1,8-桉葉素型互葉白千層花與葉揮發(fā)油成分分析

陳海燕 李桂珍 梁忠云

摘要 用水蒸氣蒸餾法提取1，8-桉葉素型互葉白千層花、葉的揮發(fā)性成分，采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）、氣相色譜（GC）分析揮發(fā)油成分和單萜手性化合物對映體分配，比較成分及含量之間的差異。結(jié)果表明，1，8-桉葉素型白千層花與葉揮發(fā)油的主成分均為1，8-桉葉素（67.89%，68.14%）、α-松油醇（8.14%，10.59%）、檸檬烯（7.84%，8.54%）、α-蒎烯（3.18%，3.07%），含量相差不大;單萜檸檬烯、4-松油醇、α-松油醇對映體分配差異不顯著，說明在花期時進(jìn)行加工，精油質(zhì)量不變。

關(guān)鍵詞 水蒸氣提取法;1，8-桉葉素型互葉白千層;揮發(fā)性成分;對映體分配

中圖分類號 TQ651+.2文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2021）10-0164-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.10.044

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Analysis of Volatile Oil from Flowers and Leaves of 1，8-Cineole Type Melaleuca alterniflora

CHEN Hai-yan1，2，LI Gui-zhen1，2，LIANG Zhong-yun1，2 （1.Guangxi Academy ofForestry，Nanning，Guangxi 530002;2.Guangxi Key Laboratory of Special Non-wood Forest Cultivation & Utilization，Nanning，Guangxi 530002）

Abstract The volatile components of the flowers and leaves of 1，8-cineole-type Melaleuca alterniflora were extracted by steam distillation，GC and GC-MS methods were applied to identify the components and enantiomeric distribution in these violatile oils from different parts of Melaleuca alternifolia，and the differences and relative contents of the main chemical components were compared.The results showed that the main components of the volatile oil of the flowers and leaves of 1，8-cineole-type Melaleuca alterniflora were 1，8-cineole （67.89%，68.14%），α-terpineol （8.14%，10.59%），limonene （7.84%，8.54%） and α-pinene （3.18%，3.07%），the content is not much different.Monoterpene limonene，4-terpineol and α-terpineol had no significant differences in the distribution of enantiomers，indicating that the quality of the essential oil remains unchanged during processing during the flowering period.

Key words Steam distillation;1，8-cineole-type Melaleuca alterniflora;Volatile components; Enantiomeric distribution

互葉白千層是桃金娘科（Myrlaceaca）白千層屬（Melaleuca）常綠灌木至小喬木樹種，原產(chǎn)于澳大利亞的東部，20世紀(jì)90年代初引入我國，目前在廣西、廣東、四川、江西、福建等地大面積種植，其花期在每年的3月下旬到4月中旬。利用白千層葉和小枝條進(jìn)行水蒸氣蒸餾得到的精油稱白千層油，通過測定發(fā)現(xiàn)互葉白千層油成分相同，但含量差異較大，根據(jù)主成分含量劃分為多種化學(xué)類型[1]，其中1，8-桉葉素型是值得開發(fā)的類型之一，其枝葉揮發(fā)油主成分及應(yīng)用已有研究[2-4]，柴玲等[5]研究了4-松油醇型互葉白千層的花、果、葉的揮發(fā)性成分，而1，8-桉葉素型互葉白千層花期時花、葉的揮發(fā)性成分鮮見報(bào)道，筆者用水蒸氣蒸餾提取1，8-桉葉素型白千層花與葉的揮發(fā)油，采用GC和GC-MS分別對揮發(fā)油成分及手性化合物單萜對映體分配進(jìn)行研究，并進(jìn)行比較分析，以期為花、葉同期的互葉白千層開發(fā)與利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

BRUKERTQ456氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國BRUKER公司）;Aglient 7890A氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器（美國安捷倫公司）;WAY-2S數(shù)字阿貝折射儀（上海儀電科學(xué)儀器股份公司）;可控溫旋光儀（SGW-2，上海精密科學(xué)儀器有限公司）;無水乙醇（A.R，陜西西隴化工）。

1.2 試材 選取從澳大利亞引進(jìn)的種子繁育，于2001年6月定植在廣西林業(yè)科學(xué)研究院生活區(qū)的1，8-桉葉素型互葉白千層。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 精油的提取。

2018年4月采集，將花與葉分開，裝入塑料袋取回實(shí)驗(yàn)室，參照《中華人民共和國藥典》2015年版一部附錄XD中揮發(fā)油測定法甲法中水蒸氣蒸餾來測定得油率。花和葉的得油率分別為1.71%、3.17%。樣品用無水硫酸鈉干燥過濾，備用。

1.3.2 精油的測定。精油理化指標(biāo)按照ISO 4730—2017標(biāo)準(zhǔn)[6]測定?；ê腿~折光指數(shù)（20 ℃）分別為1.461 6、1.461 0，旋光度（20 ℃）分別為 3.042°、3.057°。參照氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）的定性分析和文獻(xiàn)[3-5]結(jié)果，并按照ISO 4730—2017標(biāo)準(zhǔn)確定白千層油主要的化學(xué)成分和理化指標(biāo);用氣相色譜法進(jìn)行定量分析，面積歸一化法確定各組分的含量。

氣相色譜-質(zhì)譜定性分析條件：色譜柱為彈性石英毛細(xì)管柱BR-5（30 m × 0.25 mm × 0.25 μm），載氣為高純氦氣，接口250 ℃，分流比1∶50。質(zhì)譜條件：EI離子源，電離電壓70 eV，掃描范圍45～350 amu，全掃描方式，溶劑延遲3 min，進(jìn)樣量1.0 μL（0.5%乙醇液）。

氣相色譜定量分析條件：彈性石英毛細(xì)管柱AT35（60 m× 0.25 mm× 0.25 μm），載氣N2，流速2.5 mL/min，程序升溫是70 ℃保持1 min，以5 ℃/min升至150 ℃，再以10 ℃/min升至220 ℃，保持5 min，進(jìn)樣口250 ℃，汽化室250 ℃，分流比1∶50，進(jìn)樣量0.5 μL。

1.3.3 精油中單萜對映體分配。

吸取8 μL精油樣品溶于2 mL 無水乙醇中，混勻，備用。參照氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的定性分析和文獻(xiàn)[7-9]結(jié)果，并按照GB/T 33917—2017標(biāo)準(zhǔn)[10]測定其主要成分。

氣相色譜分析條件：Agilent 7890A氣相色譜儀。彈性石英毛細(xì)管柱HP-Chiral-20β（30 m×0.25 mm×0.25 μm），載氣N2，流速1.0 mL/min，程序升溫是70 ℃保持1 min，以4 ℃/min 升至120 ℃，以5 ℃/min升至145 ℃，以2 ℃/min升至150 ℃，保持1 min，再以10 ℃/min升至200 ℃，保持5 min，進(jìn)樣口250 ℃，汽化室250 ℃，分流比1∶50，進(jìn)樣量0.4 μL。

2 結(jié)果與分析

對花、葉精油樣品進(jìn)行 GC-MS 檢測定性，其主要色譜峰基本一致，所得到的氣-質(zhì)總離子流圖見圖 1。采用GC峰面積歸一化法定量分析，鑒定的組分峰面積之和占總峰面積的95% 以上，結(jié)果如表1所示。

從表1可以看出，1，8-桉葉素型互葉白千層花、葉的揮發(fā)油主要化學(xué)成分相同，均含有1，8-桉葉素（67.89%，68.14%）、α-松油醇（8.14%，10.59%）、檸檬烯（7.84%，8.54%）、α-蒎烯（3.18%，3.07%），含量相差不大，只有α-松油醇相差2.45%以上。廣西地方標(biāo)準(zhǔn)“互葉白千層（精）油，1，8-桉葉素型”規(guī)定[11]，γ-松油烯含量1%～20%、4-松油醇含量大于2%，該試驗(yàn)測定的花與葉的揮發(fā)油這2個成分不在該標(biāo)準(zhǔn)的范圍內(nèi)，這與梁忠云等[3]的研究結(jié)果一致，原因有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

用4-松油醇型互葉白千層油（茶樹油）做對照，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的定性分析和參考文獻(xiàn)[7-9]結(jié)果，確定手性化合物單萜α-蒎烯、檸檬烯、4-松油醇、α-松油醇的對映體出峰時間，在同樣條件確定花、葉精油的對映體，同時用非花期時的葉油做對比，所得到的氣相色譜圖見圖2，結(jié)果見表2。

在測定對照茶樹油樣品時觀察到檸檬烯的對映體，但在質(zhì)譜檢索中發(fā)現(xiàn)它與對傘花烴在同一個峰上發(fā)生重疊，無法準(zhǔn)確定量出檸檬烯的對映體分配，這與Shellie等[9]的研究結(jié)果一致。而1，8-桉葉素型互葉白千層的揮發(fā)油中未檢出對傘花烴，按照上述方法得出單萜的對映體分配。

從表2可以看出，1，8-桉葉素型互葉白千層的花、葉及非花期的枝葉揮發(fā)油手性化合物對映體分配差異不顯著，但與（+）- 4-松油醇符合ISO 4730—2017標(biāo)準(zhǔn)[6]的對照茶樹油相比，α-蒎烯、 4-松油醇、α-松油醇對映體分配差異較大，這一差異可為鑒別不同生化類型的互葉白千層提供依據(jù)。研究表明，具有手性的單萜化合物的對映體在不同植物、不同家系白千層精油中的分配差異較大[9]，結(jié)合該試驗(yàn)結(jié)果說明，來源不同的植物精油中某一單萜對映體分配應(yīng)有不同的范圍。通過研究對映體分配差異，將其作為精油的天然來源判定條件。

3 結(jié)論

作為生長周期的特殊產(chǎn)物，桉葉素型互葉白千層的花揮發(fā)油主要成分與葉的相同，均含有 α-蒎烯、1，8-桉葉素、檸檬烯、α-松油醇等成分，單萜對映體分配差異不顯著，與4-松油醇型互葉白千層相比，α-蒎烯、 4-松油醇、α-松油醇對映體分配差異較大，可作為2種生化類型區(qū)別的判定條件。該研究結(jié)果可為花期的互葉白千層的利用與研究提供理論依據(jù)。

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