AKI患者行CRRT治療抑制AngⅡ途徑對(duì)PDGF表達(dá)的影響及意義

高冬梅，趙藝欣，肖楓林，玄 方，于 海，張志勇，李明旭

急性腎損傷（acute kidney injury,AKI）是各種病理性因素導(dǎo)致的腎功能短時(shí)間內(nèi)快速降低而出現(xiàn)的綜合征。AKI是臨床常見(jiàn)的危重癥疾病，85%來(lái)自發(fā)展中國(guó)家，住院人群檢出率為10.7%～21.0%不等，心臟大血管術(shù)后發(fā)生率高達(dá)49.4%，早期識(shí)別并有效干預(yù)可顯著改善預(yù)后[1-5]。研究顯示，AKI可誘發(fā)多種神經(jīng)-體液機(jī)制激活，其中腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system,RAS）最顯著，AngⅡ表達(dá)活性增高[6-7]。但是，腎損傷持續(xù)存在可加劇形成腎臟器質(zhì)性病變，早期腎間質(zhì)纖維化。有研究表明，腎間質(zhì)纖維化進(jìn)展與血清膠原蛋白Ⅰ（Col-Ⅰ）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）和PDGF有關(guān)，PDGF-BB上調(diào)了PDGF-β受體的表達(dá)，加劇了血管異常，促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化，并可通過(guò)骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞改善了周細(xì)胞-成肌纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化[8]。本研究針對(duì)不同程度AKI接受CRRT的患者，評(píng)估抑制AngⅡ途徑對(duì)PDGF表達(dá)的影響，分析其與腎纖維化的關(guān)系，以提供腎纖維化影響因素的新理念，并更充分地理解AKI患者行CRRT的治療意義。

1 資料與方法

1.1 基本資料 收集2016年2月～2020年5月醫(yī)院腎臟內(nèi)科住院患者共124例，根據(jù)2012年KDIGO標(biāo)準(zhǔn)[9]共分成兩組：（1）對(duì)照組（腎功能正常組）共56例（男26例，女30例），年齡22～65（44.98±12.14）歲；納入標(biāo)準(zhǔn)：腎穿刺活檢提示腎小球微小病變，不伴有血肌酐升高、電解質(zhì)及酸堿紊亂，尿量正常者；（2）研究組（腎功能分類標(biāo)準(zhǔn)參照AKI診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，進(jìn)入CRRT程序的研究組納入標(biāo)準(zhǔn)參照下列標(biāo)準(zhǔn)≥1條[10-11]）68例（男33例，女35例），年齡25～68（46.13±11.36）歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡<18歲，年齡>75歲；（2）多器官功能衰竭；（3）危重癥；（4）臨終狀態(tài)；（5）預(yù)期無(wú)法完成研究。退出標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并嚴(yán)重并發(fā)癥；（2）轉(zhuǎn)診；（3）研究期內(nèi)中止研究的各種因素。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后展開(kāi)。

1.2 研究方法

1.2.1 臨床資料 所有受試者均需詳細(xì)記錄病史、體格檢查、心電圖、胸片等入院常規(guī)檢查，并采集年齡、性別、體重、身高以及電解質(zhì)、肝腎功能等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。

1.2.2 CRRT治療 入組AKI患者使用雙腔靜脈導(dǎo)管建立股靜脈或頸內(nèi)靜脈通路，使用BRAUN透析機(jī)（德國(guó)）、AV600過(guò)濾器（費(fèi)森尤斯，德國(guó)）治療，模式選用持續(xù)靜脈-靜脈血液濾過(guò)（CVVH），流量為150～200 ml/min，置換液量為2000～2500 ml/h，無(wú)出血患者采用低分子量肝素（江蘇大同盟制藥有限公司，批號(hào)：20200106）（前稀釋法，沿中心靜脈微量泵入，初始劑量2000～4000 IU，維持量200～400 IU/h）抗凝（動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)抗Xa因子活性，維持在0.25～0.35 IU/ml，如合并繼發(fā)性氣道、消化道、皮下出血等，則調(diào)整為枸櫞酸抗凝方案）；出血及出血傾向患者采用枸櫞酸鈉（四川南格爾生物科技有限公司，批號(hào)：200423288）抗凝（前稀釋法，沿中心靜脈微量泵入，初始劑量180 ml/h持續(xù)泵入，每2～4 h同步測(cè)量濾器前、后游離Ca2+水平，根據(jù)濾器前Ca2+調(diào)整枸櫞酸鈉速度，濾器前Ca2+維持在0.2～0.4 mmol/L，中心靜脈持續(xù)泵入10%葡萄糖酸鈣，將濾器后Ca2+維持在1.00～1.35 mmol/L）[12-13]。

1.2.3 檢測(cè)項(xiàng)目 在CRRT治療前及治療后12 h、24 h分別抽取AKI組和對(duì)照組靜脈血2 ml，在4℃、2000 r/min，離心10 min后，取血清置-20℃環(huán)境內(nèi)保存，并于3 w內(nèi)檢測(cè)完畢。血生化指標(biāo)采用7600型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定：鈉（Na+）、鉀（K+）、鈣（Ca2+）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血紅蛋白（Hb）水平。

1.2.4 PDGF、AngⅡ水平測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測(cè)定，PDGF試劑盒購(gòu)自Sigma公司，規(guī)格96T；AngⅡ試劑盒購(gòu)自Abcam公司，規(guī)格96T，均嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)步驟操作。

1.2.5 隨訪及療效評(píng)價(jià) 對(duì)出院患者進(jìn)行隨訪，詳細(xì)記錄對(duì)照組和AKI組經(jīng)CRRT治療腎功能轉(zhuǎn)歸后再次惡化時(shí)間，以出院后再次入院接受CRRT標(biāo)記為惡性事件，出院后患者均需定期隨訪并記錄生存狀態(tài)，如研究期間出院后發(fā)生因未知因素?zé)o法再次入院而中斷研究的患者或不接受門(mén)診、電話、微信等任何方式隨訪的患者，則不納入本研究。經(jīng)電話、門(mén)診、微信等多渠道隨訪方式仍無(wú)法聯(lián)系的患者標(biāo)記為失訪。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，病例組治療前后采用配對(duì)t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，各指標(biāo)間相關(guān)性采用Spearman分析，其顯著性檢驗(yàn)設(shè)置為95%可信區(qū)間，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者的臨床基線資料 本研究共納入56例腎功能正?；颊咦鳛閷?duì)照組，68例AKI患者作為研究組，兩組患者的臨床基線資料比較見(jiàn)表1。AKI組的SCr、BUN、AST、Na+、K+水平較對(duì)照組升高（P<0.05）。AKI組的Hb、Ca2+水平較對(duì)照組降低（P<0.05）。兩組間的男女比例、年齡、ALT比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

2.2 CRRT治療前后對(duì)各組患者臨床指標(biāo)的影響 AKI組經(jīng)CRRT治療后的SCr、BUN、Na+、K+水平降低（P<0.05）。經(jīng)CRRT治療后Hb、Ca2+水平升高（P<0.05）。AKI組的ALT、AST在CRRT治療前后比較無(wú)明顯差異（P>0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 CRRT對(duì)不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)AngⅡ、PDGF水平的影響 單因素方差分析結(jié)果顯示：經(jīng)CRRT治療，AKI組的AngⅡ、PDGF的表達(dá)水平隨時(shí)間延長(zhǎng)顯著下降（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 CRRT對(duì)AKI患者近期預(yù)后的影響 CRRT治療后隨訪期為6～36 w，中位時(shí)間21 w，對(duì)照組1例患者因轉(zhuǎn)為急性腎小球腎炎接受入院治療，AKI組7例患者出院后因各種因素腎功能惡化再次入院行CRRT治療，兩組患者均無(wú)死亡。采用Ka pl an-Meier法繪制生存曲線（圖1），Log-rank檢驗(yàn)提示兩組患者生存率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.37，P=0.037）。

圖1 兩組患者的生存率比較（Kaplan-Meier法）

3 討論

表1 兩組患者的臨床基線資料比較

表2 CRRT治療前后對(duì)AKI組患者臨床指標(biāo)的影響

表3 CRRT治療AKI組對(duì)AngⅡ、PDGF水平不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的影響

由于腎前性、腎性、腎后性、藥物毒性、炎癥等致病因素的不同，AKI的發(fā)病、病理生理、分子生物學(xué)機(jī)制也存在差異。AKI是短時(shí)間內(nèi)腎小球?yàn)V過(guò)率急劇減退，病理生理紊亂顯著，機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)，RAAS系統(tǒng)及致纖維化機(jī)制在體內(nèi)廣泛激活[7]。PDGF與炎癥、上皮細(xì)胞損害、間質(zhì)及組織損傷關(guān)系密切，在人體多器官表達(dá)，參與器官纖維化的病理過(guò)程[14]。本研究顯示，AKI發(fā)生時(shí)，無(wú)論是否接受CRRT治療，PDGF的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P<0.05），與Laurence等[15]研究結(jié)果一致，即AKI發(fā)生時(shí)PDGF表達(dá)水平更高。Barbara等[16]報(bào)道，纖維化涉及多種途徑，PDGF信號(hào)通路是主要的介質(zhì)之一，基質(zhì)間質(zhì)細(xì)胞同時(shí)表達(dá)PDGF受體（PDGFR）α和β，他們的激活驅(qū)動(dòng)細(xì)胞外基質(zhì)的增殖、遷移和產(chǎn)生，即纖維化的主要過(guò)程，不同器官纖維化或有纖維化傾向患者的PDGF表達(dá)水平差異顯著，波動(dòng)于300～1500 pg/ml之間，本研究所報(bào)道的AKI患者在接受CRRT治療前PDGF表達(dá)水平與此結(jié)果一致。此外，PDGF屬于小分子物質(zhì)，已被機(jī)體或CRRT吸附柱清除，本研究結(jié)果也表明，經(jīng)CRRT治療，PDGF水平較治療前有明顯降低，而且隨治療時(shí)間延長(zhǎng)，PDGF水平降低更加明顯，但研究中未觀察隨著CRRT的停用，以及AKI病情的進(jìn)展，更長(zhǎng)時(shí)間以后PDGF的表達(dá)情況，后續(xù)研究將繼續(xù)完善此過(guò)程。但本研究也設(shè)計(jì)了12 h和24 h兩個(gè)時(shí)間段，在一定程度上可以證實(shí)PDGF與疾病嚴(yán)重程度、急性發(fā)作時(shí)程等之間的相關(guān)性。

本研究還觀察到對(duì)照組、AKI組與CRRT治療后AngⅡ的表達(dá)特征，AKI組治療前AngⅡ表達(dá)明顯升高，這與AKI發(fā)生時(shí)機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)，多種信號(hào)通路廣泛激活，其中RAAS系統(tǒng)激活較為明顯，機(jī)體的SCr、BUN、AST、Na+、K+、Hb、Ca2+水平表達(dá)異常，而RAAS中AngⅡ被認(rèn)為起到關(guān)鍵性作用，故AngⅡ表達(dá)升高符合病理生理學(xué)過(guò)程。通過(guò)CRRT治療，可有效抑制AngⅡ通路，降低AngⅡ表達(dá)水平，本研究結(jié)果與Miloradovi?等[17]研究報(bào)道一致。此外，一般認(rèn)為RAAS激活后通過(guò)AngⅡ受體（ATR）介導(dǎo)，主要為1型ATR發(fā)揮作用，ATR1激活后直接作用于TGF-β，從而啟動(dòng)纖維細(xì)胞刺激過(guò)程，并且可直接上調(diào)PDGF表達(dá)水平，增強(qiáng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，發(fā)揮致纖維化作用[18]。本研究還觀察到，CRRT治療可清除炎癥介質(zhì)、糾正電解質(zhì)紊亂，為患者提供腎臟灌注所需血流，減少臟器處于代謝產(chǎn)物及毒素蓄積狀態(tài)，因此本研究表明，CRRT治療會(huì)影響部分臨床指標(biāo)，與治療前相比，AKI組經(jīng)CRRT治療后的SCr、BUN、Na+、K+水平降低（P<0.05）。

目前尚無(wú)大量充分證據(jù)表明PDGF與機(jī)體內(nèi)環(huán)境、電解質(zhì)、酸堿平衡之間的相關(guān)性，僅孕婦隊(duì)列中的先兆子癇疾病模型血漿PDGF-AA、ANG-1、ANG-2和ANG-1/ANG-2比值在進(jìn)行了部分說(shuō)明[19]。本研究在設(shè)計(jì)CRRT治療可能會(huì)影響AngⅡ、PDGF表達(dá)水平的單因素基礎(chǔ)上，未針對(duì)AKI發(fā)作期的PDGF與電解質(zhì)、肝功能等多因素的相關(guān)性加以分析，因AngⅡ和PDGF在一定程度上容易受到急性發(fā)作的影響，受到其他組織、細(xì)胞代謝產(chǎn)物等不良狀態(tài)的影響。但同時(shí)接受CRRT治療后，機(jī)體紊亂狀態(tài)被糾正，這種相關(guān)性則被削弱。

此外，本研究還分析了AKI接受CRRT治療后的近期預(yù)后評(píng)價(jià)。設(shè)計(jì)CRRT治療后隨訪期為6～36 w，中位時(shí)間21 w，通過(guò)對(duì)各組患者采用Kaplan-Mei er法繪制的生存曲線顯示（圖1），AKI組在CRRT治療后與對(duì)照組相比仍存在近期預(yù)后的顯著性差異，可能是由于隨訪時(shí)間短、整體入組病例數(shù)等因素限制，但CRRT治療的臨床療效卻是顯著有效的，AKI組通過(guò)治療無(wú)死亡，且在數(shù)周后才再次入院治療。

綜上所述，隨CRRT治療時(shí)間延長(zhǎng)可顯著抑制AngⅡ途徑，降低PDGF的表達(dá)水平；CRRT治療可顯著改善AKI組患者預(yù)后，PDGF有望成為AKI近期預(yù)后的新型評(píng)價(jià)指標(biāo)。