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。

圖1 體視顯微鏡觀察各組大鼠牙槽骨破壞情況（×40）：A為NC組第二磨牙未見(jiàn)明顯骨破壞；B為CP組第二磨牙牙槽骨吸收至牙根1/3～1/2；C為AS組第二磨牙未見(jiàn)明顯骨破壞；D為CP+AS組第二磨牙牙槽骨吸收至牙根根尖1/3，根分叉區(qū)骨破壞 圖2 各組大鼠動(dòng)脈組織的病理圖（HE染色×100）：A為NC組血管壁內(nèi)膜、中膜及外膜界限明顯，未見(jiàn)明顯異常；B為CP組血管壁內(nèi)膜、中膜及外膜界限明顯，箭頭示血管壁略增厚；C為AS組內(nèi)膜明顯增厚，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，彈力纖維排列紊亂、斷裂，黑色箭頭示斑塊內(nèi)壞死物，灰色箭頭示該區(qū)域嗜堿性增強(qiáng)；D為CP+AS組內(nèi)膜明顯增厚，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，彈力纖維排列紊亂、斷裂，黑色箭頭示中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，灰色箭頭示小血管管腔形成 圖3 各組大鼠頸動(dòng)脈組織中巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（MIF）和細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）的表達(dá)（免疫組織化學(xué)染色×200）：A～D分別為NC組、CP組、AS組及CP+AS組MIF的表達(dá)水平；E～H分別為NC組、CP組、AS組及CP+AS組ICAM-1的表達(dá)水平

2.5.2 動(dòng)脈組織中 ICAM-1 表達(dá)水平分析 免疫組織化學(xué)染色顯示，ICAM-1 在動(dòng)脈組織全層中均呈弱陽(yáng)性表達(dá)（圖3E～3H），四組實(shí)驗(yàn)大鼠組間比較：動(dòng)脈組織中 NC 組 ICAM-1 吸光度為（0.133±0.012），CP組為（0.156±0.006），AS 組 為（0.182±0.025），CP+AS組 為（0.197±0.033）（

F

=42.283，

P

＜0.001）。 AS 組 、CP+AS 組 ICAM-1 水平高于 NC 組及 CP 組（

P

＜0.05），CP 組與 NC 組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。

3 討論

頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度被認(rèn)為是早期動(dòng)脈粥樣硬化的標(biāo)志物 ，也是心血管結(jié)局的良好預(yù)測(cè)指標(biāo)。因基因敲除小鼠較昂貴，飼養(yǎng)條件較嚴(yán)格，且口腔操作空間較大鼠更困難，所以在本實(shí)驗(yàn)中還是選取大鼠來(lái)建立動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)另一個(gè)技術(shù)難點(diǎn)即球囊損傷術(shù)建立 AS 模型，對(duì)血管內(nèi)皮進(jìn)行機(jī)械損傷，加速病變的形成。病理結(jié)果顯示雖未出現(xiàn)鈣化斑塊的形成，但近似于人類(lèi) AS 病變的中期即纖維斑塊期。

三酰甘油 ，總肝固醇 ，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）是高脂血癥診斷和心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)分類(lèi)的主要測(cè)量指標(biāo)。其中三酰甘油，總肝固醇，LDL-C 升高與 AS 發(fā)病呈正相關(guān)，HDL-C 有抗 AS 的作用。LDL 水平的升高受到最多關(guān)注，在幾乎所有降脂試驗(yàn)中，LDL-C 水平已被用作治療或干預(yù)的主要目標(biāo)。在本實(shí)驗(yàn)中血脂檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn) CP 組、CP+AS 組血清三酰甘油、總肝固醇 、LDL 水 平 較 NC 組、CP 組明顯升高（

P

＜0.05），AS 組、CP+AS 組血清 HDL 水平較 NC 組、CP組明顯低（

P

＜0.05）。大鼠的高脂血癥形成。高血脂是建立 AS 模型的重要條件之一。研究表明 MIF 在心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。有研究顯示急性心梗病人的血漿中 MIF 水平要高于健康對(duì)照組。MIF 在人類(lèi)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成中的各個(gè)階段由動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)細(xì)胞（如平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞和T 細(xì)胞）大量表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究顯示在正常情況下血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）中的 MIF 的 mRNA 表達(dá)呈弱陽(yáng)性，不能觀察到 MIF 蛋白表達(dá)，而在 AS 斑塊處MIF 表達(dá)顯著增高。研究表明，導(dǎo)致 AS 發(fā)生的因素（如氧化 LDL 和凝血酶）以時(shí)間和濃度依賴(lài)的方式上調(diào) MIF 表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)的研究顯示 AS 組以及 CP+AS 組中血清及動(dòng)脈組織中 MIF 表達(dá)水平較NC 組以及 CP 組較高（

P

＜0.05），與上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。MIF 在牙周炎領(lǐng)域的研究目前較少，有研究表明在人類(lèi)的齦溝液中可以檢測(cè)出 MIF 的表達(dá)，在有深牙周袋的牙周組織中 MIF 表達(dá)水平升高，而在 Lira-Junior 等的研究發(fā)現(xiàn) MIF 在正常組和牙齦炎組以及侵襲性牙周炎組的血清和唾液中的表達(dá)沒(méi)有明顯差別。在本實(shí)驗(yàn)中 NC 組以及 CP 組 MIF在血清及動(dòng)脈組織中表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此 MIF 在 CP 中的確切作用需要更多研究來(lái)證實(shí)。在 CP 組、AS 組、CP+AS 組 MIF 的血清及動(dòng)脈組織中表達(dá)水平依次升高，提示我們慢性牙周炎局部感染可能可以使血清 MIF 水平升高，從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

ICAM-1 是一種重要的表面黏附分子，在動(dòng)脈粥樣硬化形成的各個(gè)階段都有很重要的作用，已成為動(dòng)脈粥樣硬化形成的重要組成部分 。 可溶性的ICAM-1 存在于健康者及牙周炎病人的齦溝液中，在 ICAM-1 對(duì)結(jié)合上皮細(xì)胞的特異性輔助下，多形核白細(xì)胞可以進(jìn)入牙齦和牙周袋，起到殺菌的作用，具有強(qiáng)效的免疫調(diào)節(jié)和抗炎特性，ICAM-1 水平與牙周炎癥程度呈正相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在血清 中 CP 組、AS 組及 CP+AS 組 ICAM-1 的表 達(dá) 水平均高于 NC 組，其中 CP+AS 組表達(dá)水平最高，可以推測(cè)慢性牙周炎的存在可能可以使血清中 ICAM-1 表達(dá)量升高，從而影響動(dòng)脈粥樣硬化的形成；動(dòng)脈組織中 AS 組及 CP+AS 組 ICAM-1 的表達(dá)水平高于 NC組及 CP 組，CP+AS 組 ICAM-1 的表達(dá)水平略高于 AS組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢酝茰y(cè)慢性牙周炎的存在可能并沒(méi)有使動(dòng)脈組織中 ICAM-1 表達(dá)升高。

MIF 可以干擾黏附分子和細(xì)胞因子的表達(dá)，將MIF 的 RNA 沉默可降低 E-選擇蛋白、ICAM-1、血管細(xì)胞黏附分子 1、白細(xì)胞介素-8 和趨化因子 2 的表達(dá)。既往已有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明牙齦卟啉單胞菌感染血管內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)可以誘導(dǎo) MIF 及 ICAM-1 的分泌增多。 利用MIF 拮抗劑 ISO-1 中 和 MIF 后 ，ICAM-1 的表達(dá)受到明顯抑制；加入外源性 MIF 恢復(fù)其功能后 ICAM-1 表達(dá)量升高，說(shuō)明牙齦卟啉單胞菌感染血管內(nèi)皮細(xì)胞上調(diào) ICAM-1 的表達(dá)有一定的MIF 依賴(lài)性。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得出在 CP 促進(jìn) AS的進(jìn)程中 MIF 和 ICAM-1 可能起到一定的調(diào)節(jié)作用，但兩者在動(dòng)脈粥樣硬化形成過(guò)程中的相互作用在本實(shí)驗(yàn)中尚未證明，還需要其他實(shí)驗(yàn)來(lái)證實(shí)。比如利用 MIF 基因敲除的大鼠或其他體型較大的動(dòng)物建立牙周炎和動(dòng)脈粥樣硬化的復(fù)合模型檢測(cè) ICAM-1的表達(dá)情況，從而探究?jī)烧咧g的關(guān)系。本課題組可考慮后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立牙周炎合并動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型，檢測(cè)了 MIF 及 ICAM-1 在蛋白水平的表達(dá)，為牙周炎和動(dòng)脈粥樣硬化之間關(guān)系提供了一定的理論基礎(chǔ)。提示我們?cè)谂R床工作中遇到伴有慢性牙周炎的心血管疾病病人時(shí)，應(yīng)進(jìn)行早期的診斷和積極的牙周治療。完善的牙周治療可以轉(zhuǎn)化為炎性介質(zhì)領(lǐng)域和脂質(zhì)特征的標(biāo)志物的改善，從而使心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)降低。

（本文圖1～3 見(jiàn)封三）