• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    利用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)29份火龍果種質(zhì)染色體的倍性鑒定

    2021-06-15 12:28:40黃黎芳武志江梁桂東陸貴鋒黃鳳珠劉朝安鄧海燕
    熱帶作物學(xué)報(bào) 2021年4期
    關(guān)鍵詞:三倍體白肉四倍體

    黃黎芳 武志江 梁桂東 陸貴鋒 黃鳳珠 劉朝安 鄧海燕

    摘 ?要:火龍果為仙人掌科量天尺屬和蛇鞭柱屬植物,不同類型火龍果種質(zhì)的染色體倍性尚不明確。為明確所收集的種質(zhì)資源以及創(chuàng)制的新材料的染色體倍性,利用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)29份火龍果材料進(jìn)行了倍性鑒定。結(jié)果顯示,供試的18份種質(zhì)資源中共鑒定出二倍體火龍果14份,四倍體4份,無(wú)三倍體材料。通過(guò)不同倍性親本雜交和秋水仙素誘變所創(chuàng)制的8份后代材料經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)有二倍體材料1份,三倍體材料3份,四倍體材料4份,這表明火龍果屬間雜交和化學(xué)誘變可獲得多倍體材料。研究結(jié)果對(duì)火龍果資源的遺傳學(xué)評(píng)價(jià)以及開展倍性雜交育種提供重要的參考依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:流式細(xì)胞術(shù);火龍果;種質(zhì)資源;染色體;倍性分析中圖分類號(hào):S667??????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    Ploidy Determination of 29 Pitaya Germplasms Using Flow Cytometry

    HUANG Lifang, WU Zhijiang, LIANG Guidong, LU Guifeng, HUANG Fengzhu, LIU Chaoan,DENG Haiyan*

    Horticultural Research Institute, Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanning, Guangxi 530007, China

    Abstract: Pitaya which belongs to the cactus family includes two genus,HylocereusandSeleniereus, the ploidy levels of different pitaya germplasms are still not clear. In order to clarify the ploidy of germplasm resources and the hybrids or mutants, the ploidy of 29 pitaya materials were identified by flow cytometry. 14 of 18 germplasm materials were diploid and others were tetraploid while no triploids were available. The 8 interploid hybrids and colchicine-induced mutants were identified as 3 triploids, 4 tetraploids and 1 diploid, which showed that polyploid materials could be obtained by intergeneric hybridization and chemical mutagenesis of pitaya. The results would provide an important reference basis for genetic evaluation and ploidy cross breeding of pitaya resources.

    Keywords: flow cytometry; pitaya; germplasm resources; chromosome; ploidy analysis

    DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.04.008

    火龍果為仙人掌科(Cactaceae)量天尺屬(Hylocereus)和蛇鞭柱屬(Seleniereus)攀援性多年生植物,原產(chǎn)于中南美洲熱帶地區(qū),因其果實(shí)豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和功能作用廣受消費(fèi)者歡迎。自20世紀(jì)90年代引入中國(guó)大陸以來(lái),在我國(guó)南亞熱帶地區(qū)廣泛種植?;瘕埞N質(zhì)資源豐富,在自然界中主要存在二倍體(2n=22)和四倍體(2n=44)2種類型[1-2]。Tel-Zur等[3]報(bào)道了火龍果量天尺屬為二倍體(2n=22),蛇鞭柱屬也是二倍體(2n=22),有刺黃皮白肉種Hylocereus?megalanthus屬于異源四倍體(2n=4x=44),來(lái)源于HylocereusSeleniereus屬的自然雜交。劉順枝等[4-5]利用優(yōu)化的染色體制片技術(shù)開展了火龍果植物染色體觀察研究,并進(jìn)行了染色體核型分析,發(fā)現(xiàn)白肉火龍果(Hylocereus undatus)的染色體數(shù)目為2n=2x=22,紅肉火龍果(Hylocereus polyrhizus)染色體數(shù)目為2n=2x=22。因火龍果植物包含2個(gè)屬以及其屬間雜交種,通過(guò)種質(zhì)資源收集得到的除原生種外,還有許多育種中間材料,其倍性類型不明確。不同倍體間雜交是火龍果育種經(jīng)常采用的方法之一,這使得雜交后代植株的倍性水平復(fù)雜多樣,因此鑒別火龍果種質(zhì)資源及創(chuàng)制的后代植株的倍性,在火龍果育種實(shí)踐中非常必要。

    染色體計(jì)數(shù)法和染色體核型分析可以精確鑒定火龍果倍性,但其操作耗時(shí),不適宜大規(guī)模鑒定倍性。流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,F(xiàn)CM)是利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析、分選的技術(shù),采用光學(xué)系統(tǒng)對(duì)高速流動(dòng)的單細(xì)胞懸浮液進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量和信號(hào)處理得到的DNA含量分布曲線,可以直接觀測(cè)植物倍性。近年來(lái),流式細(xì)胞儀檢測(cè)已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、細(xì)胞周期分析及植物基因組大小估算等研究中。迄今在蘋果[6]、獼猴桃[7]、草莓[8]、越橘[9]、梨[10]和荔枝[11]等果樹上均證實(shí)了流式細(xì)胞光度術(shù)鑒定植株染色體倍性的可靠性。本研究利用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)收集的火龍果不同種質(zhì)資源類型和創(chuàng)制的后代植株進(jìn)行染色體倍性鑒定研究,以期挖掘更多的多倍體種質(zhì),為火龍果種質(zhì)資源的創(chuàng)新和開發(fā)利用提供參考。

    1??材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 ?供試種質(zhì)??供試樣品共29個(gè)(表1),采集于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南寧火龍果種質(zhì)資源圃。材料來(lái)源于中國(guó)臺(tái)灣、越南、中美洲等火龍果種植地區(qū)。試驗(yàn)于2019年11月采集植株的幼嫩肉質(zhì)莖尖供染色體倍性分析。

    1.1.2 ?試劑??(1)解離緩沖液(Tris·MgCl2 緩沖液):200?mmol/L Tris,4?mmol/L MgCl2,0.5%(V/V)TritionX-100;用1 mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至7.5,0.22?mm濾膜過(guò)濾除菌,4?℃保存。(2)染色緩沖液:解離液緩沖液中加入20?mg/L碘化丙啶(PI)和20 mg/L的RNA酶,現(xiàn)配現(xiàn)用。

    1.1.3 ?儀器與設(shè)備??流式細(xì)胞儀型號(hào)為美國(guó)BD(Becton, Dickinson and Company)公司生產(chǎn)的BD660517 C6-Plus。染色體含量的分布圖像由流式細(xì)胞儀自動(dòng)測(cè)定,相關(guān)參數(shù)的調(diào)控參照儀器說(shuō)明。光源由波長(zhǎng)為488?nm氬離子激發(fā),染色的DNA分子促發(fā)熒光,測(cè)定其熒光強(qiáng)度,與測(cè)定裝置相連的計(jì)算機(jī)分析軟件即可對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)所有測(cè)試樣品的細(xì)胞核DNA含量是以二倍體對(duì)照為標(biāo)準(zhǔn)的相對(duì)值,每次檢測(cè)至少收集5000個(gè)細(xì)胞顆粒。

    1.2方法

    (1)稱取約50 mg的葉片組織,蒸餾水洗凈表面塵土,濾紙吸干后放入預(yù)冷的培養(yǎng)皿內(nèi),加預(yù)冷的解離液1?mL解離緩沖液;用鋒利的刀片一次性快速切碎,整個(gè)過(guò)程材料需浸沒在解離液中,以便更好地游離細(xì)胞核。(2)吸取培養(yǎng)皿內(nèi)的解離液,用300目的濾膜過(guò)濾至1.5 mL離心管中,15?000?r/min離心15~20 s,棄上清。(3)加200?μL預(yù)冷的染色緩沖液重懸,37?℃孵育15?min,上機(jī)檢測(cè)。

    2??結(jié)果與分析

    2.1流式細(xì)胞倍性檢測(cè)

    以二倍體紅皮紅肉火龍果‘金都1號(hào)為對(duì)照,流式細(xì)胞儀測(cè)得二倍體品種染色體的峰值熒光強(qiáng)度為187×103,表現(xiàn)為較好的單峰;三倍體品種DNA相對(duì)含量是二倍體的1.5倍,呈現(xiàn)為1.5倍二倍體的單峰;四倍體品種染色體相對(duì)含量是二倍體的2倍,呈現(xiàn)為2倍二倍體的單峰(圖1)。

    2.2不同類型火龍果種質(zhì)資源的染色體倍性

    經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)收集的18份不同類型的火龍果種質(zhì)材料染色體倍性,從表2可見,其中量天尺屬紅皮白肉品種‘越南白肉、青皮白肉品種‘青龍和無(wú)刺黃皮白肉品種‘無(wú)刺黃龍均鑒定為二倍體,與對(duì)照‘霸王花倍性一致。鑒定發(fā)現(xiàn)4份四倍體種質(zhì)材料分別為‘哥倫比亞黃龍‘燕窩果‘美國(guó)糖龍‘紅麒麟。其中‘燕窩果來(lái)源于‘哥倫比亞黃龍后代,表現(xiàn)出四倍體的特征;‘美國(guó)糖龍和‘紅麒麟為量天尺屬紅皮紅肉品種二倍體與‘哥倫比亞黃龍四倍體的雜交后代,也表現(xiàn)出四倍體的特征。其余7個(gè)量天尺屬紅皮紅肉品種經(jīng)鑒定均為二倍體。蛇鞭柱屬的‘黑龍和屬間雜交種‘白水晶‘紅肉燕窩果‘小葉紅水晶經(jīng)鑒定為二倍體材料。未發(fā)現(xiàn)有三倍體種質(zhì)材料。

    2.3 雜交后代及誘變材料的染色體倍性水平

    本課題組前期利用2個(gè)S. megalanthus種質(zhì)A13(4x)和C59(4x)分別與H. undatus種質(zhì)MB(2x)雜交,獲得后代A13-MB、C59-MB1和C59-MB2。經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)A13-MB為四倍體,C59-MB1和C59-MB2為三倍體植株(表3),說(shuō)明火龍果四倍體與二倍體屬間雜交可產(chǎn)生一定比例的三倍體和四倍體。而C59自交產(chǎn)生的F1代植株C59+經(jīng)鑒定為四倍體,該結(jié)果與四倍體自交后代倍性預(yù)期一致。育種中間材料C51經(jīng)鑒定為三倍體,三倍體C51與二倍體MB雜交F1代未發(fā)現(xiàn)多倍體,僅產(chǎn)生二倍體后代C51-MB。流式細(xì)胞儀測(cè)得的三倍體和四倍體材料結(jié)果基本符合預(yù)期。

    YD-1、YD-2為本課題組前期利用二倍體材料H. polyrhizus種子經(jīng)秋水仙素加倍后產(chǎn)生的誘變植株,其細(xì)胞核DNA含量直方圖上出現(xiàn)單一的波峰,且其峰熒光值與對(duì)照相差近一倍,說(shuō)明二者染色體數(shù)目加倍,其植株倍性預(yù)測(cè)為四倍體。前期形態(tài)學(xué)觀察也表現(xiàn)出子葉顯著增大增厚,植株健壯,生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)等特征。誘變植株未發(fā)現(xiàn)存在細(xì)胞核含量成倍數(shù)性差異的兩群細(xì)胞,說(shuō)明無(wú)倍性嵌合體出現(xiàn)。

    3??討論

    通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定植株倍性,是早期研究者最常用的方法?;瘕埞谋扼w材料是異源四倍體,在植株形態(tài)上與其他二倍體植株有較大差異,但僅通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察不能精準(zhǔn)判斷火龍果的倍性,尤其在幼苗期,不同倍性材料形態(tài)學(xué)差異并不顯著。利用流式細(xì)胞術(shù)能在幼苗期鑒定植株倍性,將為高效準(zhǔn)確篩選雜交育種材料提供便利。本研究中,測(cè)試的18份種質(zhì)資源僅‘越南白肉經(jīng)劉順枝等[4]利用染色體制片法鑒定為二倍體,‘哥倫比亞黃龍經(jīng)Tel-Zur等[12]利用流式細(xì)胞術(shù)鑒定為四倍體,其余16份材料均為本研究首次分析確定其染色體倍性。經(jīng)測(cè)試,‘越南白肉和‘哥倫比亞黃龍染色體倍性與前人報(bào)道一致。其余16份種質(zhì)資源按不同種屬類型,其倍性鑒定結(jié)果與Tel-Zur等[12]報(bào)道的相應(yīng)類型的材料倍性一致,量天尺屬的紅皮白肉、青皮白肉和無(wú)刺黃皮白肉品種均被認(rèn)為是二倍體,而量天尺屬的紅皮紅肉、蛇鞭柱屬的紅皮紅肉和紅皮白肉種也均為二倍體。而形態(tài)學(xué)上與S. megalanrus具有類似特征的帶刺黃皮白肉及其后代、帶刺橘皮紅肉品種均為四倍體。18份種質(zhì)資源材料中未檢測(cè)到三倍體植株,可能火龍果天然雜交出現(xiàn)三倍體的幾率較低。

    火龍果的刺黃皮白肉四倍體種H. megalanrus既具有量天尺屬類似的三棱柱狀肉質(zhì)莖,又像蛇鞭柱屬一般具有帶刺的果實(shí),果實(shí)具有濃郁的風(fēng)味,被用于培育優(yōu)良的多倍體雜交種,以期獲得具更優(yōu)良性狀如更大的果實(shí)、果皮不帶刺和更高的產(chǎn)量的品種。根據(jù)這些育種目標(biāo),研究人員進(jìn)行了屬間雜交和化學(xué)誘變等多倍體育種,可產(chǎn)生性狀改良的二倍體和多倍體后代應(yīng)用于育種實(shí)踐中[13]。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定的11個(gè)雜交親本和后代以及誘變植株中,親本A13和C59為四倍體,MB為二倍體;創(chuàng)制的種質(zhì)中發(fā)現(xiàn)1個(gè)二倍體C51-MB;3個(gè)三倍體分別是C59-MB1、C59-MB2、C51;4個(gè)四倍體分別是A13-MB、C59+、YD-1、YD-2;倍性突變材料未見有二倍體和四倍體的嵌合體或混倍體出現(xiàn)。本研究中HylocereusSeleniereus的屬間雜交可獲得一定比例的二倍體、三倍體和四倍體,但未像前人報(bào)道一樣獲得五倍體和六倍體[14],可能與本試驗(yàn)所用雜交后代材料較少有關(guān)。而三倍體C51作為母本經(jīng)與二倍體父本MB(H. undatus)雜交得出二倍體后代C51-MB,說(shuō)明該三倍體是部分可育的,至少可產(chǎn)生具有功能的雌配子,在與花粉供體雜交的情況下最終形成可存活的后代。Tel-Zur等[15]推測(cè)異源三倍體產(chǎn)生功能性雌雄配子的比例較高是由于染色體平衡分離的結(jié)果。本試驗(yàn)僅停留在對(duì)火龍果植物進(jìn)行染色體倍性鑒定上,而基于火龍果植物細(xì)胞學(xué)方面的研究較少,下一步將繼續(xù)開展火龍果多倍體的核型分析、氣孔大小和密度、可育性等方面研究,為火龍果育種提供更多細(xì)胞學(xué)支撐。

    另外,本研究發(fā)現(xiàn)同一倍性內(nèi)不同品種火龍果細(xì)胞核DNA含量差異不顯著,倍性間細(xì)胞核DNA含量成倍數(shù)性差異,進(jìn)一步證明利用流式細(xì)胞光度術(shù)測(cè)定細(xì)胞核DNA相對(duì)含量來(lái)鑒定火龍果倍性是可行的。與利用染色體計(jì)數(shù)法相比,流式細(xì)胞光度術(shù)測(cè)定核DNA含量試樣處理簡(jiǎn)單,試材用量小(50 mg左右),測(cè)量較準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好,適用于樣本較多的植物倍性檢測(cè)分析,對(duì)于多倍體后代的早期鑒定具有較大應(yīng)用價(jià)值,但是缺陷是不能獲得更為詳細(xì)的染色體信息。

    參考文獻(xiàn)

    [1]Ross R. Chromosome counts, cytology and reproduction in the Cactaceae[J]. American Journal of Botany, 1981, 68(4): 463-470.

    [2]Lichtenzveig J, Abbo S, Nerd A,et al.?Cytology and mating systems in the climbing cactiHylocereusandSelenicereus[J]. American Journal of Botany, 2000, 87(7): 1058-1065.

    [3]Tel-Zur N, Abbo S, Bar-Zvi D,et al. Genetic relationships amongHylocereus andSelenicereus vine cacti (Cactaceae): Evidence from hybridization and cytological studies[J]. Annals of Botany, 2004, 94(4): 527-534.

    [4]劉順枝, 劉政浩, 林潤(rùn)怡, 等. 白肉火龍果染色體制片技術(shù)及核型分析[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015, 42(3): 115-118, 193.

    [5]劉順枝, 周浩彬, 林潤(rùn)怡, 等. 紅肉火龍果氣生根染色體制片優(yōu)化及核型分析[J]. 北方園藝, 2015(12): 71-76.

    [6]李??赟, 石蔭坪, 束懷瑞, 等. 利用流式細(xì)胞光度術(shù)鑒定蘋果倍性的研究[J]. 西北植物學(xué)報(bào), 1998, 18(4): 499-504.

    [7]朱道圩, 楊??宵, 郅玉寶, 等. 用流式細(xì)胞儀鑒定中華獼猴桃的多倍體[J]. 植物生理學(xué)通訊, 2007, 43(5): 905-908.

    [8]于紅梅, 王??靜, 趙密珍, 等. 利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)草莓倍性方法的優(yōu)化[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2012, 43(10): 1530-1533.

    [9]?閆東玲, 趙麗娜, 王賀新, 等. 利用流式細(xì)胞術(shù)鑒定東北地區(qū)主要越桔屬植物染色體倍性[J]. 分子植物育種, 2019, 17(4): 1257-1263.

    [10]田路明, 齊??丹, 曹玉芬, 等. 利用流式細(xì)胞儀鑒定梨種質(zhì)資源染色體倍性[J]. 中國(guó)果樹, 2018(3): 29-32.

    [11]賴??彪, 吳傳龍, 秦永華, 等. 流式細(xì)胞儀測(cè)定荔枝倍性和基因組大小的細(xì)胞核提取液篩選與應(yīng)用[J]. 果樹學(xué)報(bào), 2019, 36(7): 939-946.

    [12]Tel-Zur N, Mizrahi Y, Cisneros A,et al. Phenotypic and genomic characterization of vine cactus collection (Cactaceae)[J]. Genetic Resources and Crop Evolution, 2011, 58: 1075-1085.

    [13]Tel-Zur N, Dudaib M, Ravehc E,et al.In situinduction of chromosome doubling in vine cacti (Cactaceae)[J]. Scientia Horticulturae, 2011, 129: 570-576.

    [14]?Cisneros A, Tel-Zur N. Genomic analysis in threeHylocereus species and their progeny:Evidence for introgressive hybridization and gene flow[J]. Euphytica, 2013, 194: 109-124.

    [15]?Tel-Zur N, Abbo S, Mizrahib Y. Cytogenetics of semi-fertile triploid and aneuploid intergeneric vine cacti hybrids[J]. Journal of Heredity, 2005, 96(2): 124-131.

    責(zé)任編輯:沈德發(fā)

    猜你喜歡
    三倍體白肉四倍體
    水產(chǎn)動(dòng)物三倍體育種技術(shù)研究綜述
    小果型西瓜四倍體誘變及其鑒定分析
    我國(guó)三倍體牡蠣育苗、養(yǎng)殖現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策
    烹飪大師話名肴
    細(xì)數(shù)你吃的那些“不孕不育”食物
    三倍體湘云鯽2號(hào)線粒體DNA含量與其不育的相關(guān)性研究
    四倍體泡桐育苗高效管理技術(shù)綜述
    四倍體巴戟天根的結(jié)構(gòu)與其蒽醌類化合物的關(guān)系
    中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:07:54
    “寒富”蘋果與其同源四倍體耐鹽差異研究
    德國(guó)酸菜白肉
    成人亚洲精品一区在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 一级毛片女人18水好多 | 1024视频免费在线观看| 多毛熟女@视频| 最近手机中文字幕大全| 99久久人妻综合| 欧美激情极品国产一区二区三区| 91国产中文字幕| 亚洲国产中文字幕在线视频| 九色亚洲精品在线播放| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 91麻豆av在线| av不卡在线播放| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 黄色一级大片看看| 一区二区av电影网| 9191精品国产免费久久| 国产野战对白在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 自线自在国产av| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 中文字幕人妻熟女乱码| 热re99久久国产66热| 亚洲欧美激情在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 美女主播在线视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 妹子高潮喷水视频| 99re6热这里在线精品视频| 嫁个100分男人电影在线观看 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 乱人伦中国视频| av有码第一页| 亚洲免费av在线视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲成色77777| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 国产精品久久久久久精品古装| 国产又爽黄色视频| 另类亚洲欧美激情| 色网站视频免费| 嫁个100分男人电影在线观看 | 丝袜喷水一区| 国产男女超爽视频在线观看| 精品福利永久在线观看| 国产精品九九99| 精品视频人人做人人爽| 亚洲少妇的诱惑av| www日本在线高清视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲第一av免费看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 爱豆传媒免费全集在线观看| av不卡在线播放| 99久久人妻综合| 国产欧美日韩精品亚洲av| 最新的欧美精品一区二区| xxx大片免费视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| tube8黄色片| 香蕉丝袜av| av片东京热男人的天堂| 国产精品熟女久久久久浪| 91成人精品电影| 夫妻性生交免费视频一级片| 各种免费的搞黄视频| 久久 成人 亚洲| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产成人精品在线电影| 91麻豆av在线| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲,欧美精品.| 国产黄色免费在线视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 午夜免费鲁丝| 国产在视频线精品| 青春草亚洲视频在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产91精品成人一区二区三区 | 久久热在线av| 男女边吃奶边做爰视频| 免费在线观看日本一区| 中文字幕最新亚洲高清| 中国国产av一级| √禁漫天堂资源中文www| xxx大片免费视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 免费在线观看完整版高清| 日韩人妻精品一区2区三区| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产一级毛片在线| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 精品免费久久久久久久清纯 | 欧美激情 高清一区二区三区| 这个男人来自地球电影免费观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 免费在线观看黄色视频的| 少妇粗大呻吟视频| 一级a爱视频在线免费观看| 色播在线永久视频| 我要看黄色一级片免费的| 男人舔女人的私密视频| 美女午夜性视频免费| 国产野战对白在线观看| 好男人电影高清在线观看| 久久国产精品影院| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲精品国产区一区二| 国产片特级美女逼逼视频| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲精品第二区| 国精品久久久久久国模美| 制服人妻中文乱码| 国产熟女欧美一区二区| www.999成人在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 国产伦理片在线播放av一区| 免费观看av网站的网址| 久久久久久久久久久久大奶| 首页视频小说图片口味搜索 | 超碰97精品在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 在线精品无人区一区二区三| 免费高清在线观看日韩| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 成人国产av品久久久| 亚洲国产精品999| 看免费成人av毛片| 亚洲,欧美精品.| 香蕉丝袜av| 久9热在线精品视频| 久久久精品94久久精品| 午夜福利影视在线免费观看| 午夜视频精品福利| avwww免费| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 免费在线观看影片大全网站 | 波野结衣二区三区在线| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲 国产 在线| 久久久久精品人妻al黑| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久久精品94久久精品| 一级毛片我不卡| 亚洲精品国产区一区二| 国产日韩欧美在线精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲成国产人片在线观看| 精品少妇内射三级| 又紧又爽又黄一区二区| www.自偷自拍.com| 亚洲国产精品999| 国产亚洲精品久久久久5区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲人成网站在线观看播放| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 午夜福利,免费看| 99久久精品国产亚洲精品| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲精品一二三| 精品国产乱码久久久久久小说| 又黄又粗又硬又大视频| 国产不卡av网站在线观看| 久9热在线精品视频| 又黄又粗又硬又大视频| 看免费成人av毛片| 久久久精品94久久精品| 日本五十路高清| 人成视频在线观看免费观看| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲精品一二三| 99热国产这里只有精品6| 老司机亚洲免费影院| 久久毛片免费看一区二区三区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 男女午夜视频在线观看| 国产黄频视频在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 久久鲁丝午夜福利片| 操美女的视频在线观看| 99久久综合免费| 久久人人97超碰香蕉20202| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 午夜福利在线免费观看网站| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日韩视频在线欧美| 黄色一级大片看看| 久久免费观看电影| 欧美黄色淫秽网站| 久久精品国产综合久久久| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲国产av新网站| 热re99久久精品国产66热6| 国产av精品麻豆| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 三上悠亚av全集在线观看| 国产成人精品无人区| 亚洲情色 制服丝袜| 免费黄频网站在线观看国产| 婷婷色综合大香蕉| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 看免费av毛片| 久久天堂一区二区三区四区| xxx大片免费视频| 飞空精品影院首页| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一本久久精品| 91精品三级在线观看| 精品久久蜜臀av无| 嫩草影视91久久| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲成人手机| 亚洲精品美女久久av网站| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲伊人色综图| 国产精品偷伦视频观看了| 最近手机中文字幕大全| 亚洲中文av在线| 男女边吃奶边做爰视频| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 一级a爱视频在线免费观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜福利视频精品| 欧美黄色片欧美黄色片| www.精华液| 嫩草影视91久久| 欧美日韩成人在线一区二区| 水蜜桃什么品种好| 国产亚洲精品久久久久5区| 日韩 亚洲 欧美在线| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲欧洲日产国产| 精品一区二区三卡| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲图色成人| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲欧美日韩另类电影网站| av网站免费在线观看视频| 午夜91福利影院| 欧美黑人精品巨大| 亚洲av成人精品一二三区| 秋霞在线观看毛片| 亚洲黑人精品在线| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 91麻豆av在线| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲av男天堂| 亚洲 国产 在线| 国产精品成人在线| 欧美性长视频在线观看| www.av在线官网国产| svipshipincom国产片| 新久久久久国产一级毛片| 欧美精品一区二区免费开放| 又紧又爽又黄一区二区| 日韩一本色道免费dvd| 中文字幕精品免费在线观看视频| 大陆偷拍与自拍| 色视频在线一区二区三区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 美女视频免费永久观看网站| 嫁个100分男人电影在线观看 | 日本色播在线视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产福利在线免费观看视频| 日本欧美国产在线视频| 女人久久www免费人成看片| 两个人看的免费小视频| 另类亚洲欧美激情| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 午夜免费成人在线视频| 视频区图区小说| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 大型av网站在线播放| 一本久久精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久青草综合色| a级片在线免费高清观看视频| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜精品国产一区二区电影| 99香蕉大伊视频| 秋霞在线观看毛片| 丝袜人妻中文字幕| 9热在线视频观看99| 国产精品av久久久久免费| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 欧美黄色片欧美黄色片| 9色porny在线观看| 亚洲av美国av| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 男人添女人高潮全过程视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| www.自偷自拍.com| 精品久久久久久电影网| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日本wwww免费看| 老司机靠b影院| 中文欧美无线码| 国产精品免费视频内射| 久久精品成人免费网站| 一二三四在线观看免费中文在| 免费观看av网站的网址| 日本欧美国产在线视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲精品国产av成人精品| 国产成人精品在线电影| netflix在线观看网站| 女性生殖器流出的白浆| 色播在线永久视频| 大陆偷拍与自拍| 在线观看免费高清a一片| 久久久欧美国产精品| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久热这里只有精品99| 亚洲国产欧美在线一区| 免费少妇av软件| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲欧美色中文字幕在线| 日本vs欧美在线观看视频| www.自偷自拍.com| 99久久精品国产亚洲精品| 韩国精品一区二区三区| 免费不卡黄色视频| 亚洲国产精品国产精品| 一级毛片 在线播放| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲av成人精品一二三区| 18禁观看日本| 日韩制服骚丝袜av| 日本91视频免费播放| 七月丁香在线播放| 国产成人系列免费观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 午夜福利视频在线观看免费| 一本色道久久久久久精品综合| 91成人精品电影| 亚洲av男天堂| 搡老岳熟女国产| 在线av久久热| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产xxxxx性猛交| 爱豆传媒免费全集在线观看| 美女中出高潮动态图| 2018国产大陆天天弄谢| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 婷婷丁香在线五月| 精品视频人人做人人爽| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 精品欧美一区二区三区在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 大片电影免费在线观看免费| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久久久久久久免费视频了| 岛国毛片在线播放| 咕卡用的链子| 性色av乱码一区二区三区2| 热99国产精品久久久久久7| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 精品久久久精品久久久| 久久99一区二区三区| 手机成人av网站| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 久久精品久久久久久噜噜老黄| 91字幕亚洲| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 好男人电影高清在线观看| 国产一区二区在线观看av| 99久久人妻综合| 亚洲av男天堂| 国产日韩欧美在线精品| 欧美少妇被猛烈插入视频| 蜜桃在线观看..| 久久午夜综合久久蜜桃| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产av国产精品国产| 久久精品人人爽人人爽视色| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 热99国产精品久久久久久7| 欧美在线一区亚洲| 国产精品一二三区在线看| 久久精品亚洲av国产电影网| 晚上一个人看的免费电影| 欧美精品一区二区免费开放| 九色亚洲精品在线播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 七月丁香在线播放| 超碰成人久久| 色网站视频免费| 午夜91福利影院| 国产成人精品在线电影| 国产av国产精品国产| 国产在线视频一区二区| 色视频在线一区二区三区| 午夜福利一区二区在线看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 超碰97精品在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 不卡av一区二区三区| 99精国产麻豆久久婷婷| 大片免费播放器 马上看| 国产欧美日韩一区二区三 | 国产淫语在线视频| 十八禁网站网址无遮挡| 精品久久久久久电影网| 波多野结衣av一区二区av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产淫语在线视频| 久久综合国产亚洲精品| 午夜福利在线免费观看网站| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 日韩一区二区三区影片| 国产福利在线免费观看视频| 无限看片的www在线观看| 国产99久久九九免费精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久99精品国语久久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美激情高清一区二区三区| 韩国精品一区二区三区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲欧美一区二区三区国产| 一区在线观看完整版| 久久久精品区二区三区| 亚洲国产av新网站| 日韩电影二区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产黄色视频一区二区在线观看| 成年人黄色毛片网站| www.自偷自拍.com| 久久久国产一区二区| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲,一卡二卡三卡| 免费高清在线观看日韩| 水蜜桃什么品种好| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 久久毛片免费看一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 成人免费观看视频高清| 2021少妇久久久久久久久久久| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久久免费高清国产稀缺| 一区二区av电影网| h视频一区二区三区| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲国产日韩一区二区| 99久久99久久久精品蜜桃| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲天堂av无毛| 午夜免费成人在线视频| 久久久精品94久久精品| 亚洲久久久国产精品| 咕卡用的链子| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产成人欧美在线观看 | 午夜91福利影院| 老鸭窝网址在线观看| 欧美日韩黄片免| 久久这里只有精品19| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 91老司机精品| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 大话2 男鬼变身卡| 婷婷色av中文字幕| 亚洲免费av在线视频| 人妻 亚洲 视频| 欧美大码av| 一二三四社区在线视频社区8| 一本综合久久免费| 亚洲国产欧美一区二区综合| 纯流量卡能插随身wifi吗| 91麻豆av在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲欧美清纯卡通| 成人手机av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品免费大片| 亚洲国产日韩一区二区| 欧美性长视频在线观看| 久久九九热精品免费| 在线观看人妻少妇| 久久久精品94久久精品| 在线天堂中文资源库| 老司机亚洲免费影院| 欧美日韩视频精品一区| 少妇精品久久久久久久| 久久久久久久久免费视频了| 国产伦人伦偷精品视频| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲久久久国产精品| 亚洲欧美清纯卡通| 日本av免费视频播放| 午夜免费成人在线视频| 中国国产av一级| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 曰老女人黄片| 黄色片一级片一级黄色片| 久热这里只有精品99| 精品高清国产在线一区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲少妇的诱惑av| 两个人看的免费小视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲成国产人片在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精品熟女久久久久浪| 免费观看a级毛片全部| 精品一区二区三卡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美日韩亚洲高清精品| √禁漫天堂资源中文www| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 一级黄色大片毛片| 国产97色在线日韩免费| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲精品国产av成人精品| 两性夫妻黄色片| 亚洲第一av免费看| 中文字幕av电影在线播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久久久久人人人人人| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产精品免费视频内射| av片东京热男人的天堂| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产片特级美女逼逼视频| 女警被强在线播放| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美日韩视频精品一区| 国产又爽黄色视频| 午夜福利视频精品| 免费高清在线观看视频在线观看| 少妇精品久久久久久久| 日日夜夜操网爽| 男的添女的下面高潮视频| av线在线观看网站| 欧美大码av| 精品免费久久久久久久清纯 | 91麻豆av在线| 女性生殖器流出的白浆| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 国产日韩欧美在线精品| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 美女大奶头黄色视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 交换朋友夫妻互换小说| 午夜免费成人在线视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产福利在线免费观看视频| 老熟女久久久| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 男女免费视频国产| 国产深夜福利视频在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲黑人精品在线| 国产亚洲精品第一综合不卡| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 1024视频免费在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久 成人 亚洲| 欧美日韩成人在线一区二区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 大香蕉久久成人网| 美女午夜性视频免费| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美日韩视频精品一区| 午夜福利一区二区在线看| 老司机深夜福利视频在线观看 | 美女福利国产在线| 十八禁人妻一区二区| 国产精品久久久av美女十八| 啦啦啦视频在线资源免费观看|