• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    輔酶Q10經(jīng)蛋白激酶A/胞漿型磷脂酶A2信號(hào)通路抑制血小板血栓素A2的生成

    2021-06-03 02:38:24牙甫禮張春梅陳彬林谷仕艷賈小娥
    食品科學(xué) 2021年9期
    關(guān)鍵詞:苯乙酮凝血酶激動(dòng)劑

    牙甫禮,張春梅,陳彬林,谷仕艷,賈小娥

    (1.大理大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所,云南 大理 671000;2.河口海關(guān),云南 河口 661300;3.廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院營(yíng)養(yǎng)科,廣西 南寧 530000)

    心血管疾病的發(fā)病率和死亡率逐年上升,已經(jīng)成為威脅我國(guó)人民健康的主要問題和突出的公共衛(wèi)生問題,動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成是心血管疾病共同的病理變化[1]。誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾?。╝therosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)的危險(xiǎn)因素很多,主要包括年齡、血脂紊亂、肥胖、糖尿病等。近年來大量報(bào)道證明血小板在ASCVD病程中具有重要作用[2-3]。

    血小板是成熟巨核細(xì)胞上脫落下來的細(xì)胞質(zhì)碎片,是循環(huán)血液中的一種有形細(xì)胞,其主要生理功能是參與止血和凝血[4]。然而,當(dāng)血小板受到病理性刺激時(shí),尤其在心血管疾病中,血小板可發(fā)生激活、聚集以及釋放炎癥因子等參與動(dòng)脈粥樣硬化和血栓的發(fā)生和發(fā)展過程,進(jìn)而在ASCVD病程中發(fā)揮重要作用[5-6]。在血小板發(fā)生活化的過程中,其生成的血栓素A2(thromboxane A2,TxA2)被認(rèn)為是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成的重要物質(zhì),抑制血小板TxA2生成對(duì)于防治心血管疾病中血栓的形成至關(guān)重要[7-8]。在冠心病、糖尿病和高脂血癥等疾病中,血小板受到血液中可溶性激動(dòng)劑如凝血酶和二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)等刺激時(shí),胞內(nèi)眾多復(fù)雜的信號(hào)通路被激活,最終可促進(jìn)TxA2生成[7]。TxA2半衰期很短(約30 s)且極不穩(wěn)定,其生成后在半衰期內(nèi)可通過自分泌和旁分泌的方式作用于鄰近血小板、白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞表面的凝血惡烷前列腺素類(thromboxane prostanoid,TP)受體,進(jìn)而介導(dǎo)一系列炎癥反應(yīng),如激活血小板、對(duì)血小板聚集和炎癥因子的釋放發(fā)揮放大效應(yīng),進(jìn)而參與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程[8-9]。隨后,TxA2立即被代謝生成穩(wěn)定形式的血栓素B2(thromboxane B2,TxB2),TxB2從血小板釋放出后可進(jìn)一步作用于其鄰近的細(xì)胞,參與動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成[7]。由于TxB2較為穩(wěn)定,血小板釋放的TxB2水平常可用來反映胞內(nèi)TxA2生成情況[10-11]。血小板中TxA2生成受多種信號(hào)蛋白分子的調(diào)控,血小板激動(dòng)劑如凝血酶、ADP和膠原等通過激活血小板表面相應(yīng)的受體,進(jìn)而激活胞內(nèi)一系列的信號(hào)通路,導(dǎo)致胞漿型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2)發(fā)生磷酸化,使得花生四烯酸從細(xì)胞膜磷脂釋放出,最終在環(huán)氧合酶(cyclooxygenase,COX)和過氧化酶作用下生成TxA2;因此,cPLA2的活化在調(diào)控TxA2生成的過程中起關(guān)鍵作用[7]。

    cPLA2的活化受多種信號(hào)通路的調(diào)控,其中蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)介導(dǎo)的信號(hào)通路在其中發(fā)揮重要的調(diào)控作用[12-13]。研究表明,PKA信號(hào)通路對(duì)于負(fù)性調(diào)控血小板功能發(fā)揮著重要作用,激活該信號(hào)通路可使血小板血管擴(kuò)張刺激磷蛋白酶發(fā)生磷酸化,進(jìn)而抑制cPLA2磷酸化、血小板TxA2生成和顆粒物的釋放等,從而抑制血小板聚集、活化和血栓形成[14]。 另外,PKA也可通過抑制鈣離子動(dòng)員和MAPKs信號(hào)通路(包括細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)1/2、c-Jun氮端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)1/2和p38 MAPK)發(fā)揮抑制cPLA2磷酸化和TxA2生成的作用[7,13]。

    營(yíng)養(yǎng)膳食干預(yù)在心血管疾病,尤其是動(dòng)脈粥樣硬化和血栓性疾病的早期防治中起著重要的作用[15]。輔酶Q10(coenzyme Q10,CoQ10)是一種類似于維生素的脂溶性苯醌,在動(dòng)物臟器(心臟、肝臟、腎臟)、牛肉、豆油、花生等食物中含量相對(duì)較高[16]。大量的流行病學(xué)、臨床實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,CoQ10具有抑制心血管疾病、糖尿病、神經(jīng)退行性疾病、線粒體疾病等的作用,其機(jī)制主要包括抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)糖脂代謝紊亂和改善內(nèi)皮細(xì)胞等[17]。關(guān)于CoQ10對(duì)血小板功能調(diào)控作用的研究較少,僅有部分研究發(fā)現(xiàn)靜脈注射外源性CoQ10能顯著降低小腸缺血性再灌注動(dòng)物模型的血小板活化與聚集[18];健康成人每天服用100 mg CoQ10可以顯著減小外周血中血小板體積,并能顯著降低血小板整合素αVβ3受體的表達(dá)[19]。本課題組前期進(jìn)行的體外實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與人群干預(yù)研究結(jié)果表明,CoQ10可抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的人和小鼠血小板聚集和活化以及血栓形成,其中的機(jī)制可能是CoQ10抑制血小板整合素αIIbβ3介導(dǎo)的信號(hào)通路和上調(diào)cAMP/PKA信號(hào)通路[20-22]。但目前CoQ10是否影響血小板TxA2的生成尚鮮見報(bào)道,因此本研究通過體外實(shí)驗(yàn)探討CoQ10對(duì)血小板TxA2生成的影響及其調(diào)控機(jī)制,為CoQ10防治心血管疾病提供新的理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    CoQ10粉末(純度≥98%)、凝血酶(活 力≥2000 NIH units/mg)、PKA特異性抑制劑H89 美國(guó) Sigma-Aldrich公司;膠原 美國(guó)Chrono-log公司;Convulxin、苯乙酮 德國(guó)Cayman Chemical公司;一抗phospho-cPLA2(Ser505)、β-actin以及二抗羊抗兔 美國(guó)Cell Signaling Technology公司;TxB2檢測(cè)試劑盒 美國(guó)Enzo Life Sciences公司;雙辛丁酸(bicinchonic acid,BCA)蛋白濃度測(cè)定試劑盒 中國(guó)Beyotime 公司。其他試劑均為色譜級(jí)(純度≥95%),實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。

    1.2 儀器與設(shè)備

    21號(hào)一次性采血針、真空負(fù)壓采血管和一次性注射器 湖南瀏陽(yáng)市醫(yī)用儀器廠;低溫高速離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司;小型高速離心機(jī) 美國(guó)Grant-Bio公司;多功能酶標(biāo)儀 德國(guó)BMG LabTech公司;低溫冰箱 青島 海爾有限公司;萬分之一分析天平 瑞士Swiss公司。

    1.3 方法

    1.3.1 研究對(duì)象的篩選

    從大理大學(xué)校內(nèi)招募15 名健康成年志愿者(年齡25~40 歲),志愿者要求在至少2 周內(nèi)未服用任何抗血小板的藥物(包括臨床上常用于治療血栓性疾病的藥物,如阿司匹林、P2Y12受體拮抗劑、αIIbβ3受體抑制劑和磷酸二酯酶抑制劑等),至少近4 周內(nèi)無每天飲用茶、咖啡和紅酒,且近半年內(nèi)未補(bǔ)充CoQ10、維生素等膳食營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充產(chǎn)品;無吸煙(指每天吸卷煙≥1 支,且持續(xù)或累計(jì)6 個(gè)月)、酗酒(指成年男性每日飲酒量超過25 g,女性超過15 g)等不良生活習(xí)慣。志愿者出現(xiàn)以下至少1 種情況將予以排除,包括現(xiàn)在或既往患有冠心病、中風(fēng)、糖尿病、高血壓、高血脂、免疫缺陷病、惡性腫瘤、血小板功能障礙等血液系統(tǒng)疾病等病史;或者濫用藥物、酗酒、吸煙半年以上;或現(xiàn)正服用或半年內(nèi)服用任何影響血小板功能的藥物等。該研究實(shí)施前,每個(gè)志愿者均已簽署知情同意書,且該研究已通過大理大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),并完全按照赫爾辛基宣言和體制準(zhǔn)則進(jìn)行。

    1.3.2 健康人血樣及純化血小板的制備

    健康志愿者在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下,采用21號(hào)一次性采血針,抽取肘靜脈血15 mL,注入含枸櫞酸鈉的真空抗凝管中(V(血樣)∶V(抗凝劑)=9∶1),輕輕混勻,室溫下靜置15 min后離心(300×g、7 min、22 ℃),為避免吸到白細(xì)胞層和紅細(xì)胞層,小心吸取上層3/4體積的上清液即可得到富血小板血漿(platelet rich plasma,PRP),剩余血樣離心(10000×g、15 min、22 ℃),小心吸取上清液得到貧血小板血漿(platelet poor plasma,PPP),PRP和PPP放入37 ℃恒溫孵育箱中備用。純化血小板的制備過程采用本實(shí)驗(yàn)室成熟的純化血小板分離方法[21-23],通過Sepharose CL-2B凝膠系統(tǒng)純化PRP進(jìn)行純化血小板的制備。

    1.3.3 實(shí)驗(yàn)分組

    本研究涉及的實(shí)驗(yàn)組別有:靜息組:既不經(jīng)激動(dòng)劑(如凝血酶、膠原和Convulxin)激活,也不經(jīng)二甲基亞砜 (dimethyl sulfoxide,DMSO)處理;DMSO組:即溶劑對(duì)照組,在血小板懸液中加入體積分?jǐn)?shù)0.05%的DMSO;CoQ10組:分別經(jīng)1、10 μmol/L和100 μmol/L CoQ10處理;苯乙酮組:血小板經(jīng)1 μmol/L的苯乙酮處理;CoQ10+苯乙酮組:血小板經(jīng)100 μmol/L CoQ10和1 μmol/L的苯乙酮聯(lián)合處理;H89組:血小板經(jīng)10 μmol/L的H89處理;CoQ10+H89組:血小板經(jīng)100 μmol/L CoQ10和10 μmol/L的H89聯(lián)合處理。除了靜息組外,其他各組血小板均經(jīng)激動(dòng)劑誘導(dǎo)激活。

    1.3.4 血小板TxB2釋放水平的檢測(cè)

    血小板TxB2釋放水平的檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測(cè)。用不同濃度(1、10、100 μmol/L)的CoQ10或溶劑對(duì)照與健康成人純化血小板(1×108個(gè)/mL)在體外共同孵育50 min,然后加入1 mmol/L的CaCl2溶液,用0.5 U/mL 的凝血酶或2 μg/mL的膠原或50 ng/mL的Convulxin激活血小板5 min后,放于冰上終止反應(yīng),然后離心(10000×g、15 min、4 ℃),收集上清液,-80 ℃保存?zhèn)溆?,用于檢測(cè)血小板釋放TxB2水平。

    進(jìn)一步在cPLA2特異性抑制劑苯乙酮或者PKA特異性抑制劑H89存在的條件下,考察CoQ10對(duì)TxA2生成水平的調(diào)控作用。1 μmol/L苯乙酮或10 μmol/L H89提前與血小板共同孵育30 min,然后用100 μmol/L CoQ10或溶劑對(duì)照與血小板共同孵育50 min,并加入1 mmol/L CaCl2溶液,用0.5 U/mL凝血酶或者2 μg/mL膠原激活血小板5 min后,放于冰上終止反應(yīng),然后離心(10000×g、15 min、4 ℃),收集上清液,檢測(cè)血小板釋放的TxB2水平。

    1.3.5 蛋白免疫印跡法檢測(cè)蛋白表達(dá)水平

    用不同濃度(1、10、100 μmol/L)的CoQ10或者溶劑對(duì)照與健康成人純化血小板(2.5×108個(gè)/mL)在體外共同孵育50 min,然后加入1 mmol/L CaCl2溶液,用0.5 U/mL的凝血酶或2 μg/mL的膠原激活血小板5 min后,放于冰上終止反應(yīng),然后離心(10000×g、15 min、4 ℃),棄上清液。向血小板沉淀中加入細(xì)胞裂解液和蛋白酶抑制劑,然后置于冰上裂解30 min,離心(12000×g、15 min、4 ℃),收集上清液得到血小板蛋白,采用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)量濃度后進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳,轉(zhuǎn)膜后分別加入一抗(phospho-cPLA2、β-actin)和二抗,然后用自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)對(duì)條帶曝光,并用Quantity One軟件分析條帶灰度,計(jì)算蛋白表達(dá)相對(duì)表達(dá)量[21-23]。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件采用單因素方差分析進(jìn)行多組間比較,采用Bonferroni Post-hoc Analysis法進(jìn)行組間兩兩比較,雙側(cè)P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;同時(shí)采用GraphPad Prism 5.0軟件作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 CoQ10對(duì)激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成的影響

    圖 1 CoQ10對(duì)激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成的影響Fig. 1 Effect of CoQ10 on agonist-induced platelet TxA2 generation

    由于激動(dòng)劑激活血小板生成的TxA2不穩(wěn)定,極易被代謝生成穩(wěn)定的代謝物TxB2,因此通常檢測(cè)TxB2的水平,用TxB2質(zhì)量濃度反映血小板TxA2的生成情況[10-11]。如圖1A~C所示,通過酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與靜息組相比,DMSO組TxB2質(zhì)量濃度高度顯著升高(P<0.001), 表明血小板激動(dòng)劑凝血酶、膠原和糖蛋白VI激動(dòng)劑Convulxin激活后血小板TxA2生成水平顯著提高。經(jīng)不同濃度CoQ10預(yù)處理后,與DMSO組相比,雖然1 μmol/L CoQ10對(duì)凝血酶和膠原誘導(dǎo)的血小板TxA2生成水平?jīng)]有顯著影響(P>0.05),但是10 μmol/L和100 μmol/L的CoQ10可顯著降低血小板TxA2生成水平(P<0.05、P<0.01)。 在Convulxin刺激下,僅100 μmol/L的CoQ10可極顯著抑制血小板TxA2生成水平(P<0.01)。以上結(jié)果表明,CoQ10可顯著抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成。

    2.2 CoQ10對(duì)激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板cPLA2活化的影響

    圖 2 CoQ10對(duì)激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板cPLA2磷酸化的影響Fig. 2 Effect of CoQ10 on agonist-induced platelet cPLA2 phosphorylation

    大量研究表明,cPLA2蛋白酶活化對(duì)于調(diào)控血小板TxA2的生成起關(guān)鍵作用,當(dāng)cPLA2活化時(shí),表現(xiàn)為其Ser505位點(diǎn)發(fā)生磷酸化[7]。如圖2A、B所示,與靜息組相比,當(dāng)血小板與DMSO共同孵育后,受到激動(dòng)劑凝血酶和膠原的刺激時(shí)cPLA2(Ser505)磷酸化水平高度顯著升高(P<0.001)。當(dāng)CoQ10與血小板共同孵育后,100 μmol/L的CoQ10可顯著下調(diào)凝血酶誘導(dǎo)的血小板cPLA2(Ser505)磷酸化水平,與DMSO組相比差異高度顯著(P<0.001);然而較低濃度(1 μmol/L和10 μmol/L)的CoQ10則不能抑制凝血酶誘導(dǎo)的血小板cPLA2(Ser505)發(fā)生磷酸化(P>0.05)。與DMSO組相比,1、10 μmol/L和100 μmol/L的CoQ10均可高度顯著降低膠原誘導(dǎo)的血小板cPLA2(Ser505)磷酸化水平 (P<0.001)。以上結(jié)果表明,CoQ10可顯著抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板cPLA2活化。

    2.3 cPLA2活化在CoQ10抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成中的作用

    前期研究已發(fā)現(xiàn),CoQ10可顯著抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成以及cPLA2活化,但是CoQ10抑制TxA2生成是否通過其下調(diào)cPLA2磷酸化水平尚不清楚。由 圖3A、B可知,與DMSO組相比,cPLA2的特異性抑制劑苯乙酮可極顯著抑制凝血酶和膠原誘導(dǎo)的血小板TxA2生成(P<0.01);此外,1 μmol/L苯乙酮和100 μmol/L CoQ10聯(lián)合處理組與單獨(dú)的1 μmol/L苯乙酮處理、100 μmol/L CoQ10處理組相比,對(duì)TxA2生成的影響無顯著差異 (P>0.05),表明1 μmol/L苯乙酮和100 μmol/L CoQ10聯(lián)合使用時(shí)對(duì)TxA2生成的抑制作用無相加或協(xié)同作用。以上結(jié)果說明,CoQ10抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成主要通過抑制cPLA2活化來實(shí)現(xiàn)。

    圖 3 cPLA2活化在CoQ10抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成中的作用Fig. 3 Roles of cPLA2 activation in CoQ10-inhibited platelet TxA2 generation induced by agonists

    2.4 PKA介導(dǎo)的信號(hào)通路在CoQ10調(diào)控激動(dòng)劑誘導(dǎo)的 血小板cPLA2活化和TxA2生成中的作用

    圖 4 PKA信號(hào)通路在CoQ10抑制凝血酶誘導(dǎo)的血小板cPLA2活化(A)和TxA2生成(B)中的作用Fig. 4 Roles of PKA signaling pathway in the inhibitory effect of CoQ10 to platelet cPLA2 activation (A) and TxA2 generation (B) induced by thrombin

    CoQ10通過激活環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/PKA介導(dǎo)的信號(hào)通路,進(jìn)而發(fā)揮抑制血小板激活、聚集和血栓形成的作用[21]。因此,進(jìn)一步探討CoQ10抑制血小板cPLA2活化和TxA2生成是否受其激活cAMP/PKA信號(hào)通路所調(diào)控。由圖4A可知,PKA特異性抑制劑H89對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板cPLA2磷酸化的影響與DMSO組相比無顯著差異(P>0.05),表明凝血酶誘導(dǎo)的cPLA2磷酸化水平可能已達(dá)到最大值;10 μmol/L H89與100 μmol/L CoQ10聯(lián)合處理組與DMSO組相比無顯著差異(P>0.05),表明10 μmol/L H89幾乎可完全逆轉(zhuǎn)100 μmol/L CoQ10對(duì)凝血酶誘導(dǎo)cPLA2磷酸化的抑制作用。H89對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板TxA2生成的影響與cPLA2磷酸化類似(圖4B)。以上結(jié)果表明,CoQ10抑制凝血酶誘導(dǎo)的血小板cPLA2活化和TxA2生成主要通過激活PKA介導(dǎo)的信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)??傊狙芯拷Y(jié)果表明,CoQ10抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成的主要機(jī)制是調(diào)控PKA/cPLA2介導(dǎo)的信號(hào)通路。

    3 討 論

    動(dòng)脈粥樣硬化性和血栓性心血管疾病,如中風(fēng)、冠心病等,已經(jīng)成為全球范圍內(nèi)的重要疾病,血小板TxA2的異常生成和分泌在心血管疾病發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[9-10]。抑制血小板TxA2的生成及其介導(dǎo)的信號(hào)通路已經(jīng)成為防治動(dòng)脈粥樣硬化和血栓性心血管疾病的重要靶標(biāo)之一。開發(fā)研究抑制調(diào)控TxA2合成通路中的關(guān)鍵酶(包括COX和cPLA2等)以及抑制TxA2受體(如TP受體)對(duì)于抑制TxA2介導(dǎo)的血栓形成至關(guān)重要[7]。目前,市面上已出現(xiàn)的一些抗血小板藥物可通過抑制TxA2信號(hào)通路發(fā)揮有效抑制血栓形成的作用,其中最重要的是阿司匹林,其作用機(jī)制主要是抑制COX[24]。此外,奧扎格雷可抑制血栓素合成酶的活性,利多格雷可作為TP受體的拮抗劑[7]。但是這些藥物發(fā)揮抗血栓形成作用的過程中往往伴有嚴(yán)重的副反應(yīng),其中最嚴(yán)重的是易導(dǎo)致出血以及藥物性抵抗等,因此在心血管疾病尤其是血栓性疾病的早期治療中受到很大的限制[25]。臨床干預(yù)研究證實(shí),CoQ10是一種較為安全的膳食補(bǔ)充劑,可長(zhǎng)期使用以防治心血管疾病,而且鮮有出血副反應(yīng)的報(bào)道[26]。本研究通過使用體外實(shí)驗(yàn)的方法闡明CoQ10可顯著抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成,這為膳食補(bǔ)充CoQ10防治血栓性疾病提供新的理論依據(jù)。

    調(diào)控血小板TxA2生成的機(jī)制復(fù)雜,cPLA2的活化在其中起關(guān)鍵作用[7]。當(dāng)血小板受到血液中可溶性激動(dòng)劑如凝血酶、ADP等或者損傷血管內(nèi)皮暴露的膠原蛋白刺激時(shí),可促發(fā)胞內(nèi)一系列信號(hào)傳導(dǎo)事件,如激活糖蛋白VI信號(hào)通路、G蛋白偶聯(lián)受體和鈣離子動(dòng)員等,最終導(dǎo)致血小板cPLA2磷酸化,進(jìn)而促進(jìn)TxA2的生成[9]。CoQ10抑制凝血酶和膠原誘導(dǎo)血小板TxA2生成的主要機(jī)制是抑制cPLA2活化,因?yàn)閏PLA2的特異性抑制劑苯乙酮與CoQ10聯(lián)合使用時(shí),對(duì)TxA2生成的抑制作用無相加或協(xié)同作用。其他信號(hào)通路也可能在CoQ10調(diào)控血小板TxA2生成的過程中起調(diào)控作用,這需要在后續(xù)研究中進(jìn)一步探討。此外,前期研究結(jié)果表明cAMP/PKA信號(hào)通路在CoQ10抑制血小板活化、聚集和血栓形成中具有重要作用[14], 本研究發(fā)現(xiàn)CoQ10抑制cPLA2活化和TxA2生成受其激活PKA信號(hào)通路的調(diào)控作用,因?yàn)镻KA抑制劑H89可完全逆轉(zhuǎn)CoQ10的作用。因此可以推斷,CoQ10可能通過激活cAMP/PKA信號(hào)通路抑制cPLA2活化和TxA2生成,進(jìn)而抑制血小板整合素αIIbβ3活化,從而發(fā)揮抑制血小板化、聚集和血栓形成的作用。

    前期的人群干預(yù)研究結(jié)果表明,膳食補(bǔ)充CoQ10顯著抑制血脂紊亂人群血小板聚集和顆粒物的釋放,但是值得注意的是,經(jīng)過24 周的CoQ10(120 mg/d)干預(yù)后,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)患者血漿CoQ10濃度約為2 μmol/L[21]。而本研究的體外實(shí)驗(yàn)中所用CoQ10劑量為1、10 μmol/L和 100 μmol/L,與其他體外實(shí)驗(yàn)研究所用的劑量一致[27-28],并且發(fā)現(xiàn)對(duì)血小板功能具有顯著抑制作用的劑量主要為10 μmol/L和100 μmol/L,這遠(yuǎn)高于人群干預(yù)研究中能抑制血小板功能的血漿CoQ10濃度(約2 μmol/L),原因可能是在體外實(shí)驗(yàn)中短時(shí)間(50 min)作用于血小板需要更高的劑量才能有效地抑制血小板功能,而在人群干預(yù)研究中通過24 周的長(zhǎng)期膳食干預(yù),血液中即使較低濃度的CoQ10也可以顯著抑制血小板聚集和活化等。研究發(fā)現(xiàn)膳食補(bǔ)充CoQ10具有較高的安全性,健康人攝入CoQ10劑量高達(dá)2400 mg/d時(shí)未見顯著的毒副作用[26]。在其他臨床干預(yù)研究中,如對(duì)高脂血癥、糖尿病、心力衰竭和帕金森疾病等患者使用劑量不等(50~1500 mg/d)的CoQ10進(jìn)行干預(yù),發(fā)現(xiàn)患者對(duì)該劑量范圍的CoQ10耐受性良好,血液中CoQ10濃度可高達(dá)10.2 μmol/L[26]。因此, 在本研究的體外實(shí)驗(yàn)中CoQ10產(chǎn)生效應(yīng)的濃度在人群血液中是可以達(dá)到的。

    綜上,CoQ10具有顯著抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板TxA2生成的作用,其機(jī)制主要是調(diào)控PKA/cPLA2介導(dǎo)的信號(hào)通路。本研究從營(yíng)養(yǎng)膳食或從功能食品途徑為CoQ10防治血栓性心血管疾病提供了一定的理論依據(jù)。

    猜你喜歡
    苯乙酮凝血酶激動(dòng)劑
    超聲引導(dǎo)下壓迫聯(lián)合瘤腔注射凝血酶治療醫(yī)源性假性動(dòng)脈瘤的臨床觀察
    苯乙酮的制備研究
    苯乙酮的制備研究
    磁珠固定化凝血酶的制備及其在槐米中活性化合物篩選中的應(yīng)用
    綠蘿花中抗2型糖尿病PPARs激動(dòng)劑的篩選
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:22
    GPR35受體香豆素類激動(dòng)劑三維定量構(gòu)效關(guān)系研究
    新型N-雜環(huán)取代苯乙酮衍生物的合成
    AMPK激動(dòng)劑AICAR通過阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期抑制肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖
    凝血酶在預(yù)防乳腺微創(chuàng)旋切術(shù)后出血中的應(yīng)用價(jià)值
    羊血凝血酶制備條件優(yōu)化
    22中文网久久字幕| 婷婷六月久久综合丁香| 精品久久久久久电影网 | 少妇人妻一区二区三区视频| 日本黄色视频三级网站网址| 国产极品天堂在线| 成人欧美大片| 真实男女啪啪啪动态图| 99久久人妻综合| 啦啦啦啦在线视频资源| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美一区二区国产精品久久精品| 26uuu在线亚洲综合色| 精品午夜福利在线看| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 全区人妻精品视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产亚洲91精品色在线| 欧美日本视频| av线在线观看网站| 人妻系列 视频| 久久午夜福利片| 丰满乱子伦码专区| 免费av毛片视频| 国产一区二区三区av在线| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产毛片a区久久久久| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 免费av不卡在线播放| 久久精品国产自在天天线| 22中文网久久字幕| 国产熟女欧美一区二区| 免费av不卡在线播放| 黄色日韩在线| 女人久久www免费人成看片 | 亚洲av福利一区| 最近最新中文字幕免费大全7| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美三级亚洲精品| 黄色欧美视频在线观看| 久久久欧美国产精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 熟女人妻精品中文字幕| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 日本免费一区二区三区高清不卡| 床上黄色一级片| 午夜福利视频1000在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 熟女电影av网| 变态另类丝袜制服| 精品人妻熟女av久视频| 看黄色毛片网站| 一区二区三区高清视频在线| 色综合站精品国产| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲av日韩在线播放| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 中文亚洲av片在线观看爽| 精品国产三级普通话版| 一边摸一边抽搐一进一小说| 精品久久久噜噜| 高清午夜精品一区二区三区| 国产亚洲91精品色在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| av专区在线播放| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 精品久久久久久久末码| 老女人水多毛片| 看十八女毛片水多多多| 亚洲av男天堂| 亚洲欧美日韩高清专用| 看片在线看免费视频| ponron亚洲| 床上黄色一级片| 久99久视频精品免费| 99热精品在线国产| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲国产欧美人成| 欧美丝袜亚洲另类| 麻豆成人av视频| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久久大精品| 婷婷色av中文字幕| 大香蕉久久网| 99久久中文字幕三级久久日本| 丰满少妇做爰视频| 国产在线一区二区三区精 | 日本av手机在线免费观看| 韩国高清视频一区二区三区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲国产精品sss在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲av二区三区四区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产在视频线精品| 国产探花在线观看一区二区| 日日啪夜夜撸| 日韩av在线大香蕉| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 五月玫瑰六月丁香| 国产精品国产三级国产专区5o | 日韩高清综合在线| 51国产日韩欧美| 乱码一卡2卡4卡精品| 插逼视频在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久午夜福利片| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 小说图片视频综合网站| 国产一区二区在线av高清观看| 精品人妻熟女av久视频| 久久鲁丝午夜福利片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 中文字幕免费在线视频6| .国产精品久久| 精品一区二区免费观看| 国产淫片久久久久久久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲国产精品sss在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 99久国产av精品| 亚洲在线观看片| 我的老师免费观看完整版| 村上凉子中文字幕在线| 精品免费久久久久久久清纯| 中文在线观看免费www的网站| 欧美三级亚洲精品| 深爱激情五月婷婷| 亚洲精品一区蜜桃| 婷婷色麻豆天堂久久 | 亚洲中文字幕日韩| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产老妇女一区| 少妇的逼好多水| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲电影在线观看av| 97在线视频观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 免费观看在线日韩| 搡老妇女老女人老熟妇| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产亚洲5aaaaa淫片| 久久韩国三级中文字幕| 午夜免费男女啪啪视频观看| 99久久精品热视频| 久久久久性生活片| 在线a可以看的网站| 精品久久国产蜜桃| 免费看日本二区| 亚洲成色77777| 五月玫瑰六月丁香| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 婷婷色综合大香蕉| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 岛国毛片在线播放| 久久久久久大精品| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 我要搜黄色片| 国产精品嫩草影院av在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 中文天堂在线官网| 99在线人妻在线中文字幕| 久久久久九九精品影院| 级片在线观看| 精品酒店卫生间| 哪个播放器可以免费观看大片| 丰满乱子伦码专区| 1024手机看黄色片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 内射极品少妇av片p| 又粗又爽又猛毛片免费看| 长腿黑丝高跟| 在现免费观看毛片| 久久精品国产亚洲av天美| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲自拍偷在线| 一级二级三级毛片免费看| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产日韩欧美在线精品| 小说图片视频综合网站| 男女国产视频网站| 国产综合懂色| 国产亚洲5aaaaa淫片| 97热精品久久久久久| 久久久欧美国产精品| 亚洲美女视频黄频| 超碰97精品在线观看| av.在线天堂| 成人漫画全彩无遮挡| 天堂影院成人在线观看| 日本午夜av视频| 99久国产av精品国产电影| 伦精品一区二区三区| 亚洲国产精品专区欧美| 人妻系列 视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 99热这里只有精品一区| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲av免费高清在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 日韩欧美三级三区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 午夜福利在线在线| 亚洲国产精品成人久久小说| h日本视频在线播放| 亚洲精品国产成人久久av| 内地一区二区视频在线| 日本与韩国留学比较| 丰满少妇做爰视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产成人免费观看mmmm| 成人亚洲精品av一区二区| 久久久久久九九精品二区国产| 99久久无色码亚洲精品果冻| 久久久久免费精品人妻一区二区| 色哟哟·www| 亚洲国产精品久久男人天堂| 蜜臀久久99精品久久宅男| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久精品影院6| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲电影在线观看av| 日本爱情动作片www.在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 黄片wwwwww| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产亚洲91精品色在线| 国产91av在线免费观看| 日韩欧美精品v在线| 国产精品嫩草影院av在线观看| 黄色配什么色好看| 乱人视频在线观看| 成人欧美大片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产在视频线在精品| 亚洲真实伦在线观看| 日本欧美国产在线视频| 小说图片视频综合网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 免费观看精品视频网站| 最新中文字幕久久久久| 亚洲国产欧美在线一区| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲精品亚洲一区二区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 日本免费在线观看一区| 国产精品久久视频播放| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 乱人视频在线观看| 看黄色毛片网站| 亚洲精品色激情综合| 国产精品久久久久久久久免| 国产三级中文精品| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 深爱激情五月婷婷| 国产成人午夜福利电影在线观看| 天堂√8在线中文| 久久久久久久久久久丰满| 国产真实伦视频高清在线观看| 大香蕉97超碰在线| 久久久久久久久久久免费av| 一个人免费在线观看电影| a级一级毛片免费在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 晚上一个人看的免费电影| 日韩人妻高清精品专区| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 嫩草影院精品99| 国产高清三级在线| av免费在线看不卡| 天堂影院成人在线观看| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲精品一区蜜桃| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 超碰97精品在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 美女cb高潮喷水在线观看| 大香蕉久久网| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 中文字幕av在线有码专区| 美女黄网站色视频| 精品久久久久久久久久久久久| 婷婷色综合大香蕉| 如何舔出高潮| 免费观看a级毛片全部| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 成年女人看的毛片在线观看| 男人的好看免费观看在线视频| 看免费成人av毛片| 精品免费久久久久久久清纯| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 视频中文字幕在线观看| 亚洲在久久综合| 男女国产视频网站| 日韩欧美在线乱码| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲在线自拍视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产91av在线免费观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 成年免费大片在线观看| 久久99蜜桃精品久久| 三级毛片av免费| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产精品久久久久久av不卡| 波野结衣二区三区在线| av国产久精品久网站免费入址| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久99热这里只频精品6学生 | 床上黄色一级片| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产在线一区二区三区精 | 成年免费大片在线观看| 亚洲自拍偷在线| 国产视频内射| 国产一区二区三区av在线| 三级国产精品片| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久久久性生活片| 免费看a级黄色片| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久久久网色| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 午夜老司机福利剧场| 成年版毛片免费区| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久综合国产亚洲精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品女同一区二区软件| 91狼人影院| 九九热线精品视视频播放| 成人美女网站在线观看视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 男女那种视频在线观看| 国产成人精品婷婷| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 久久综合国产亚洲精品| 精品少妇黑人巨大在线播放 | av.在线天堂| 亚洲精品国产av成人精品| 国产成人精品在线电影| 美国免费a级毛片| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲国产最新在线播放| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品99久久99久久久不卡 | 插逼视频在线观看| 老司机亚洲免费影院| 亚洲第一区二区三区不卡| 大香蕉97超碰在线| 久久久久久久久久久久大奶| 一二三四在线观看免费中文在 | 高清欧美精品videossex| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 午夜福利影视在线免费观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 2021少妇久久久久久久久久久| 永久网站在线| 国产成人aa在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 最近的中文字幕免费完整| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久精品夜色国产| 欧美日韩成人在线一区二区| 久热久热在线精品观看| 最新中文字幕久久久久| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲综合色网址| 国产色婷婷99| 亚洲精品国产色婷婷电影| 宅男免费午夜| 一区二区三区四区激情视频| 久久国产精品大桥未久av| 日韩免费高清中文字幕av| 制服丝袜香蕉在线| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲精品,欧美精品| 成人二区视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 在线观看人妻少妇| 有码 亚洲区| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 夜夜爽夜夜爽视频| 久久久精品94久久精品| 人妻一区二区av| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 成年人免费黄色播放视频| 高清不卡的av网站| 熟女电影av网| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产免费一级a男人的天堂| 国产成人aa在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲av综合色区一区| 国产熟女午夜一区二区三区| 日日啪夜夜爽| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 满18在线观看网站| 99热全是精品| 26uuu在线亚洲综合色| 乱人伦中国视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久婷婷青草| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 十八禁网站网址无遮挡| 午夜老司机福利剧场| 大话2 男鬼变身卡| 三级国产精品片| 五月伊人婷婷丁香| 涩涩av久久男人的天堂| 国产免费福利视频在线观看| 精品国产国语对白av| 日韩一区二区视频免费看| a 毛片基地| 亚洲成人av在线免费| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久午夜综合久久蜜桃| 男人添女人高潮全过程视频| 日韩精品有码人妻一区| 丝袜脚勾引网站| 99精国产麻豆久久婷婷| xxxhd国产人妻xxx| 热99久久久久精品小说推荐| 日韩av免费高清视频| 午夜福利视频在线观看免费| 免费在线观看黄色视频的| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产精品 国内视频| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲人成77777在线视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久久精品免费免费高清| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲伊人久久精品综合| 中文字幕亚洲精品专区| 哪个播放器可以免费观看大片| 欧美成人午夜精品| 22中文网久久字幕| 精品一区二区三区视频在线| 国产熟女欧美一区二区| 欧美日韩av久久| 亚洲精品视频女| 如何舔出高潮| 桃花免费在线播放| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产免费福利视频在线观看| 在线观看www视频免费| 一区二区av电影网| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久综合国产亚洲精品| 色94色欧美一区二区| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲精品,欧美精品| 高清毛片免费看| 一级片'在线观看视频| 亚洲国产精品999| 嫩草影院入口| 母亲3免费完整高清在线观看 | tube8黄色片| 国产视频首页在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 日韩电影二区| 久久青草综合色| 最近中文字幕2019免费版| 国产片特级美女逼逼视频| 香蕉国产在线看| 男女午夜视频在线观看 | 日本黄色日本黄色录像| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久精品国产亚洲av天美| 九色成人免费人妻av| 国产毛片在线视频| 一区二区三区乱码不卡18| 22中文网久久字幕| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 九色成人免费人妻av| 久久久久精品人妻al黑| 老司机亚洲免费影院| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品亚洲成a人片在线观看| 多毛熟女@视频| 精品酒店卫生间| 成年人午夜在线观看视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 男女午夜视频在线观看 | 波野结衣二区三区在线| 最近的中文字幕免费完整| 26uuu在线亚洲综合色| 欧美97在线视频| 免费大片18禁| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久久精品区二区三区| 一级毛片 在线播放| 免费看不卡的av| 久久午夜福利片| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品一区蜜桃| 搡老乐熟女国产| 色网站视频免费| 99热全是精品| 色吧在线观看| 人妻一区二区av| 婷婷色综合www| 日本与韩国留学比较| 91成人精品电影| av天堂久久9| 国产男女超爽视频在线观看| 久久人人爽人人片av| 国产一区二区在线观看av| 另类亚洲欧美激情| 亚洲国产最新在线播放| 久久99精品国语久久久| av黄色大香蕉| 久久午夜综合久久蜜桃| 日本免费在线观看一区| 国产精品久久久久久精品古装| 99久久中文字幕三级久久日本| 宅男免费午夜| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产高清三级在线| 久久青草综合色| 永久免费av网站大全| 香蕉精品网在线| 国产男女内射视频| 亚洲经典国产精华液单| 麻豆乱淫一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 又黄又粗又硬又大视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲三级黄色毛片| 美女福利国产在线| 最新的欧美精品一区二区| 在线观看人妻少妇| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美精品一区二区大全| 丝瓜视频免费看黄片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 欧美3d第一页| 一边亲一边摸免费视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精品乱久久久久久| 看免费成人av毛片| 少妇人妻精品综合一区二区| 色吧在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 曰老女人黄片| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 有码 亚洲区| 免费av不卡在线播放| 国产亚洲一区二区精品| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产精品.久久久| 少妇人妻精品综合一区二区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产在线视频一区二区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲av.av天堂| 亚洲久久久国产精品| 色婷婷久久久亚洲欧美| 一区二区av电影网| 亚洲性久久影院| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 视频区图区小说| 熟女av电影| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲国产av影院在线观看| 高清视频免费观看一区二区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产国语露脸激情在线看| 尾随美女入室| www日本在线高清视频| 免费在线观看黄色视频的| 18禁国产床啪视频网站| www日本在线高清视频| 亚洲国产av新网站| 亚洲在久久综合| 黄色视频在线播放观看不卡| 99久久中文字幕三级久久日本| 黄色一级大片看看| 国产精品一二三区在线看|