自貢地區(qū)健康成人外周血淋巴細胞亞群參考區(qū)間的建立

黃婧芫

摘要：目的：探討自貢地區(qū)健康成年人外周血淋巴細胞亞群的變化特點，建立自貢地區(qū)健康成年人外周血淋巴細胞亞群參考區(qū)間。方法：收集509例健康成年人外周血標本（年齡18～79歲，其中男257例、女252例），并按照性別年齡分組，18～50歲為青年組（247例），≥51歲為中老年組（262例），用流式細胞儀進行外周血淋巴細胞亞群檢測（熒光微球絕對計數(shù)法），用正態(tài)分布法和百分位數(shù)法建立各指標的參考區(qū)間。結果：男性CD3+（個/ul）、CD3+CD8+（個/ul）高于女性，CD3+CD4+%低于女性（P<0.05）;青年組CD3+CD8+%、CD3+CD8+（個/ul）高于中老年組（P<0.05）;青年組CD3+CD4+CD8+%、 CD3+CD4+CD8+（個/ul）低于中老年組（P<0.05）。結論：由于不同年齡組、不同性別淋巴細胞亞群部分指標差異有統(tǒng)計學意義，研究中把各淋巴細胞亞群分組間無統(tǒng)計學意義的合并一起制定相應參考區(qū)間，初步建立了自貢地區(qū)健康成人外周血淋巴細胞亞群參考區(qū)間，為今后自貢地區(qū)艾滋病及相關疾病的診斷、治療以及療效評價提供依據(jù)。

關鍵詞：健康成年人;淋巴細胞亞群;參考區(qū)間

外周血淋巴細胞（T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞）是人體的免疫細胞，在維持機體的免疫功能中起重要作用[1]。 淋巴細胞亞群分析能客觀反映機體當前的免疫功能，在艾滋病、白血病、腫瘤疾病、感染性疾病等疾病的輔助診斷、發(fā)病機制分析、療效觀察及預后判斷方面具有重要意義[2]。健康人群外周血淋巴細胞亞群正常參考區(qū)間，是監(jiān)測和評價機體免疫功能的基礎，對疾病的診斷分期、預后評估、療效評價等均有重要指導意義。

本研究對509例健康成年人外周血樣本淋巴細胞亞群進行檢測，旨在初步建立健康成年人外周血淋巴細胞亞群參考區(qū)間，為機體免疫狀態(tài)分析和臨床診療提供參考。

1材料與方法

1.1 研究對象

選擇2021年1～6月于我院體檢中心進行體檢的509例健康成年人為研究對象，年齡18～79歲、平均（42.2±12.25）歲，男257例、女252例。18～50歲為青年組（247例），≥51歲為中老年組（262例）。均無現(xiàn)病史，全血細胞分析、肝腎功能檢查正常，排除患有人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、梅毒螺旋體等感染者和免疫系統(tǒng)等疾病患者。

1.2 儀器與試劑

儀器為Beckman/Coulter NAVIOS型流式細胞儀，試劑及溶血劑均為美國美國Beckman/Coulter公司提供的專用配套測定試劑（淋巴細胞亞群單克隆抗體組合試劑CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5，CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5，精密度質控微球Flow-check Pro Fluorospheres，熒光微球Flow-Count Fluorospheres，溶血劑OptiLyse C Lysing Solution，緩沖液PBS）。

1.3 實驗方法

1.3.1 儀器校正

取出精密度質控微球Flow-check Pro Fluorospheres恢復室溫后，對流式細胞儀進行光路校準，變異系數(shù)（CV）在要求范圍內，以確保儀器處于穩(wěn)定狀態(tài)，保證實 驗結果的準確性。

1.3.2 標本檢測

熒光微球絕對計數(shù)法。根據(jù)試劑盒說明書，每份標本同時做2管，分別向試管中加入20ul稀釋好單克隆抗體組合（100 ul單克隆抗體組合加500 ul生理鹽水）和反向加樣的20u1 EDTA-K2抗凝全血，漩渦混勻器混勻后室溫孵育15～30 min，加入溶血劑OptiLyse C 200ul放置20 min后（待完全溶血），加入500 ul 緩沖液PBS漩渦混勻器混勻后準備上機（須在2 h內上機完成檢測）。

1.4 質量保證

參加衛(wèi)健委室間質評成績滿意，室內質控在控。

1.5 統(tǒng)計學分析

使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行處理，所有數(shù)據(jù)用單樣本 Kolmogorov-Smirnov 檢驗是否為正態(tài)分布，用（±s）表示，參考區(qū)間建立采用（±1.96s），非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用P2.5～P97.5描述，進行t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1 不同性別健康成年人外周血淋巴細胞亞群比較

男性CD3+（個/ul）、CD3+CD8+（個/ul）高于女性，CD3+CD4+%低于女性（P<0.05）。其余項目男女之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.2 不同年齡組健康成年人外周血淋巴細胞亞群比較

青年組CD3+CD8+%、CD3+CD8+（個/ul）高于中老年組（P<0.05）;青年組CD4+/CD8+、CD3+CD4+CD8+%、 CD3+CD4+CD8+（個/ul）低于中老年組（P<0.05）。見表1。

2.3 自貢地區(qū)健康成年人外周血淋巴細胞亞群參考區(qū)間的建立

由于不同年齡組、不同性別淋巴細胞亞群部分指標差異有統(tǒng)計學意義，研究中把各淋巴細胞亞群分組間無統(tǒng)計學意義的合并一起制定相應參考區(qū)間。男性組與女性組CD3+（個/ul）、CD3+CD8+（個/ul）、CD3+CD4+%需分組建立參考值，青年組與中老年組CD3+CD8+%、CD3+CD8+（個/ul）、CD3+CD4+CD8+%、CD3+CD4+CD8+（個/ul）需分組建立參考值。因此，按年齡或性別組分別制定相應的95%參考值區(qū)間（±1.96s）（P2.5～P97.5）。見表2。

3討論

實驗室檢測項目的參考區(qū)間來源主要有衛(wèi)健委臨檢中心推薦、試劑說明書、公開發(fā)表文獻、實驗室自建等。目前，大多數(shù)第三方實驗室或檢驗科檢測淋巴細胞亞群，方法學參考衛(wèi)健委臨檢中心發(fā)布的 WX/T360—2011文件《流式細胞術檢測外周血淋巴細胞亞群指南》，而參考區(qū)間大多采用《中國人血液淋巴細胞免疫表型參考值調查》。調查結果表明，淋巴細胞亞群分布受地域、性別、年齡等因素的影響。此類參考區(qū)間無法滿足本地區(qū)臨床診療的需要，從表1、表2可以看出，部分淋巴細胞亞群項目參考區(qū)間與性別、年齡有相關性。因此，在健康成人中，根據(jù)年齡和性別確定淋巴細胞參考值范圍對于評估患者結果非常重要。

不同儀器、試劑、標本制備方法和操作的差異等也可能影響淋巴細胞亞群檢測結果。然而，其是否會成為導致檢測結果具有顯著性差異的影響因素有待進一步研究證實。在完善實驗技術、嚴格控制質量的基礎上，分別建立不同年齡、性別等健康人群淋巴細胞亞群的參考范圍仍然有助于增加實驗室檢測的可定量性，從而提高其臨床應用價值。本研究不足之處是研究例數(shù)偏少，年齡范圍未收集到大于80歲以上老年人，尚需要多中心大規(guī)模實驗室共同對健康人群 參考區(qū)間做進一步調查研究。

綜上所述，不同人群之間外周血淋巴細胞亞群參考區(qū)間具有統(tǒng)計學差異。采用本實驗室建立的相關參考區(qū)間更切合本地區(qū)受檢人群的實際情況，可為免疫狀態(tài)分析和臨床診療提供更精準的參考依據(jù)。初步建立了自貢地區(qū)健康成人外周血淋巴細胞亞群參考區(qū)間，為今后自貢地區(qū)艾滋病及相關疾病的診斷、治療以及療效評價提供依據(jù)。

參考文獻

[1]Tsokos GC，Rose NR.Immune cell signaling in autoimmune disease[J].Clin Immunol，2017（181）：1-8.

[2]衛(wèi)生部臨床檢驗標準專業(yè)委員會.流式細胞術檢測外周血淋巴細胞亞群指南：WS/T360—2011 [S].北京：中國醫(yī)學院科學院北京協(xié)和醫(yī)院，2011.3E9C0194-2AC7-49DE-9272-19AFACD7ECF0