紅棗枸杞浸泡酒對小鼠潤腸通便功能的研究

胡 博，唐曉姝，陳雪梅，張白曦*

（1.江南大學 國家功能食品工程技術(shù)研究中心，江蘇 無錫 214000；2.江南大學 食品學院，江蘇 無錫 214000）

隨著人們飲食結(jié)構(gòu)、生活方式和工作方式的改變，便秘已成為人們生活中的常見問題[1-5]。流行病研究發(fā)現(xiàn)，女性慢性便秘病率高于男性[6]，且便秘的發(fā)生率隨年齡增加而提高，特別是65歲以上便秘發(fā)生率明顯增高。我國成年人患病率在7.0%～20.3%[7]。老年人慢性便秘總患病率為11.5%，其中年齡在60～65歲患病率為8.7%，而85歲以上的老人患病率則高達19.5%[8]。便秘是臨床常見的復雜癥狀，現(xiàn)代很多人往往容易忽視便秘，但是便秘對人的身體健康有著很大的影響和損害[9]，便秘會導致人體內(nèi)毒素積累，降低五臟功能，甚至可能導致其他疾病的發(fā)生[10]。

紅棗含有蛋白質(zhì)、糖類、有機酸、氨基酸、維生素A、維生素C等豐富的營養(yǎng)成分[11]。紅棗不但是美味果品，還是滋補良藥，有強筋壯骨、補血行氣、滋頤潤顏之功效[12-14]。枸杞味甘、性平，富含枸杞多糖及甜菜堿等活性物質(zhì)，是一種傳統(tǒng)的“藥食兼用”原材料，其活性成分可增強免疫力、抗腫瘤、防衰老、增加造血功能、抗脂肪肝等[15]。

浸泡酒作為一種傳統(tǒng)的食品加工工藝，制作簡便，成本低廉，一直以來得到廣泛的應用。信維平[16]從果蔬中分離出抗氧化物質(zhì)，可對飲料調(diào)味和作為預防癌癥等疾病的功能性食品。農(nóng)仲文等[17]通過對山竹果皮中活性物質(zhì)做浸泡酒的研究，發(fā)現(xiàn)酒中活性成分高，抗氧化作用好。白酒是很好的浸提溶劑，可將紅棗、枸杞中的有效成分充分地提取出來，并以適當?shù)谋壤ㄟ^恰當?shù)姆绞奖蝗藗償z入體內(nèi)發(fā)揮其作用。以紅棗、枸杞為原料，蒸餾白酒為基酒制備浸泡酒，研究其潤腸通便的功效，為進一步開發(fā)具有潤腸通便功能的浸泡酒提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紅棗、枸杞、濃香型蒸餾白酒（酒精度65%vol）：市售；洛哌丁胺片（每片含洛哌丁胺2 mg）：西安楊森制藥公司；活性炭（粉狀）：天津市科密歐化學試劑有限公司；阿拉伯樹膠粉、低聚木糖：國藥集團化學試劑有限公司；植物總酚測試試劑盒（比色法）、總黃酮測試試劑盒（比色法）：南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2600 紫外可見分光光度計：日本島津公司；5830R型離心機：德國Eppendorf公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理方法

以紅棗、枸杞為原料，洗凈晾干，以料液比1∶10（g∶mL），用濃香型蒸餾白酒浸泡在陶罐中，加蓋密封后25 ℃避光貯存6個月，得到酒精度為60%vol的浸泡酒受試物。

張連長臉板得像塊濕木頭:“下雨只不過是下雨,下再大的雨也還是下雨,不是下刀子!你們不是那些插隊知青!他們一插隊,不想當農(nóng)民那也是農(nóng)民了!你們叫兵團戰(zhàn)士!是戰(zhàn)士就得有點戰(zhàn)士的樣子!沒有口令擅自行動,不是好戰(zhàn)士!跑到倉庫去的,都要受處分!”

1.3.2 試劑配制方法

洛哌丁胺混懸液的配制：①小腸運動實驗：取洛哌丁胺片14 mg（7 片），用研缽研碎呈粉末后加蒸餾水至25 mL，臨用前配制。②排便實驗：取洛哌丁胺片26 mg（13 片），用研缽研碎呈粉末后加蒸餾水至25 mL，臨用前配制。

低聚木糖的配制：稱取15.00 g低聚木糖粉，用蒸餾水定容至100 mL。

墨汁的配制：稱取阿拉伯樹膠10 g，加蒸餾水80 mL，煮沸至溶液透明，稱取活性碳（粉狀）10 g 加至上述溶液中煮沸3次，待溶液涼后加水定容至100 mL，于冰箱中4 ℃保存，用前搖勻。

1.3.3 受試物劑量確定方法

根據(jù)WOOD A M等[18]關(guān)于酒精攝入風險閾值的研究表明，全因死亡率與飲酒攝入量呈現(xiàn)正相關(guān)性，其最低風險攝入量為100 g/周（純酒精）。換算為酒精含量60%vol的浸泡酒，則每日攝入量為30 mL。按照標準人體質(zhì)量60 kg換算為本次小鼠每日灌胃劑量為5.0 mL/kg體質(zhì)量[19]，作為本次實驗的中劑量組。低劑量組灌胃劑量為2.5 mL/kg體質(zhì)量。

美國心臟協(xié)會、癌癥協(xié)會等組織建議的適度飲酒量為：女性每日酒精飲料攝入量不超過一份；男性每日酒精飲料攝入量不超過兩份（一份標準酒精飲料含有約17.7 mL的純酒精）[20]。按照標準人體質(zhì)量60 kg換算為酒精含量60%vol的浸泡酒，則男性每日攝入量為59 mL。換算為本次小鼠每日灌胃劑量為10.0 mL/kg體質(zhì)量，作為本次實驗的高劑量組。

根據(jù)《保健食品檢驗技術(shù)與評價規(guī)范》[19]，對于含乙醇的受試樣品，如果乙醇含量超過15%vol，允許將其含量降至15%vol。因此將浸泡酒及蒸餾酒的乙醇含量旋蒸降至15%vol，并調(diào)配至相應劑量。

1.3.4 動物分組方法

選取無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級健康雄性BALB/c小鼠（18～22g）140只：由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，生產(chǎn)許可證編號：SCXK（滬）2017-0005，動物質(zhì)量合格證編號：2015000556762。在屏障設(shè)施檢疫室內(nèi)預飼養(yǎng)5 d后，按動物體質(zhì)量將動物隨機分成小腸運動實驗組和排便實驗組，每個大組分成7個組，每組10只動物，即溶劑對照組（動物飲用水），模型對照組（洛哌丁胺），陽性對照組（低聚木糖1.5 g/kg體質(zhì)量），浸泡酒低（2.5 mL/kg體質(zhì)量）、中（5.0 mL/kg體質(zhì)量）、高（10.0 mL/kg體質(zhì)量）劑量組和蒸餾酒對照組（10.0 mL/kg體質(zhì)量），灌胃劑量為0.1 mL/10 g，受試樣品、溶劑蒸餾水均經(jīng)口灌胃，連續(xù)7 d。

1.3.5 實驗方法

（1）酒中功效成分的測定

糖含量測定：參照許亮[21]的方法進行測定；總酚含量、總黃酮含量的測定：試劑盒測試。

（2）小腸運動實驗

便秘模型的建立：給受試樣品7 d后，各組小鼠禁食不禁水20 h。模型對照組和3個劑量組灌胃給予鹽酸洛哌丁胺5.2 mg/kg體質(zhì)量，陰性對照組給等量蒸餾水。

墨汁推進率的測定：

給鹽酸洛哌丁胺0.5 h后，劑量組灌胃給予含相應濃度受試樣品的墨汁（含10%活性碳粉、10%阿拉伯樹膠），陰性和模型對照組給墨汁灌胃。

25 min后立即脫頸椎處死動物，打開腸腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進長度”，并記錄數(shù)據(jù)。按下式計算墨汁推進率[19]：

該公式參照《保健食品檢驗技術(shù)與評價規(guī)范》潤腸通便功能評價方法[19]，將墨汁推進率按照該公式進行換算后才能更準確的反應各劑量組間的差異情況。墨汁推進率需進行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，X=Sin-1（X代表墨汁推進率的數(shù)據(jù)換算值，p為墨汁推進率，需用小數(shù)表示）。

（3）排便實驗

便秘模型的建立：給受試樣品7 d后，各組小鼠禁食不禁水20 h。模型對照組和3個劑量組灌胃給予鹽酸洛哌丁胺10.0 mg/kg體質(zhì)量，陰性對照組給蒸餾水。

排便時間、糞便粒數(shù)和糞便質(zhì)量的測定：給鹽酸洛哌丁胺0.5 h后，陰性對照組和模型對照組小鼠用墨汁灌胃，劑量組灌胃給予含相應濃度受試樣品的墨汁，動物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進食。從灌墨汁開始，記錄每只動物首粒排黑便時間、5 h內(nèi)排便粒數(shù)及質(zhì)量，記錄時除去小鼠排出第一粒黑便前的糞便。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

試驗數(shù)據(jù)結(jié)果用SPSS 22.0軟件進行方差齊性檢驗，滿足方差齊要求的數(shù)據(jù)資料用單因素方差分析方法進行統(tǒng)計處理；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅棗枸杞酒與蒸餾酒中總黃酮、總酚、總糖、粗多糖含量的比較分析

紅棗枸杞酒和蒸餾酒中總黃酮、總酚、總糖、粗多糖含量的比較分析結(jié)果見表1。由表1可知，紅棗枸杞酒中總黃酮含量約為蒸餾酒的4倍，總酚含量約為蒸餾酒的90倍，總糖含量為3.74 g/100 mL，乙醇沉淀多糖含量為0.200 g/100 mL，說明浸泡酒中含有較多的單糖和小分子糖。蒸餾酒中的總糖含量為0.009 57 g/100 mL，多糖未檢出，說明蒸餾酒中僅有少量的單糖和小分子糖存在。由于紅棗枸杞中的有效成分濃度較高，尤其是多糖含量較高，能促進腸道有益菌的增殖和所占比例，抑制腸道有害菌及腐敗物質(zhì)形成，可促進益生菌產(chǎn)生短鏈脂肪酸和短鏈有機酸，可降低腸道pH，促進腸蠕動，改善便秘[22]，推測紅棗枸杞酒中的糖能夠起到促進腸胃消化、潤腸通便的作用。

表1 紅棗枸杞酒和蒸餾酒中總黃酮、總酚、總糖、粗多糖含量的比較分析Table 1 Comparative analysis of total flavone,total phenol,total sugar and crude polysaccharide in jujube and wolfberry-soaked wine and distilled liquor

2.2 小腸推進率

實驗期間，各組小鼠無死亡，生長情況良好，無腹瀉等各種不良現(xiàn)象。由表2可知，模型對照組與空白組相比，小腸推進率顯著降低（P＜0.05），說明建模成功；陽性對照組與模型對照組相比，小腸推進率顯著增加（P＜0.05），說明實驗體系可行；低、中劑量組、蒸餾酒對照組與模型對照組相比，小腸推進率無顯著性差異（P＞0.05），高劑量組與模型對照組相比，小腸推進率顯著增加（P＜0.05）。說明該紅棗枸杞酒在高劑量濃度（10.0 mL/kg體質(zhì)量）下可增加小腸推進率。

表2 紅棗枸杞酒對小鼠小腸推進率的影響Table 2 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on small intestinal propulsion rate of mice

2.3 首粒黑便排便時間

由表3可知，便秘模型對照組的首粒排黑便時間顯著高于空白組（P＜0.05），說明便秘模型成立；陽性對照組與模型對照組相比，顯著降低（P＜0.05），說明實驗方案及實驗體系可行。低劑量組與模型對照組相比顯著降低（P＜0.05），且首粒黑便排便時間比陽性對照組少，說明該紅棗枸杞酒在低劑量濃度下可縮短首粒黑便排便時間。中劑量組、蒸餾酒對照組與模型對照組相比無顯著性差異（P＞0.05），高劑量組與模型對照組相比顯著增加（P＜0.05），在縮短首粒黑便排便時間方面效果不明顯。

表3 紅棗枸杞酒對小鼠首粒黑便排便時間的影響Table 3 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on the defecation time of the first black stool in mice

2.4 5 h內(nèi)排黑便粒數(shù)

由表4可知，便秘模型對照組的5 h內(nèi)平均排黑便粒數(shù)顯著低于空白組（P＜0.05），說明便秘模型成立；陽性對照組與模型對照組相比，顯著增加（P＜0.05），說明實驗方案及實驗體系可行。低、高劑量組與模型對照組相比顯著增加（P＜0.05），排便頻率明顯升高，且與陽性對照組相比效果一致；中劑量組、蒸餾酒對照組與模型對照組相比無顯著性差異（P＞0.05）。說明該紅棗枸杞酒在低、高劑量濃度下可增加5 h內(nèi)排黑便的粒數(shù)。

表4 紅棗枸杞酒對小鼠5 h內(nèi)排黑便粒數(shù)的影響Table 4 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on the number of black stools excreted by mice within 5 h

2.5 5 h內(nèi)排黑便質(zhì)量

由表5可知，便秘模型對照組的5 h內(nèi)排黑便質(zhì)量顯著低于空白組（P＜0.05），說明便秘模型成立；陽性對照組與模型對照組相比，排黑便質(zhì)量顯著降低（P＜0.05），低、中劑量組、蒸餾酒對照組與模型對照組相比無顯著性差異（P＞0.05），高劑量組與模型對照組相比顯著增加（P＜0.05），且排黑便質(zhì)量略低于陽性對照組。說明該紅棗枸杞酒在高劑量濃度（10.0 mL/kg體質(zhì)量）下可增加5 h內(nèi)排黑便的質(zhì)量。

表5 紅棗枸杞酒對5 h內(nèi)排黑便質(zhì)量的影響Table 5 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on weight of black stools excreted by mice within 5 h

3 結(jié)論

本實驗采用實驗性便秘模型小鼠評價了紅棗枸杞浸泡酒的通便功能。結(jié)果表明，紅棗枸杞酒在高劑量濃度下與便秘模型對照組均有顯著性差異（P＜0.05），而蒸餾酒對照組與便秘模型組無顯著性差異（P＞0.05），進一步證實通便效果來自于浸泡過程中紅棗與枸杞溶出的功效成分。結(jié)合紅棗枸杞浸泡酒的功效成分分析，紅棗枸杞酒中總酚及總黃酮相較蒸餾酒中含量較多，可影響小鼠的胃腸蠕動及排便功能。但是因?qū)嶒炓蠛凭惖臉悠沸鑼⒕凭瓤s至15%vol以下進行，因此需通過旋蒸手段將各劑量組酒精含量進行統(tǒng)一，推至一般人群的每日攝入量下能否表現(xiàn)出潤腸通便效果還需進一步探討，總之，枸杞紅棗浸泡酒與蒸餾酒對照組相比，其功效優(yōu)勢更明顯。