動物類中藥抗癌機制研究?

吳 越，李賢煜，楊洪軍

(1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京 210000； 2. 中國中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗中心，中醫(yī)藥防治重大疾病北京市重點實驗室，北京 100700； 3. 中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700)

動物類中藥的應(yīng)用在我國有著悠久的歷史，戰(zhàn)國時期《山海經(jīng)》[1]便有關(guān)于麝、鹿、犀、熊、牛等藥用動物的記載。《本草綱目》共收載藥物1892種，其中動物藥461種[2]。清·唐容川在《本草問答》中論述“動物之功利，優(yōu)甚于植物，以其動物之本性能行，而且具有攻性”[3]，指出了動物藥的優(yōu)越性。

據(jù)報道，中藥材中抗癌作用確切的動物藥有蜈蚣、全蝎、蠶蛹、蛇毒、蟾酥、土鱉蟲、蛤殼、水蛭、牡蠣、蛤蚧、斑蝥、地龍等。對其進行梳理，有助于拓寬對動物藥研究的新思路和新策略。本文將從動物類中藥起效成分、抑癌機制方面進行闡述，并對其進行展望。

1 起效成分

動物類中藥的成分主要包括蛋白質(zhì)(酶)類、多肽類、生物堿類、黃酮類和甾體化合物類[4-5]，且多數(shù)為復(fù)雜混合物。從動物體內(nèi)分離抗癌特異的活性物質(zhì)是研究動物藥的策略之一[6]。由于蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜、分離獲取較困難，于是科學(xué)家們將注意力轉(zhuǎn)向了動物藥小分子活性物質(zhì)的分離與篩選。目前，僅有小部分動物藥專屬成分被確切分離到，如蝎毒[10]、蠶蛹多糖、華蟾素等[24](見表1)。

1.1 蛋白質(zhì)及多肽組分

目前對于動物藥中活性蛋白質(zhì)和肽段的研究已經(jīng)成為一個新的研究熱點，如文蛤多肽、蜈蚣抗腫瘤蛋白等均有強烈的抗腫瘤活性，廣泛應(yīng)用于臨床[39]。

表1 起效成分歸納和分類比較

蛤殼有清熱利濕、化痰散結(jié)的功效，對肝癌、肺癌、胃癌、甲狀腺腫瘤等有明顯的抑制作用[16]。Wang等[15]通過研究文蛤中純化的抗腫瘤多肽即文蛤多肽(Mere15)，發(fā)現(xiàn)其能抑制A549細胞生長，抑制率呈劑量和時間依賴性，且主要通過促凋亡與抗轉(zhuǎn)移途徑來抑制腫瘤生長，具有開發(fā)為治療人肺癌多靶點治療劑的潛力。

蜈蚣具有鎮(zhèn)痛、中樞抑制、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤等作用。Zhou等[12]發(fā)現(xiàn)，蜈蚣的醚提物和醇提物均可在小鼠體內(nèi)抑制宮頸腫瘤的生長。Ma等[14]通過研究蜈蚣的乙醇提取物發(fā)現(xiàn)，其可誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，可作為人類癌癥潛在的治療藥物之一。張麗等[11]從蜈蚣中分離純化得到較純的蜈蚣抗腫瘤蛋白(CGⅠ)，對人宮頸癌細胞Hela和人胃癌細胞BGC-823有很強的體外抑制作用。

Zhan等[37]通過研究中華土鱉蟲乙醇提取物(alcohol extracts of the centipede scolopendra subspinipes mutilans,AECS)發(fā)現(xiàn)，其可通過調(diào)節(jié)MAPK信號通路和相關(guān)轉(zhuǎn)移因子發(fā)揮抗乳腺癌細胞增殖侵襲作用，可成為干預(yù)乳腺癌的潛在藥物。Dai等[38]研究了土鱉蟲提取物對肺癌細胞系A(chǔ)549細胞增殖的抑制作用,發(fā)現(xiàn)土鱉蟲70%乙醇提取物有效，且可通過抑制血管生成從而抑制癌細胞生長。此外，王鳳霞等[36]從土鱉蟲新鮮雌蟲體中分離純化得到分子量約為72kDa的抗腫瘤活性蛋白成分，并命名為ESP72，發(fā)現(xiàn)其對人A549肺癌細胞也有抑制作用。

全蝎中含有蝎毒、核苷等活性成分，具有抗腫瘤功效。Emanuelly等[8]研究了蝎毒對宮頸癌細胞系的影響，發(fā)現(xiàn)其對HeLa細胞有細胞毒性作用。Wang等[40]發(fā)現(xiàn)，蝎毒多肽提取物可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的良性膠質(zhì)瘤U251-MG細胞凋亡。

水蛭是破血逐瘀之良藥。Lu等[29]發(fā)現(xiàn)，重組水蛭素能劑量依賴性地抑制HepG2喉癌細胞的黏附、遷移和侵襲且呈劑量依賴性。Guo等[31]發(fā)現(xiàn)，水蛭素能顯著抑制凝血酶的活性，并抑制腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移。李先建等[27]發(fā)現(xiàn)，水蛭素能抑制肝癌HepG2細胞株的增殖、凋亡、遷移及侵襲。牟忠祥等[41]發(fā)現(xiàn)，水蛭素活性因子對S180腫瘤和雞胚絨毛尿囊(CAM)新生血管具有較強的抑制作用。

牡蠣，也是歷版中國藥典收載的中醫(yī)臨床常用藥。Zhong Ming等[18]研究了低分子量牡蠣多糖(low molecular weight oyster polysaccharide, LMW-OPS)，發(fā)現(xiàn)其能顯著抑制腫瘤生長。Sakaguchi Kaito等[19]發(fā)現(xiàn)，牡蠣30%～50%乙醇提取物(ethanol precipitate of oyster extract, EPOE50)可增強NK細胞活性，同時EPOE50可能通過NK細胞活化抑制小鼠腫瘤的生長。Wang等[20]研究利用芽孢桿菌蛋白酶生產(chǎn)的富含寡肽牡蠣水解物，發(fā)現(xiàn)牡蠣水解物對小鼠產(chǎn)生了很強的免疫刺激作用，這可能激發(fā)其抗腫瘤活性。

蛤蚧即大壁虎，多項研究表明壁虎具有良好的抗腫瘤功能。Huang等[33]檢測壁虎水提物對人肝癌細胞Huh7的影響發(fā)現(xiàn)，壁虎水提取物可抑制Huh7肝癌細胞生長并呈劑量與時間相關(guān)性。Kim等[34]通過研究壁虎中蛋白成分在人膀胱癌細胞5637中的抗腫瘤作用及其細胞機制，發(fā)現(xiàn)壁虎蛋白可誘導(dǎo)膀胱癌細胞凋亡，而對正常細胞沒有任何細胞毒性作用。

蠶蛹作為一種常用的動物類中藥，其應(yīng)用有著悠久的歷史。Li等[22]發(fā)現(xiàn)，蠶蛹蛋白水解物(silkworm pupa protein hydrolysate，SPPH)能特異性地抑制人胃癌細胞Sgc-7901的增殖并呈劑量與時間依賴性。

綜上，蛋白質(zhì)和多肽成分是動物類中藥的獨有組分，或許是其療效區(qū)別于植物類中藥的原因。但其在進行蛋白質(zhì)純化的過程中，部分試劑與操作會促使蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)丟失，進而失去生物活性，那么究竟是否這些蛋白質(zhì)或多肽發(fā)揮抑癌作用，還是僅有部分特殊位點發(fā)揮功能，亦或是其他成分？值得進一步研究與思考。

1.2 小分子化合物組分

中藥中的小分子化合物組分主要包括甾體類、生物堿類、黃酮類、多糖類、砧烯類、脂肪族類、芳香族類。動物藥中小分子類化合物往往具有成分明確、藥效顯著、作用機制清晰等特點。

全蝎中的蝎毒中含有有機酸、酯類及少量游離氨基酸。迄今為止，已經(jīng)從蝎毒中分離出數(shù)十種蝎毒素單體[7]。蝎毒可以特異性阻滯鉀離子通道, 其受體已被定位。氯離子通道在細胞膜信號傳導(dǎo)中具有重要作用, 而蝎毒中提取的氯毒素(Chlorotoxin)是氯離子通道的特異性阻斷劑[42]。

蠶蛹中的蠶蛹多糖具有多種藥理作用[21]。王什等[43]檢測蠶蛹中的多糖組分，發(fā)現(xiàn)隨著多糖提取物濃度增加，人肝癌細胞SMMC-7721的Bax、p53蛋白表達均逐漸升高，而細胞Bcl-2蛋白的表達逐漸降低，得出蠶蛹多糖提取物具有一定抗肝癌活性的結(jié)論。

華蟾素是中華大蟾蜍的有效提取物，臨床應(yīng)用較為廣泛，已有研究表明華蟾素具有明確的抗腫瘤作用[23]。Cheng等[24]對華蟾素及其主要活性成分蟾蜍靈進行了體外、體內(nèi)和臨床研究，發(fā)現(xiàn)其可以通過抗增殖、誘導(dǎo)凋亡、抗轉(zhuǎn)移、抗血管生成、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化抑制、抗炎、Na+/K+-ATP酶活性靶向、類固醇受體共激活子家族抑制等多種途徑抑制腫瘤的侵襲與遷移。Xiong等[25]發(fā)現(xiàn)，華蟾素可誘導(dǎo)人SGC-7901腫瘤細胞的凋亡。Li等[26]也發(fā)現(xiàn)，華蟾素可以通過細胞凋亡等多種途徑發(fā)揮其抗腫瘤作用。

小分子類化合物有著其獨特的優(yōu)勢，由于其清晰的化學(xué)結(jié)構(gòu)可對其進行化學(xué)修飾與減毒增效，如去甲斑蝥素的合成大大降低了其毒性[47]。進一步尋找動物類中藥中的小分子化合物，有助于進一步闡明動物藥的抗腫瘤機制與作用靶點。

2 抑癌機制概述

動物類中藥的成分復(fù)雜，其抑癌機制往往是多層次多靶點的。如蜈蚣乙醚提取物既可以誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，又可以抑制癌組織新血管的生成[44-45]?，F(xiàn)將目前動物類中藥較為清晰的抑癌機制進行總結(jié)(表2)

2.1 誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡

細胞凋亡是一種細胞程序性死亡的形式，指機體有序有效地去除受損細胞，細胞凋亡在癌癥的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。目前臨床使用的大多數(shù)抗癌藥物主要利用完整的凋亡信號通路來觸發(fā)癌癥細胞凋亡。因此，總結(jié)動物類中藥組分對細胞凋亡的影響有廣泛的生理和病理意義[51]。

Huang[33]發(fā)現(xiàn)，壁虎水提物能通過阻止LRP6與Frizzled6復(fù)合物的形成而抑制Wnt信號通路，從而抑制肝癌細胞的增殖、腫瘤球的形成及腫瘤干細胞的比例。Kim等[34]發(fā)現(xiàn)，壁虎蛋白可通過抑制Akt途徑并激活內(nèi)在Caspase途徑，導(dǎo)致膀胱癌細胞的凋亡。郭夢麗等[32]發(fā)現(xiàn)，壁虎粗多肽(gecko crude peptides, GCPs)可通過下調(diào)VEGF-C(血管內(nèi)皮生長因子C)、CXCR4(趨化因子受體4)、p-ERK1/2(細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶)、p-p38MAPK(磷酸化P38絲裂原活化蛋白酶)及p-Akt的表達水平而抑制HepG2(赫曼肝癌細胞)細胞的增殖與遷移，并誘導(dǎo)其凋亡。

Zhou等[12]發(fā)現(xiàn)，蜈蚣提取物可在小鼠體內(nèi)抑制宮頸腫瘤的生長,可能是通過Bax和Caspase-3介導(dǎo)的線粒體信號傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)腫瘤組織的凋亡。Ding等[13]發(fā)現(xiàn)，蜈蚣提取物可通過阻止細胞周期G0-G1期，激活Caspase 9/3，下調(diào)bcl-2/bax蛋白比率以誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。Ma等[14]發(fā)現(xiàn)，蜈蚣提取物可通過降低Bcl-2表達水平，升高Bak、Bax和Bad表達水平誘導(dǎo)A375細胞凋亡。孫婧[52]等研究發(fā)現(xiàn)，蜈蚣提取物具有顯著抑制人肝癌HepG2細胞株增殖的作用且呈明顯的量效關(guān)系。

Oliveira等[8]通過流式細胞術(shù)發(fā)現(xiàn)，蝎毒可誘導(dǎo)HeLa細胞的凋亡。Kampo Sylvanus等[9]通過研究東亞鉗蝎抗腫瘤鎮(zhèn)痛肽(buthus martensii karsch antitumor-analgesic peptide，BMK AGAP)對乳腺癌細胞干與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響，發(fā)現(xiàn)BMK AGAP通過NFκB(核因子κB)和Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路下調(diào)Ptx3的表達，抑制乳腺癌細胞的遷移和侵襲。Moradi等[10]發(fā)現(xiàn)，通過蝎毒治療后的結(jié)腸癌細胞中，Bax(BCL2相關(guān)的X蛋白質(zhì))、Casp3(胱天蛋白酶3)和Trp53(細胞腫瘤抗原p53)顯著過表達，腫瘤組織Bcl-2 mRNA水平下降，說明其對腸癌胞具有特異性抑制作用。賈莉等[46]采用東亞鉗蝎毒(buthus martensii karsch, BMK)作為干預(yù)手段,發(fā)現(xiàn)其對Raji細胞具有生長抑制作用與誘導(dǎo)凋亡作用。

Li等[22]發(fā)現(xiàn)，SPPH能特異性地抑制人胃癌細胞SGC-7901的增殖，并以劑量與時間依賴的方式引起其異常形態(tài)特征。流式細胞術(shù)顯示，SPPH能抑制S期細胞周期。此外，SPPH還能引起活性氧(ROS)的積累和線粒體膜電位的去極化，抑制Bcl-2表達，促進Bax表達，最終導(dǎo)致細胞凋亡。王什等[43]以蠶蛹中的多糖組分為研究對象，利用CCK-8法檢測蠶蛹多糖提取物對人肝癌細胞SMMC-7721生長的抑制情況。Western blot檢測細胞凋亡相關(guān)蛋白(Bax、Bcl-2和p53)的表達，結(jié)果表明蠶蛹多糖提取物對SMMC-7721細胞的增殖具有抑制作用且呈時間和濃度依賴性(P<0.01)。隨著多糖提取物濃度增大，細胞Bax、p53蛋白的表達逐漸升高，Bcl-2蛋白的表達逐漸降低。

Wang等[15]通過研究表明，從文蛤中提取出的新型抗腫瘤多肽(Mere15)，可以通過促凋亡和抗轉(zhuǎn)移途徑抑制腫瘤生長。范成成等[32]發(fā)現(xiàn)，文蛤多肽處理后的肝癌細胞HepG2和膽管癌細胞QBC939的外形變化明顯，并出現(xiàn)凋亡小體。通過檢測細胞周期，經(jīng)處理的肝癌細胞出現(xiàn)明顯的凋亡峰，表明文蛤多肽可以誘導(dǎo)癌細胞凋亡。Wang等[16]發(fā)現(xiàn)，文蛤多肽作用后，腫瘤細胞G2/M期細胞比例逐漸升高，微管蛋白聚合受到抑制，表明文蛤多肽具有抑制腫瘤細胞增殖的作用，其作用機制與誘導(dǎo)細胞凋亡及細胞周期阻滯有關(guān)。

表2 動物類中藥抗腫瘤作用機制概述

Lu等[29]發(fā)現(xiàn)，重組水蛭素通過調(diào)控Bcl-2和促凋亡蛋白Bad的方式，顯著抑制HepG2細胞的生存力并誘導(dǎo)細胞凋亡。李先建等[27]將含不同濃度水蛭素的培養(yǎng)液作用于肝癌HepG2細胞，采用MTT法檢測水蛭素對肝癌HepG2細胞增殖的影響，流式細胞法檢測水蛭素對肝癌HepG2細胞凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)HepG2細胞凋亡率、侵襲及遷移個數(shù)隨水蛭素濃度增加而增加并呈濃度依賴性(P<0.05)。VEGF蛋白的表達量隨水蛭素濃度增加而明顯下調(diào)(P<0.05)，得出水蛭素能誘導(dǎo)肝癌HepG2細胞凋亡的結(jié)論。

Chi等[47]以羧甲基殼聚糖(carboxymethyl chitosan, CMCS)和去甲斑蝥素(norcantharidin, NCTD)為原料，通過酰胺化反應(yīng)制備了新型聚合物藥物(Novel polymer-drug conjugates, CNC)。CNC偶聯(lián)物對胃腺癌細胞SGC-7901的增殖具有顯著的抑制作用，并能抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞的遷移和成管。此外檢測表明，與游離NCTD比較，聚合物更有效地觸發(fā)sgc-7901細胞凋亡。進一步，CNC在balb/c裸鼠試驗中對sgc-7901胃腫瘤的抑瘤率為59.57%，并顯著降低毒性，增強了其體內(nèi)抗腫瘤效果。同時研究發(fā)現(xiàn)，CNC可以通過上調(diào)TNF-α和Bax的表達，下調(diào)VEGF、Bcl-2、MMP-2和MMP-9的表達，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡。Chen等[57]采用NCTD對鼻咽癌細胞系進行處理，顯示細胞系中的胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9活化，抗凋亡蛋白Bcl-XL表達明顯降低，促凋亡蛋白Bak表達增加，表明NCTD能明顯促進鼻咽癌細胞的凋亡。

Li等[26]通過使用微陣列數(shù)據(jù)和計算機分析探討華蟾素抗腫瘤機制，發(fā)現(xiàn)其很可能在MCF-7細胞中以類似咪康唑的方式發(fā)揮抗腫瘤作用。

何道偉等[48]分析了細蚯蚓提取物對Eca-109細胞生長抑制作用及機制，發(fā)現(xiàn)在細胞檢測中有凋亡細胞出現(xiàn)，且細胞被阻滯在G0-G1期，DNA合成受阻，使腫瘤細胞受抑制，腫瘤體積縮小。

Sakaguchi Kaito等[19]實驗結(jié)果表明，EPOE50增強NK細胞活性，抑制腫瘤的生長。李鵬等[10]通過研究牡蠣天然活性肽(bioactive peptides of oyster,BPO)對人胃腺癌BGC-823細胞凋亡的生物學(xué)效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)BPO-1對胃癌細胞具有顯著的誘導(dǎo)凋亡作用。

誘導(dǎo)癌細胞凋亡是很多動物類中藥所共有的抑癌機制。誘導(dǎo)癌細胞凋亡的途徑有很多，報道最多的有兩條：一是通過細胞膜上的死亡受體激活半胱氨酸蛋白酶誘導(dǎo)細胞凋亡；二是通過胞質(zhì)內(nèi)線粒體途徑釋放細胞凋亡因子(ICE, APaf-1, Bcl-2, Fas/APO-1)激活半胱氨酸蛋白酶誘導(dǎo)細胞凋亡。而動物類中藥究竟通過哪條途徑誘導(dǎo)細胞凋亡的還值得進一步探討。

2.2 抑制腫瘤新血管生成

血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是腫瘤血管生成因子(tumor angiogenesis factor, TAF) 重要的調(diào)控因子之一。腫瘤血管是腫瘤治療的重要靶位。腫瘤細胞分泌高水平的促血管生成因子，有助于形成異常的血管網(wǎng)絡(luò)，通過恢復(fù)腫瘤灌注和氧合使血管正?；梢韵拗颇[瘤細胞的侵襲性，提高抗癌治療的效果[54-55]。

劉細平等[45]采用裸鼠Bel-7404人異位肝癌移植模型，以蜈蚣提取液灌胃31 d后，用免疫組化法對腫瘤組織標(biāo)本進行血管內(nèi)皮細胞生長因子VEGF和促血管生成素2(Angiopoietin 2, Ang-2)的檢測發(fā)現(xiàn)，對照組VEGF與Ang-2的染色細胞數(shù)、染色強度及OD值均較治療組多而強，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明蜈蚣提取液能抑制裸鼠Bel-7404移植瘤的生長，且與抑制腫瘤血管生成有關(guān)。

Lu等[29]發(fā)現(xiàn)，重組水蛭素可以顯著下調(diào)黏附與血管生成相關(guān)蛋白Fak和VEGF的表達，抑制腫瘤新血管生成。牟忠祥等[41]將水蛭素活性因子含藥載體種植于雞胚絨毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane, CAM)中，觀察藥物抑制新生血管的生長情況，并用計算機分析系統(tǒng)對CAM進行掃描發(fā)現(xiàn)，用藥組血管分布稀疏、間距增大，含藥載體周圍血管減少；模型對照組則血管分布密集、間距縮小、呈放射狀排列，說明水蛭素可以抑制新血管的生成。

大量研究報道，蛇毒組分可抑制血管生成[49]。Denise等[50]研究了蛇毒對各種類型癌細胞的抗腫瘤作用。從泡桐蛇毒中分離的去整合素樣金屬蛋白酶(Bothropoidin)，對人乳腺癌細胞Mda-mb-231具有抗腫瘤和抗血管生成作用。

曹付春等[35]通過免疫組織化學(xué)法檢測地鱉纖溶活性蛋白(eupolyphaga sinensis walker fibrinolytic protein, EFP)對S180和H22荷瘤小鼠腫瘤組織的微血管密度(microvascular density, MVD)，細胞培養(yǎng)液中VEGF和堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的影響發(fā)現(xiàn)，EFP含藥血清對人臍靜脈內(nèi)皮細胞、肺癌、乳腺癌細胞有顯著抑制作用。ELISA法檢測結(jié)果表明，EFP含藥血清對人臍靜脈內(nèi)皮細胞、肺癌、乳腺癌細胞的VEGF和bFGF表達均有抑制作用。

VEGF能刺激腫瘤毛細血管的生長，為腫瘤增殖和播散提供條件，并已發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤體系中過度表達[55]。目前很多動物類中藥研究表明，可通過抑制VEGF的表達來抑制腫瘤新血管的生成，可為未來的進一步研究提供啟示。

3 討論與展望

目前對于動物類中藥的抗腫瘤作用研究成果主要體現(xiàn)在以下幾點。一是確定了一些新的有效成分并對其進行修飾。如去甲斑蝥素(NCTD)是中藥斑蝥中發(fā)揮抗癌成分斑蝥素的衍生物，是由斑蝥素去除1、2位的2個甲基后人工合成，是具有世界領(lǐng)先地位的，能升高白細胞作用的新型抗腫瘤藥物[47]；二是找到了一些新的中藥抗腫瘤的通路和靶點；三是開辟了一些新的動物類中藥研究方法。如SPME-GC-MS分析法等，均為動物類中藥的研究提供了可行的方法。

但從現(xiàn)有的研究可以看出，動物類中藥抗腫瘤作用研究還存在缺陷，諸如有效成分并不明確。動物藥的成分復(fù)雜，種類繁多，目前的研究大多局限于動物藥的溶劑提取物或含藥血清體內(nèi)體外實驗中表現(xiàn)出的作用，并沒有對其成分進行深入剖析；二是作用機制模糊。目前有大量研究報道，很多動物藥都是通過誘導(dǎo)細胞凋亡發(fā)揮其抑癌作用，但是誘導(dǎo)細胞凋亡是適用于很多疾病治療的普適性機制(如糖尿病[56]、腎臟病[57]、哮喘等[58])，并不是動物類中藥發(fā)揮其抑癌作用的特有機制。且想要闡明動物類中藥抑癌機制只從細胞凋亡層面論述顯然不夠。細胞凋亡作為一種細胞“表象”，其背后的作用機制和作用靶點需要進一步探討；三是中藥具有多靶點多層次的抗腫瘤作用，為后續(xù)的研究增加了難度；四是中藥中的動物藥雖然抗癌作用往往超出植物藥，但是其毒性會對人體造成損傷，如蜈蚣、蛇毒等會造成毒性反應(yīng)，故減毒增效是動物類中藥的潛在研究方向；五是研究手段單一。目前對于動物類中藥的研究手段主要采用MTT技術(shù)、CCK-8技術(shù)、細胞流式實驗技術(shù)、Western Blot技術(shù)、劃痕愈合技術(shù)等，用以檢測動物類中藥對癌細胞侵襲、遷移作用的影響，但并沒有從生物整體水平和分子層面進行深度剖析，因此整合分析很有必要。

動物類中藥具有成分復(fù)雜性、物質(zhì)不穩(wěn)定性、作用環(huán)節(jié)多樣性等特點。近年來，運用組學(xué)策略從分子生物學(xué)水平研究疾病狀態(tài)下基因、蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物等變化，找出藥物的作用通路與作用靶點，在中醫(yī)藥的研究中已被廣泛使用。運用組學(xué)的方法對動物類中藥進行研究，運用整合分析策略，將可能為研究動物類中藥的抗腫瘤機制開辟新思路。此外，還應(yīng)充分參考生物藥的研究手段，建立一套適用于動物類中藥的研究方法。首先，應(yīng)確定動物類中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)，充分利用技術(shù)的進步，將低溫柱層析等先進分離手段應(yīng)用在動物藥的提取分離中。其次，應(yīng)把目光聚焦到動物類中藥中的肽類物質(zhì)上。大量研究表明，某些特定的動物肽類物質(zhì)是具有強烈生物活性的[59]，是動物類中藥的重點起效成分。因此構(gòu)建基于動物藥肽庫的高通量藥物篩選模型，并確立一套健全的評價體系，將更加有助于動物類中藥的開發(fā)與應(yīng)用，為臨床用藥奠定基礎(chǔ)。