lncRNA BRE-AS1調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路影響宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的實(shí)驗(yàn)研究

張 若 張 鳶 海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院東湖分院婦產(chǎn)科?？?70100

宮頸癌是女性癌癥死亡的重要因素之一,已明確其病因與高危型人乳頭瘤病毒持續(xù)感染有關(guān)；近年來(lái)宮頸癌發(fā)病率和發(fā)病年齡有明顯升高和年輕化的趨勢(shì),嚴(yán)重威脅著廣大女性的身體健康[1-2]。隨著臨床治療的不斷發(fā)展,腫瘤精準(zhǔn)靶向治療有可能成為治愈宮頸癌的關(guān)鍵性策略,而尋找有效的作用靶點(diǎn)已成為學(xué)者們的研究熱點(diǎn)[3]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的非編碼RNA,不具有編碼蛋白質(zhì)的功能。研究顯示,宮頸癌組織中存在多種lncRNAs的異常表達(dá),而這些表達(dá)異常的lncRNAs可通過(guò)影響腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡等生物過(guò)程參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展,有望成為宮頸癌精準(zhǔn)靶向治療的重要靶標(biāo)[4-6]。BRE基因的反義RNA(BRE antisense RNA,AS1)是一種新發(fā)現(xiàn)的lncRNA,定位于人2p23.2染色體上,長(zhǎng)1 667 bp；被證實(shí)在腎細(xì)胞癌和前列腺癌組織中表達(dá)下調(diào),且可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡等發(fā)揮抑癌作用[7-8]。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn),lncRNA BRE-AS1在宮頸癌組織中異常低表達(dá),但其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用并不清楚[9]。因此,本研究開(kāi)展體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),通過(guò)觀察lncRNA BRE-AS1在宮頸癌SiHa細(xì)胞中的表達(dá)情況以及其對(duì)SiHa細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響,以揭示lncRNA BRE-AS1在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為宮頸癌的靶向治療提供新線索。

1 材料與方法

1.1 材料 人子宮頸上皮永生化細(xì)胞系H8和宮頸癌細(xì)胞系SiHa(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所)。低糖改良eagle培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle medium,DMEM)和胎牛血清(美國(guó)Hyclone公司),青霉素、鏈霉素和脂質(zhì)體2000(美國(guó)Invitrogen公司),0.25%胰蛋白酶和Trizol試劑(武漢博士德公司),二甲基亞砜(美國(guó)Life Technologies公司),噻唑藍(lán)試劑(美國(guó)Fisher Scientific公司),逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)試劑盒(華美生物工程公司),蛋白提取試劑盒(美國(guó)Activemotif公司),cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司),考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究),辣根過(guò)氧物化酶-抗山羊IgG二抗(北京中杉生物技術(shù)公司)。lncRNA BRE-AS1表達(dá)載體和空載體(上海Sangon公司構(gòu)建完成)。Transwell小室(美國(guó)BD FalconTM公司),凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)IMAGE公司),CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱(美國(guó)Sheldon公司),熒光顯微鏡(日本OLYMNPUS公司),紫外分光光度計(jì)(日本HITACHI公司),PCR儀(美國(guó)ABI公司),流式細(xì)胞儀(德國(guó)Beckman Coulter公司),酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(奧地利Anthos公司)。鼠抗人β-連環(huán)素(βcatenin)單克隆抗體(美國(guó)Abcam公司),兔抗人細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白多克隆抗體、鼠抗人c-Myc單克隆抗體、鼠抗人β-actin單克隆抗體和鼠抗人基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase,MMP-2)單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 采用含100 U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素和10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基在5%CO237℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)SiHa細(xì)胞和H8細(xì)胞。每隔1 d更換培養(yǎng)液,待細(xì)胞貼壁后加入0.25%胰蛋白酶消化,并按照1∶3比例傳代。

1.2.2 熒光定量PCR檢測(cè)lncRNA BRE-AS1的表達(dá) 采用Trizol法提取SiHa細(xì)胞和H8細(xì)胞的總RNA后,使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA的濃度與純度。以RNA為模板,參照cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。再以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA為模板,參照RT-PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)根據(jù)上海生工生物合成的PCR引物(lncRNA BRE-AS1上游:5′-GTTGATTGTCGGCATTACTG-3′,下游:5′-CATCGTTTTCAGAGGTTGTA-3′；β-actin上游5′-GGGAAATCGTGCGTGACATTAAG-3′,下 游:5′-TGTGTTGGCGTACAGGTCTTTG-3′)上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。采用2-ΔCt法檢測(cè)SiHa細(xì)胞和H8細(xì)胞中l(wèi)ncRNA BRE-AS1的表達(dá)水平。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組與細(xì)胞轉(zhuǎn)染 取6孔細(xì)胞板,并按照每孔105個(gè)細(xì)胞密度將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa細(xì)胞進(jìn)行接種。接種完畢后,置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分為未轉(zhuǎn)染組(正常培養(yǎng))、陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染空載體)和lncRNA BRE-AS1組(轉(zhuǎn)染lncRNA BRE-AS1表達(dá)載體),每組設(shè)置3個(gè)平行孔。待細(xì)胞培養(yǎng)至70%～80%匯合度時(shí),根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組參照脂質(zhì)體2000說(shuō)明書(shū)將lncRNA BRE-AS1表達(dá)載體和空載體轉(zhuǎn)染至SiHa細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染5 h后以新鮮培養(yǎng)液替換原培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng),48 h后以胰蛋白酶消化收集各組細(xì)胞,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中l(wèi)ncRNA BRE-AS1的表達(dá)水平以評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效果。

1.2.4 噻唑藍(lán)法檢測(cè)細(xì)胞增殖 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的lncRNA BRE-AS1組、陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞以3×104個(gè)/孔接種至96孔細(xì)胞板上后,置于恒溫箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)12 h、24 h、48 h和72 h后,棄培養(yǎng)液,加入5 g/L噻唑藍(lán)試劑20μl/孔孵育4 h。再加入二甲基亞砜150μl/孔振蕩反應(yīng)10 min。采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各組細(xì)胞的光密度值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5 平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆增殖能力 胰蛋白酶消化收集轉(zhuǎn)染48 h后的lncRNA BRE-AS1組、陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞后,調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個(gè)/ml。將細(xì)胞懸液按照100μl/孔接種至6孔細(xì)胞板上后,置于恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)12～14 d。有集落生成時(shí),終止培養(yǎng)。使用磷酸緩沖液洗滌細(xì)胞2次后,分別以10%甲醇、0.5%結(jié)晶紫對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定與染色,作用時(shí)間均為20 min。采用顯微鏡在低倍鏡下觀察拍照并計(jì)數(shù)。其中,將超過(guò)10個(gè)細(xì)胞的集落作為一個(gè)有效克隆,以克隆數(shù)與接種細(xì)胞數(shù)的百分比表示各組細(xì)胞的克隆形成率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.6 Transwell檢測(cè)細(xì)胞侵襲 采用無(wú)血清培養(yǎng)液按照1∶5比例對(duì)基質(zhì)膠稀釋后,加入Transwell小室濾膜上,使之均勻分布,室溫下干燥至充分融合。以胰蛋白酶消化收集轉(zhuǎn)染48 h后的lncRNA BRE-AS1組、陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞,并使用無(wú)血清培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104個(gè)/ml。將細(xì)胞懸液以200μl/孔接種至小室上層,并在小室下層每孔中加入600μl含血清培養(yǎng)液。置于恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24 h后,取出小室。以棉簽小心拭去濾膜上殘留的細(xì)胞后,使用甲醛和結(jié)晶紫分別對(duì)膜下細(xì)胞進(jìn)行固定與染色,使用顯微鏡并在高倍鏡下觀察各組中的穿膜細(xì)胞數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡 胰蛋白酶消化收集轉(zhuǎn)染48 h后的lncRNA BRE-AS1組、陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞,經(jīng)1 000 r/min離心5 min后,采用磷酸緩沖液洗滌2次。加入500μl結(jié)合緩沖液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105個(gè)/ml,向100μl的細(xì)胞懸液中加入膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)、碘化丙啶各5μl,置于避光條件下反應(yīng)15 min。在60 min內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.8 Western blot檢測(cè)細(xì)胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1和MMP-2蛋白的表達(dá) 參照總蛋白提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取轉(zhuǎn)染48 h后的lncRNA BRE-AS1組、陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞總蛋白,并根據(jù)考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)總蛋白的濃度進(jìn)行定量。將蛋白樣品與5×上樣緩沖液(4∶1)混勻后,置于100℃水浴鍋中煮沸5 min。將熱變性后的蛋白樣品按照60μg/孔加入十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行電泳分離。電泳停止后,采用半干法轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯膜。以5%脫脂奶粉封膜2 h后,將膜浸入到一抗工作液(β-catenin 1∶1 000、c-Myc 1∶500、Cyclin D1 1∶500、MMP-2 1∶800和β-actin 1∶1 000抗體)中搖床上4℃孵育過(guò)夜。次日,以二抗工作液(1∶5 000)搖床上室溫孵育1 h后,以發(fā)光劑顯色,凝膠成像系統(tǒng)掃描,Image J軟件分析各組細(xì)胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1和MMP-2蛋白的表達(dá)水平,其中以β-actin作為內(nèi)參對(duì)目的蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行校正。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以形式表示,采用SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,多組間比較使用單因素方差分析,組間多重比較采用SNK-q,兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 lncRNA BRE-AS1在宮頸癌SiHa細(xì)胞中的表達(dá)及轉(zhuǎn)染效果 熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,宮頸癌SiHa細(xì)胞中l(wèi)ncRNA BRE-AS1的表達(dá)水平為0.25±0.03,與人子宮頸上皮永生化細(xì)胞H8中l(wèi)ncRNA BRE-AS1的表達(dá)水平1.00±0.07相比,明顯降低(t=29.54,P=0.00＜0.01)；在宮頸癌SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染lncRNA BRE-AS1表達(dá)載體后發(fā)現(xiàn)lncRNA BRE-AS1的表達(dá)水平較未轉(zhuǎn)染組明顯升高(P＜0.05)；但轉(zhuǎn)染空載體(陰性對(duì)照組)的SiHa細(xì)胞中l(wèi)ncRNA BRE-AS1的表達(dá)水平與未轉(zhuǎn)染組相比未見(jiàn)明顯改變(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 lncRNA BRE-AS1對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖的影響 噻唑藍(lán)法檢測(cè)結(jié)果顯示,與未轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染lncRNA BRE-AS1表達(dá)載體24 h、48 h、72 h后lncRNA BRE-AS1組細(xì)胞的增殖活力明顯降低(P＜0.05),但轉(zhuǎn)染空載體的陰性對(duì)照組細(xì)胞增殖活力與未轉(zhuǎn)染組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 lncRNA BRE-AS1對(duì)宮頸癌細(xì)胞克隆形成能力的影響 平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)未轉(zhuǎn)染組、陰性對(duì)照組和lncRNA BRE-AS1組細(xì)胞的克隆形成率分別為(41.05±3.36)%、(38.85±2.64)%和(23.52±2.15)%,三組細(xì)胞的克隆形成率相比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=107.60,P=0.00＜0.05),且lncRNA BREAS1組的克隆形成率明顯低于未轉(zhuǎn)染組(P＜0.05),但陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組之間的克隆形成率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)圖1。

表1 各組SiHa細(xì)胞中l(wèi)ncRNA BRE-AS1的表達(dá)水平Tab.1 Expression level of lncRNA BRE-AS1 in SiHa cells of each group

2.4 lncRNA BRE-AS1對(duì)宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的影響 Transwell小室檢測(cè)結(jié)果顯示,與未轉(zhuǎn)染組相比,陰性對(duì)照組中穿膜細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯變化(P＞0.05),但lncRNA BRE-AS1組中穿膜細(xì)胞數(shù)較未轉(zhuǎn)染組明顯減少(P＜0.05)。見(jiàn)圖2和表3。

2.5 lncRNA BRE-AS1對(duì)宮頸癌細(xì)胞凋亡能力的影響 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,lncRNA BREAS1組細(xì)胞凋亡率較未轉(zhuǎn)染組明顯升高(P＜0.05),而陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組之間的細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)圖3和表3。

2.6 lncRNA BRE-AS1對(duì)宮頸癌細(xì)胞Wnt/βcatenin信號(hào)通路的影響 免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示,與未轉(zhuǎn)染組相比,lncRNA BRE-AS1組細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵調(diào)控因子β-catenin及其下游相關(guān)蛋白c-Myc、Cyclin D1和MMP-2的表達(dá)水平均明顯降低(P＜0.05)；但陰性對(duì)照組細(xì)胞中這四項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)水平未見(jiàn)明顯變化(P＞0.05)。見(jiàn)圖4和表4。

圖1 平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果Fig.1 Results of plate cloning experiment test

圖2 Transwell小室檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲結(jié)果Fig.2 Results ofcell invasion in each group were detected by Transwell chamber

表2 轉(zhuǎn)染不同時(shí)間后各組SiHa細(xì)胞光密度值的比較Tab.2 Comparison of optical density values of SiHa cells in each group after different time of transfection

表2 轉(zhuǎn)染不同時(shí)間后各組SiHa細(xì)胞光密度值的比較Tab.2 Comparison of optical density values of SiHa cells in each group after different time of transfection

Note:Compared with the control group,1)P＜0.05.

Groups 12 h 24 h 48 h 72 h Untransfected 0.16±0.02 0.27±0.03 0.45±0.03 0.97±0.06 Negative control 0.19±0.03 0.28±0.03 0.48±0.04 1.12±0.09 lncRNA BRE-AS1 0.18±0.03 0.15±0.021) 0.26±0.031) 0.62±0.041)F 2.86 64.23 113.03 133.65 P 0.08 0.00 0.00 0.00

表3 各組中穿膜細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞凋亡率的比較Tab.3 Comparison of number of transmembrane cells and apoptosis rate in each group

表3 各組中穿膜細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞凋亡率的比較Tab.3 Comparison of number of transmembrane cells and apoptosis rate in each group

Note:compared with the control group,1)P＜0.05.

Groups Number of transmembrane cells Apoptosis rate(%)Untransfected 92.85±5.32 6.76±1.03 Negative control 88.76±6.28 8.15±1.26 lncRNA BRE-AS1 43.32±3.251) 21.34±3.121)F 260.61 141.18 P 0.00 0.00

圖3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡結(jié)果Fig.3 Results of apoptosis in each group were detected by flow cytometry

圖4 Western blot檢測(cè)β-catenin、c-Myc、Cyclin D1和MMP-2蛋白的表達(dá)Fig.4 Expression ofβ-catenin，c-Myc，Cyclin D1 and MMP-2 were detected by Western blot

表4 各組細(xì)胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1和MMP-2蛋白的表達(dá)水平Tab.4 Expression levels ofβ-catenin，c-Myc，cyclin D1 and MMP-2 in cells of each group

表4 各組細(xì)胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1和MMP-2蛋白的表達(dá)水平Tab.4 Expression levels ofβ-catenin，c-Myc，cyclin D1 and MMP-2 in cells of each group

Note:Compared with the control group,1)P＜0.05.

Groups β-catenin c-Myc Cyclin D1 MMP-2 Untransfected 0.76±0.07 0.91±0.06 1.23±0.12 0.89±0.06 Negative control 0.78±0.05 0.88±0.06 1.18±0.15 0.86±0.05 lncRNA BRE-AS1 0.39±0.031) 0.26±0.031) 0.43±0.041) 0.51±0.031)F 156.90 448.78 140.84 172.16 P 0.00 0.00 0.00 0.00

3 討論

宮頸癌的發(fā)病因素除了與人乳頭瘤病毒的外部感染有關(guān)外,還與多種基因的異常表達(dá)密切相關(guān)；而這些異常表達(dá)的基因如lncRNA SRA1、lncRNA CASC11和lncRNA SBF2-AS1等往往可通過(guò)調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡等生物學(xué)行為在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮致癌或抑癌的作用[10-12]。因此不斷發(fā)現(xiàn)和了解新的lncRNA的作用對(duì)宮頸癌機(jī)制研究和治療具有重要意義。

lncRNA BRE-AS1是一種腫瘤相關(guān)的非編碼RNA。張艷秋[13]研究指出,在91例肺癌組織中檢測(cè)到lncRNA BRE-AS1表達(dá)下調(diào),且其表達(dá)水平的改變與肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)；而體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)lncRNA BRE-AS1可通過(guò)抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡參與肺癌的發(fā)生發(fā)展。WANG等[14]研究發(fā)現(xiàn),322例肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌組織中l(wèi)ncRNA BRE-AS1異常低表達(dá),且lncRNA BRE-AS1的表達(dá)與肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌的發(fā)生和/或進(jìn)展相關(guān)。陳干濤等[9]在20例宮頸癌組織中發(fā)現(xiàn)lncRNA BRE-AS1表達(dá)下調(diào),但lncRNA BRE-AS1在宮頸癌中的作用如何并不清楚。本研究首先檢測(cè)到lncRNA BRE-AS1在宮頸癌SiHa細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯低于人子宮頸上皮永生化細(xì)胞H8；通過(guò)轉(zhuǎn)染lncRNA BRE-AS1表達(dá)載體成功上調(diào)SiHa細(xì)胞中l(wèi)ncRNA BRE-AS1的表達(dá)后發(fā)現(xiàn),SiHa細(xì)胞增殖和侵襲能力明顯受到抑制,且細(xì)胞凋亡能力明顯增強(qiáng)。這提示宮頸癌中l(wèi)ncRNA BRE-AS1通過(guò)調(diào)控細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡發(fā)揮著重要的抑癌作用。

Wnt/β-catenin信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,β-catenin是該途徑的重要調(diào)控因子,其過(guò)度積累可進(jìn)入細(xì)胞核,激活下游相關(guān)靶基因如原癌基因c-Myc、周期蛋白Cyclin D1和轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MMP-2的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖和轉(zhuǎn)移[15-17]。Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常激活與宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[18-20]。本研究進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn),上調(diào)lncRNA BRE-AS1表達(dá)還可引起宮頸癌SiHa細(xì)胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1和MMP-2蛋白的表達(dá)降低。CHEN等[8]在前列腺癌中發(fā)現(xiàn),低表達(dá)的lncRNA BRE-AS1與miR-145的表達(dá)水平呈正相關(guān)；體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)lncRNA BRE-AS1高表達(dá)可介導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞中miR-145表達(dá)上調(diào),且可抑制腫瘤細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡。王香青等[21]證實(shí),miR-145低表達(dá)與宮頸癌患者預(yù)后不良密切相關(guān),且可通過(guò)與Cateninδ-1作用直接抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路而發(fā)揮抑癌作用。結(jié)果提示,lncRNA BRE-AS1可能通過(guò)調(diào)控miR-145表達(dá)間接抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路活化,進(jìn)而影響細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡來(lái)發(fā)揮抑制宮頸癌的作用。

綜上所述,lncRNA BRE-AS1可抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、侵襲并促進(jìn)其凋亡,其作用機(jī)制可能與抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路有關(guān)。該結(jié)果初步揭示了lncRNA BRE-AS1在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為后期lncRNA BRE-AS1在宮頸癌中的研究奠定了基礎(chǔ)。