生物制藥設(shè)備清潔驗(yàn)證中復(fù)雜化合物的回收率

仔細(xì)選擇清潔驗(yàn)證分析的儀器應(yīng)是所有清潔驗(yàn)證主計(jì)劃實(shí)施的一部分——總有機(jī)碳（TOC）的使用是幾種清潔驗(yàn)證分析方法之一，以其氧化方式不同為特點(diǎn)，可使用燃燒、加熱的過硫酸鹽溶液或者紫外燈與過硫酸鹽溶液結(jié)合進(jìn)行氧化。蘇伊士Sievers? TOC分析儀對(duì)具有高分子量與復(fù)雜化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物具有較高的回收能力。

美國(guó)注射劑協(xié)會(huì)（PDA）列出了用于驗(yàn)證和監(jiān)控清潔度的許多適用的物理、化學(xué)和生物技術(shù)，其中包括針對(duì)特殊分子的專屬性試驗(yàn)以及許多非專屬性試驗(yàn)。在查看性能比較和參考之后，PDA特別提到：“典型的清潔驗(yàn)證研究可使用pH、電導(dǎo)率、總有機(jī)碳、洗滌劑試驗(yàn)，若有多產(chǎn)品設(shè)備，則使用產(chǎn)品專用的方法進(jìn)行試驗(yàn)。”同時(shí)應(yīng)比較分析的精度、準(zhǔn)確度、檢測(cè)限、定量限、選擇性、線性、范圍和靈敏度。PDA進(jìn)行了許多科學(xué)研究以評(píng)測(cè)性能，如合規(guī)的各種通用方法：高效液相色譜（HPLC）、薄層色譜（TLC）、紫外光譜（UV）、總有機(jī)碳、酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（ELISA）、膠體電泳和電導(dǎo)率等常用方法。藥物殘留、賦形劑、清潔劑殘留和反應(yīng)副產(chǎn)物都顯示了各種方法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)[1-2]。

仔細(xì)選擇清潔驗(yàn)證分析的儀器應(yīng)是所有清潔驗(yàn)證主計(jì)劃實(shí)施的一部分。TOC的使用是幾種清潔驗(yàn)證分析方法之一，以其氧化方式不同為特點(diǎn)，可使用燃燒、加熱的過硫酸鹽溶液或者紫外燈與過硫酸鹽溶液結(jié)合進(jìn)行氧化[3]。蘇伊士Sievers TOC分析儀使用UV/過硫酸鹽氧化方法，并使用其專利的膜電導(dǎo)檢測(cè)技術(shù)測(cè)定清潔驗(yàn)證樣品的TOC濃度。

表1 BSA、CP、DS、Heme和HI回收數(shù)據(jù)一覽表

為了證明Sievers TOC分析儀對(duì)具有高分子量與復(fù)雜化學(xué)結(jié)構(gòu)化合物的回收能力，本研究中的這些化合物，通常被認(rèn)為難于被非燃燒/紅外檢測(cè)的TOC儀器氧化和準(zhǔn)確檢測(cè)[4]。

本研究檢驗(yàn)牛血清白蛋白（BSA）、頭孢他啶（CP）、葡聚糖硫酸酯（DS）、牛血紅蛋白（Heme）和人胰島素（HI）在多種濃度下的回收率。表1所示為回收數(shù)據(jù)一覽表。

圖1 BSA、CP、DS、Heme和HI的線性圖

表2：BSA、CP、DS、Heme和HI的線性總結(jié)

所研究化合物的平均回收率為95.9%，范圍在73%～129%之間?；衔锘厥章屎芎们以陬A(yù)料之中，然而葡聚糖硫酸酯的回收率范圍在118%～131%之間。在此研究時(shí)，尚未查清出現(xiàn)如此高回收率的因素，需對(duì)化合物進(jìn)行進(jìn)一步研究，以便找到可能的解釋。值得注意的是，葡聚糖硫酸酯以及其他的所有化合物的回收率線性在濃度范圍內(nèi)非常好。這使得可通過應(yīng)用相關(guān)的曲線方程方便地預(yù)測(cè)未知濃度的樣品。圖1所示為包含各化合物線性的圖，而各公式記錄在表2中。所研究各化合物的線性非常好。

材料和技術(shù)

試劑

(1)6 M的磷酸溶液：在含有1 L低TOC水的5 L容量瓶中加入2 L的85%的磷酸，并用低TOC水稀釋到體積刻度。

(2)15%過硫酸銨溶液：在5 L低TOC水中溶解750 g過硫酸銨。

(3)低TOC水。

圖2操作人員使用蘇伊士Sievers M9實(shí)驗(yàn)室TOC分析儀進(jìn)行清潔驗(yàn)證

材料

1.牛血清白蛋白（BSA）：Fluka已測(cè)定@54.45%碳。

2.人胰島素（HI）：Fluka已測(cè)定@44.1%碳。

3.頭孢他啶（CP）：SmithKline Beecham已測(cè)定@41.5%碳。

4.葡聚糖硫酸酯（DS）：Aldrich已測(cè)定@18.56%碳。

5.牛血紅蛋白（Heme）：Aldrich已測(cè)定@49.87%碳。

6.容量瓶和移液管（使用稀釋的Steris CIP 100TM溶液清洗并使用低TOC水進(jìn)行20次漂洗）。

儀器

1.Sievers實(shí)驗(yàn)室總有機(jī)碳TOC分析儀。

2.Sievers自動(dòng)進(jìn)樣器。

當(dāng)對(duì)這組生物制藥行業(yè)常用的大分子進(jìn)行回收時(shí)，Sievers TOC分析儀表現(xiàn)良好。這表明UV/過硫酸鹽法可用于將化合物中所含的碳氧化為CO2，進(jìn)行量化。許多制藥相關(guān)設(shè)備已經(jīng)成為非專屬但高靈敏度的TOC分析用于清潔驗(yàn)證的很好案例，與其他方法相比，TOC分析法檢測(cè)限低（ppb）、分析時(shí)間快且成本低，而且可以檢測(cè)眾多碳基殘留。