止咳平喘合劑中藥用成分東莨菪堿的安全范圍研究

楊勇幫 代薇薇

摘要：目的 測定止咳平喘合劑中東莨菪堿的含量，根據(jù)東莨菪堿的毒性用法用量判定是否符合藥用量規(guī)定，并判定出止咳平喘合劑的用法用量是否在安全用量范圍內(nèi)。 方法 色譜柱采用ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm 5-Micron），流動相為甲醇—水（40∶60∶含0.02 mol·L-1醋酸鈉、0.02%三乙胺、用冰醋酸調(diào)至pH為6），流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為205 nm，柱溫是30℃。 結(jié)果 氫溴酸東莨菪堿在0.004～>0.016 mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9999，平均回收率為100.1%，RSD=1.6。止咳平喘合劑成人每次口服量為50 mL，實驗得到止咳平喘合劑中東莨菪堿含量為0.0075 mg·mL-1，換算即得成人每次口服東莨菪堿量為0.375 mg。另《中國藥典》2015年版一部規(guī)定洋金花內(nèi)服用量為0.3～>0.6 g，洋金花原料以東莨菪堿計不得少于0.15%，折算東莨菪堿量為0.45～>0.9 mg，得知止咳平喘合劑中東莨菪堿的含量在相關(guān)規(guī)定的用藥安全范圍內(nèi)。 結(jié)論 該方法可用于止咳平喘合劑中東莨菪堿的含量測定，本方法簡單便捷、準確度高。

關(guān)鍵詞：止咳平喘合劑;洋金花;東莨菪堿;HPLC;含量

中圖分類號：R285.5 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2021）04-0080-05

止咳平喘合劑是醫(yī)院住院部用來治療哮喘咳嗽的協(xié)訂處方，特別是中老年患者臨床效果顯著，治愈率高。其處方中的洋金花平喘止咳力強，適用于喘咳無痰，尤宜于寒性哮喘[1]。但本品有毒用藥安全備受關(guān)注，對止咳平喘合劑處方質(zhì)量標準進行研究，特別是對方中的東莨菪堿含量進行測定，保證臨床患者的用藥安全有效，意義重大。

洋金花為茄科植物白花曼陀羅 Datura metel L.的干燥花。4～>11月初開時采收，曬干或低溫干燥。具有平喘止咳，解痙定痛等功效[3]。在止咳平喘合劑中主要效用就是止咳平喘，與枇杷葉配伍使用，有清肺化痰、止咳平喘之功。洋金花中的主要成分是莨菪烷型生物堿，其中以東莨菪堿為主、莨菪堿次之，還有阿托品等[2]。東莨菪堿有毒，使用時需控制其用量。東莨菪堿口服極量為5毫克/次，致死量為8毫克左右[4]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（Agilent 1260）、電子天平（賽多利斯BP211D-OCE）、紫外可見分光光度計（Agilent cary60）等。

1.2 試藥 止咳平喘合劑（醫(yī)院自制）、 氫溴酸東莨菪堿對照品（中國食品藥品檢定研究院 批號：100049-201310，含量以91.7%）、甲醇（色譜純）、冰醋酸（分析純）、 純化水（超純水）等。

2 方法條件確定

2.1 紫外下檢測波長掃描 紫外下多次測定得到對照品在紫外下最大吸收波長為195、205、215 nm。圖1所示，波長在205 nm時吸光度最大為3.249。

2.2 篩選流動相 流動相一：甲醇-水（40∶60;0.02 mol·L-1磷酸二氫鉀、0.2%三乙胺、用磷酸調(diào)至pH為2），流動相二：甲醇-水（40∶60;0.02 mol·L-1醋酸鈉、0.02%三乙胺、用冰醋酸調(diào)至pH為6）。如圖2

所示，流動相一，對照品出現(xiàn)兩個峰，保留時間較短;流動相二，對照品出現(xiàn)一個峰，保留時間較適宜。最終選定，流動相為流動相二。

2.3 柱溫 在20、30、40℃ 3個不同的柱溫下，平行進行實驗3次，篩選出比較適宜的柱溫。經(jīng)過試驗30℃時的出峰時間最短，最終選定柱溫為30℃。

2.4 色譜柱 通過比較不同的色譜柱，最終確定使用ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm 5-Micron）分離效果良好。

2.5 樣品提取方法 對使用離心、中性氧化鋁柱分離、氯仿萃取等方法進行比較分析并優(yōu)化最終確定提取方法為：精密量取樣品10 mL，用氨水調(diào)至堿性（pH 8～>9），再用氯仿萃取4次，每次10 mL。合并4次的氯仿液，置水浴上80℃蒸干。殘渣加甲醇溶解，并定容至5 mL。

3 溶液配制

3.1 對照品溶液的制備 精密稱取10 mg氫溴酸東莨菪堿，用甲醇溶解定容至25 mL，制得0.4mg·mL-1的溶液，再取5 mL溶液用甲醇定容至50 mL，制得0.04 mg·mL-1的對照品溶液。

3.2 樣品溶液的處理 精密量取樣品10 mL置分液漏斗中，用氨水調(diào)至堿性（pH8-9），再用三氯甲烷提取4次，每次10 mL。合并氯仿溶液，置80℃水浴上蒸干。殘渣加甲醇溶解至5 mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

3.3 陰性對照溶液的處理 取不含洋金花藥材的空白樣品照樣品溶液處理方法制備，即得陰性對照溶液。

4 色譜條件

固定相：ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm 5-Micron），流動相：甲醇-水（40∶60;0.02 mol·L-1醋酸鈉、0.02%三乙胺、用冰醋酸調(diào)至pH為6），柱溫：30℃，進樣量對照溶液10 μL、樣品溶液20 μL，檢測波長：205 nm。

5 檢測方法及結(jié)果

5.1 專屬性考察 按樣品溶液處理方法處理陰性對照一份，進樣20 μL。如圖3所示，陰性對照在與對照品相近的保留時間段未出現(xiàn)樣品峰，說明其它組分對實驗無干擾。

5.2 線性關(guān)系考察

5.2.1 標準曲線的配制 取0.4 mg·mL-1對照品母液，加甲醇分別配制成濃度為0.16、0.08、0.04、0.02、0.01、0.005 mg·mL-1的溶液。

5.2.2 線性關(guān)系的測定 取由對照品母液配制而成的6份溶液各一份，用微孔濾膜過濾，進樣，測定峰面積，計算濃度和峰面積的回歸方程，最后計算r值。見表1及圖4。

氫溴酸東莨菪堿在0.005～>>0.16 mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r為0.9999。

5.3 精密度實驗 取濃度為0.04 mg·mL-1的對照品溶液，平行進樣5次，每次進樣10 μL，測定峰面積，計算RSD值。見表2。RSD值為0.27，實驗的精密度良好。

5.4 穩(wěn)定性實驗 取止咳平喘合劑樣品溶液按照樣品溶液處理方法處理一份，在0、0.5、4、8、32 h分別進樣20 μL，分別測定峰面積，計算RSD值。見表3。

RSD值為1.18，說明氫溴酸東莨菪堿在0～>32 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

5.5 重復(fù)性實驗 按照樣品溶液處理方法，平行處理5個樣品溶液，每個樣品進樣20 ul，測定峰面積，計算各個樣品溶液中氫溴酸東莨菪堿的含量，計算含量的RSD值。見表4。RSD值為1.024，說明在進行此實驗時，進樣系統(tǒng)的重復(fù)性良好。

5.6 樣品溶液中氫溴酸東莨菪堿的含量比較 按照樣品溶液處理方法平行處理三個批次的樣品溶液各一份，各進樣20 μL，進對照品溶液10 μL，測定各自的峰面積，計算氫溴酸東莨菪堿含量，進行3個批號止咳平喘合劑中氫溴酸東莨菪堿的含量比較。

5.7 加樣回收實驗 取5 mL止咳平喘合劑樣品溶液和1 mL濃度為0.0485 mg·mL-1對照品溶液置分液漏斗中，用氨水調(diào)至堿性（pH8～>9），用氯仿萃取4次，每次10 mL，合并氯仿溶液，置80℃水浴上蒸干，殘渣加甲醇定容至5 mL，作為加樣回收的樣品。平行處理5份。分別進樣20 μL，測定峰面積，計算各自的含量和回收率，最終計算回收率的RSD值。見表6。加樣回收率在95～10%，RSD值為1.6。

6 討論

東莨菪堿的安全性。據(jù)文獻報道，東莨菪堿口服極量為5 mg/次，致死量為8 mg左右。根據(jù)《中國藥典》2015版一部規(guī)定洋金花內(nèi)服用量為0.3～>0.6 g，洋金花原料以東莨菪堿計不得少于0.15%，折算東莨菪堿量為0.45～>0.9 mg。

每日用量：從試驗得知，止咳平喘合劑氫溴酸東莨菪堿含量為0.0108 mg·mL-1，折算得到東莨菪堿含量為0.0075 mg·mL-1（東莨菪堿=氫溴酸東莨菪堿/1.445）[2]，本方洋金花用量1.5 g，最終制成250 mL藥液。包裝規(guī)格為50 mL/袋，共5袋。成人每次口服50 mL，換算即得每次口服東莨菪堿量為0.375 mg，療程用量：每個療程用藥5次，換算即得每個療程用藥量中含東莨菪堿1.875 mg。

綜上所述，止咳平喘合劑中東莨菪堿的含量在相關(guān)規(guī)定的用藥安全范圍內(nèi)。

參考文獻：

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（收稿日期：2020-11-28）