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    肺癌患者miR-21靶基因挖掘及其在血清中的表達(dá)與診斷價(jià)值①

    2021-05-25 10:25:18王文棟裴澤浩席小雪崔偉亮常曉彤河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院張家口075000
    中國(guó)免疫學(xué)雜志 2021年9期
    關(guān)鍵詞:鱗癌腺癌肺癌

    王文棟 裴澤浩 席小雪 崔偉亮 張 彤 常曉彤(河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院,張家口075000)

    肺癌嚴(yán)重危害人類健康,其發(fā)病率、死亡率均居惡性腫瘤之首[1]。隨著科學(xué)技術(shù)和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展,肺癌治療手段有所提升。但由于大部分患者明確診斷時(shí)已發(fā)展至中晚期,手術(shù)治療效果甚微[2]。因此,尋找非侵入性、高靈敏度、高特異性的肺癌腫瘤標(biāo)志物的意義重大。

    有研究表明,微小RNA(microRNAs,miRNAs)的表達(dá)與肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),在肺癌腫瘤細(xì)胞的黏附、浸潤(rùn)和擴(kuò)散過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[3]。由于miRNAs在腫瘤組織和外周血液中表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定,組織特異性較高,使其在肺癌診斷和分型中的應(yīng)用成為可能,具有探索價(jià)值[4]。既往研究發(fā)現(xiàn),miR-21不僅在肺癌患者的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)升高,其在外周血中表達(dá)水平也高于正常人群,與肺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良有關(guān)[5]。鑒于此,miR-21可能是一種有前途的肺癌診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)的無創(chuàng)標(biāo)記物,但外周miR-21表達(dá)水平是否與肺癌病理分型有關(guān)目前尚無報(bào)道,且miR-21作用的分子機(jī)制尚不明確。因此,本研究擬通過生物信息學(xué)分析方法挖掘miR-21靶基因及其分子特征,然后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(real-time fluorescence quan?titative PCR,RT-qPCR)檢測(cè)不同病理類型肺癌患者(小細(xì)胞肺癌、鱗狀上皮細(xì)胞肺癌、腺癌)與健康對(duì)照人群血清的miR-21表達(dá)水平,進(jìn)行ROC(receiver operating characteristic curve,ROC)曲線分析,以豐富miR-21與肺癌關(guān)聯(lián)的分子機(jī)制、探討血清miR-21對(duì)于肺癌診斷及病理分型的價(jià)值。

    1 資料與方法

    1.1 資料 收集中國(guó)人民解放軍第二五一醫(yī)院經(jīng)病理檢查確診的肺癌患者靜脈血標(biāo)本61例(含小細(xì)胞肺癌21例,腺癌18例,鱗癌22例)及該院同期正常體檢人群靜脈血標(biāo)本26例。人miR-21引物套裝購自蘇州吉瑪基因股份有限公司;內(nèi)參U6引物購自美國(guó)Invitrogen公司;Trizol、FastQuant RTKit、SuperRe?al PreMix Plus購自北京天根生化科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 肺癌miR-21靶基因的生物信息學(xué)挖掘與分析

    1.2.1.1 肺癌miR-21靶基因挖掘 利用miRe?cords數(shù) 據(jù) 庫(http://c1.accurascience.com/miRe?cords/)[6]對(duì)人的miR-21進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)。并用Pic?Tar、PITA、MirTarget2、RNAhybrid和TargertScanS等11個(gè)miRNA靶基因預(yù)測(cè)工具對(duì)miRecords預(yù)測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,保證至少被2種不同算法預(yù)測(cè)的交集作為miR-21的靶基因。再使用GeneCards數(shù)據(jù)庫(https://www.genecards.org/)[7]搜索獲得肺癌的相關(guān)致病基因,將致病基因與miRecords得到的靶基因取交集得到肺癌miR-21靶基因集合。

    1.2.1.2 肺癌miR-21及其靶基因染色體定位 利用UCSC數(shù)據(jù)庫(http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgGateway)[8]和MapGene2Chrom web v2在線分析工具(http://mg2c.iask.in/mg2c_v2.0)[9]對(duì)肺癌miR-21及靶基因進(jìn)行染色體定位和可視化分析。

    1.2.1.3 肺癌miR-21靶基因的功能注釋和STRING互作分析 利用DAVID數(shù)據(jù)庫(Visualiza?tion,Annotation and Integrated Analysis,https://da?vid.ncifcrf.gov)[10]采用全新的模糊聚類算法,將肺癌miR-21靶基因關(guān)聯(lián)到生物學(xué)功能注釋上,找出最顯著富集的生物學(xué)功能注釋(P-value≤0.05和Count≥4 genes),有利于對(duì)肺癌進(jìn)行關(guān)聯(lián)性研究分析。聯(lián)合使用STRING11.0在線分析工具(https://stringdb.org/)[11]和Cytoscape 3.6.1軟 件[12]構(gòu) 建 肺 癌miR-21靶基因編碼產(chǎn)物蛋白的互作網(wǎng)絡(luò),篩選出重要的中心節(jié)點(diǎn)蛋白。

    1.2.2 肺癌血清miR-21表達(dá)水平檢測(cè)和診斷肺癌效能評(píng)估

    1.2.2.1 RT-qPCR Trizol法提取樣本血清總RNA。TaqMan MicroRNA Reverse Transcription kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)總體系為10μl,分別加入10×Fast RTBuffer 2μl、U6 Reverse Primer 2μl、RNase-Free ddH2O 3μl、microRNA-21 Stem Loop Primer 2μl和RT Enzyme 1μl(即用即溶)。RT-qP?CR每個(gè)樣本做3個(gè)復(fù)孔,miRNA反應(yīng)體系為20μl:2×Super Real Premix Plus 10μl(終濃度為1×)、miR-21 PCR Primer Set(包含上下游引物)0.8μl、RNase-Free ddH2O 8.2μl和cDNA模板1μl。內(nèi)參基因U6的反應(yīng)體系為20μl:2×Super Real Premix Plus 10μl(終濃度為1×)、U6 Forward Primer 0.6μl、U6 Re?verse Primer 0.6μl、RNase-Free ddH2O 7.8μl和cD?NA模板1μl。設(shè)置PCR反應(yīng)模式,進(jìn)行PCR擴(kuò)增(反應(yīng)模式:95℃,3 min;95℃,12 s;62℃,40 s;共40個(gè)循環(huán))。記錄各管Ct值,復(fù)孔間Ct值之差>0.5,需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

    1.2.2.2 數(shù)據(jù)處理 以U6為內(nèi)參基因,加入待測(cè)血清,實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因均一化處理。待測(cè)血清miR-21的相對(duì)表達(dá)量公式:RQ=2-??Ct。RQ<1,則肺癌患者血清中目的基因表達(dá)水平高于正常人群目的基因表達(dá)水平;反之,則肺癌患者血清中目的基因表達(dá)水平低于正常人群目的基因表達(dá)水平。?Ct=CtTarget-CtReference(CtTarget代表待測(cè)樣本目標(biāo)基因Ct值均值;CtReference代表待測(cè)樣本內(nèi)參基因Ct值均值)。肺癌患者與正常人群血清目的基因表達(dá)水平變化比較公式:RQ=2-??Ct;??Ct=(CtTarget-CtReference)肺癌組-(CtTarget-CtReference)正常組。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 對(duì)miR-21的相對(duì)表達(dá)水平(2-??Ct)進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換,轉(zhuǎn)換后數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布。數(shù)據(jù)以±s表示,采用SPSS19.0軟件分析。統(tǒng)計(jì)方法為獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 肺癌miR-21靶基因 使用miRecords數(shù)據(jù)庫得到至少被2種不同算法預(yù)測(cè)且經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的miR-21靶基因共計(jì)30個(gè)。利用GeneCards數(shù)據(jù)庫獲取肺癌相關(guān)致病基因共計(jì)22 367個(gè),將此22 397個(gè)致病基因與上述30個(gè)miR-21靶基因做交集,發(fā)現(xiàn)30個(gè)miR-21靶基因均存在于肺癌發(fā)病相關(guān)基因集合中,由此篩選到肺癌miR-21靶基因共計(jì)30個(gè),分別為:腫瘤抑制因子原肌球蛋白1(TPM1)、核因子IB(NFIB)、細(xì)胞程序性凋亡蛋白4(PDCD4)、ser?pin家族B成員5(SERPINB5)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A(CDKN1A)、細(xì)胞表面凋亡受體(FAS)、代謝調(diào)節(jié)信號(hào)分子C(FAM3C)、同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)、跨膜γ羧基酸蛋白4(PRRG4)、肌動(dòng)蛋白α2(ACTA2)、抗增殖因子2(BTG2)、2型骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體(BMPR2)、雌激素家族1(SESN1)、白介素受體6(IL6R)、細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制因子5(SOCS5)、糖皮質(zhì)激素1(GLC?CI1)、凋亡肽酶激活因子1(APAF1)、溶質(zhì)載體家族16成員10(SLC16A10)、血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶家族成員3(SGK3)、半胱氨酸胞外蛋白質(zhì)2(RP2)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6(CDK6)、肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白2(CFL2)、富含半胱氨酸的胞外蛋白質(zhì)(RECK)、金屬肽酶抑制劑3(TIMP3)、甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)、SRY-box轉(zhuǎn)錄因子5(SOX5)、磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)、轉(zhuǎn)移因子1(E2F1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體2(TGFBR2)和細(xì)胞分裂周期25A(CDC25A),見圖1。提示miR-21在肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能起重要作用。

    圖1 肺癌miR-21靶基因Fig.1 miR-21 target genesin lung cancer

    2.2 染色體定位 利用UCSC數(shù)據(jù)庫和Map?Gene2Chrom web v2在線分析工具對(duì)肺癌miR-21及其靶基因進(jìn)行染色體定位和可視化分析,miR-21位于人類17q23.1染色體,具體位置為chr17:59,841,266-59,841,337,長(zhǎng)度22 bp。肺癌miR-21靶基因在染色體分布如圖2。

    圖2 肺癌miR-21及其靶基因染色體定位Fig.2 Chromosomal localization of miR-21 and its target genes in lung cancer

    圖3 肺癌miR-21靶基因功能注釋圖Fig.3 Functional annotation map of miR-21 target genes in lung cancer

    2.3 靶基因功能注釋和互作網(wǎng)絡(luò) 利用DAVID數(shù)據(jù)庫將肺癌miR-21靶基因關(guān)聯(lián)到生物學(xué)功能注釋上,最顯著富集的生物學(xué)功能注釋(P-value≤0.05和Count≥4 genes)見圖3,包括:regulation of cell prolif?eration(細(xì)胞增殖調(diào)節(jié),含SGK3,TGFBR2,BM?PR2,F(xiàn)AS4個(gè)基因)、protein phosphorylation(蛋白質(zhì)磷酸化,含GK3,HIPK3,TGFBR2,CDK6 4個(gè)基因)、protein kinase binding(蛋白激酶結(jié)合,含E2F1,AC?TA2,PTEN,CDC25A 4個(gè)基因)、protein binding(蛋白 質(zhì) 綁 定 功 能,含RECK,E2F1,SGK3,F(xiàn)AM3C,RP2,TGFBR2,BMPR2,SOX5,CDK6,IL6R,SOCS5,TPM1,SESN1,PDCD4,TIMP3,PTEN,CDC25A,CD?KN1A,BTG2,SERPINB5,CFL2,MTAP,F(xiàn)AS,APAF1共計(jì)24個(gè)基因)、negative regulation of cell prolifera?tion(細(xì)胞增殖負(fù)調(diào)控,含CDKN1A,BTG2,CDK6,PTEN 4個(gè)基因)、negative regulation of apoptotic pro?cess(細(xì)胞凋亡負(fù)調(diào)控,含CDKN1A,HIPK3,F(xiàn)AS,PTEN,PDCD4 5個(gè)基因)、extracellular exosome(胞外,含BTG2,ACTA2,SERPINB5,F(xiàn)AM3C,CFL2,RP2,MTAP,APAF1,F(xiàn)AS,TIMP3共計(jì)10個(gè)基因)、cytosol(細(xì)胞液,含SGK3,ACTA2,TGFBR2,CDK6,TPM1,PDCD4,PTEN,SESN1,CDC25A,CDKN1A,BTG2,MTAP,APAF1,F(xiàn)AS共計(jì)14個(gè)基因)、cyto?plasm(細(xì)胞質(zhì),含ACTA2,SERPINB5,HIPK3,RP2,BMPR2,MTAP,CDK6,F(xiàn)AS,GLCCI1,SOCS5,SESN1,PTEN,PDCD4,CDC25A共計(jì)14個(gè)基因)、ATP binding(ATP結(jié)合,含SGK3,ACTA2,HIPK3,TGFBR2,BMPR2,CDK6,APAF1 7個(gè)基因)、apoptot?ic process(細(xì)胞 凋亡過程,含HIPK3,TGFBR2,APAF1,F(xiàn)AS,PTEN,PDCD4 6個(gè)基因),miRNA-21靶基因主要分布在細(xì)胞外,參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖的調(diào)控過程、具有與ATP和蛋白質(zhì)結(jié)合的功能,miRNA-21靶基因的異常表達(dá)可能與癌癥的發(fā)生密切相關(guān)。

    圖4 肺癌miR-21靶基因互作網(wǎng)絡(luò)圖Fig.4 Interaction network of miR-21 target genes in lung cancer

    圖5 血清miRNA-21表達(dá)水平和ROC曲線Fig.5 Expression level and ROC curves of miRNA-21 in serum

    利用STRING11.0在線分析工具和Cytoscape 3.6.1軟件構(gòu)建了肺癌miR-21靶基因編碼產(chǎn)物蛋白的互作網(wǎng)絡(luò),發(fā)現(xiàn)有24個(gè)靶基因,分別為PTEN,PDCD4,CDKN1A,TIMP3,SERPINB5,CDK6,RECK,TPM1,BTG2,CDC25A,E2F1,APAF1,ACTA2,TGF?BR2,F(xiàn)AS,SESN1,HIPK3,SGK3,PRRG4,GLCCI1,NFIB,F(xiàn)AM3C,CFL2和MTAP之間存在蛋白互作關(guān)系,其中PTEN、PDCD4和CDKN1A為關(guān)鍵的、重要的中心節(jié)點(diǎn)蛋白(圖4)。

    2.4 血清miR-21的表達(dá)與診斷價(jià)值評(píng)估 提取的總RNA OD260/OD280為1.8~2.1可用于進(jìn)一步檢測(cè)。miR-21及U6內(nèi)參均能實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增,溶解曲線為單峰,具有特異性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。血清miR-21在肺癌患者血清中的表達(dá)水平遠(yuǎn)高于正常人群(圖5A),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);各型肺癌相比(圖5B),腺癌患者血清miR-21的表達(dá)水平顯著高于小細(xì)胞肺癌與鱗癌患者(P<0.05),而后兩者之間無差異(P>0.05)。根據(jù)各型肺癌患者血清miR-21擴(kuò)增數(shù)據(jù),繪制受試者ROC曲線,直觀反映其診斷價(jià)值。血清miR-21診斷肺癌(圖5C)、小細(xì)胞肺癌(圖5D)、非小細(xì)胞肺癌(圖5E)、鱗狀上皮細(xì)胞肺癌(圖5F)、腺癌(圖5G)的AUC分別為0.915、0.879、0.934、0.911、0.962,見表1。使用Medcalc軟件,根據(jù)ROC曲線,獲得血清miR-21診斷肺癌及不同病理類型肺癌的臨界值、靈敏度和特異性(表2)。

    表1 各型肺癌患者血清miR-21的診斷效能Tab.1 Diagnostic efficacy of serum miR-21 in patients with various types of lung cancer

    表2 血清miR-21對(duì)于肺癌診斷及其病理分型的價(jià)值Tab.2 Value of serum miR-21 for diagnosis and pathological type of lung cancer

    3 討論

    惡性腫瘤的診斷是現(xiàn)代醫(yī)療和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn),引起廣泛關(guān)注。實(shí)現(xiàn)無創(chuàng)早期準(zhǔn)確診斷,能夠明顯延長(zhǎng)患者生存期,并降低其死亡率。mi-RNAs通過與靶mRNA的3'端非翻譯區(qū)結(jié)合,誘導(dǎo)靶mRNA降解或抑制其翻譯,從轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)。自發(fā)現(xiàn)miR-Lin4至今,人類基因組中發(fā)現(xiàn)的miRNAs基因已達(dá)2 500個(gè)以上,在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種生物學(xué)過程的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[13]。

    人類miR-21位于人類染色體17q23.1,其靶基因主要分布在1、2、3、6、7、8、9、10、11、12、14、15、17、18、20、22和X染色體上,而在5、13、16、19、21和Y染色體上沒有肺癌關(guān)聯(lián)的miR-21靶基因。有研究表明miR-21的異常表達(dá)與實(shí)體腫瘤密切相關(guān),可能通過下調(diào)腫瘤抑制因子原肌球蛋白1(TPM1)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)通路相關(guān)基因、TCF21-KISS1基因、p53基因、細(xì)胞程序性凋亡蛋白4(PDCD4)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,抵抗細(xì)胞分化凋亡,發(fā)揮癌基因功能[14-19]。本研究獲得的miR-21靶基因中,APAF1、FAS、GLCCI1、IL6R、NFIB和SOX5與細(xì)胞凋亡、分化過程有關(guān),miR-21可能通過調(diào)控這些基因抵抗細(xì)胞凋亡分化,引發(fā)癌變;BTG2、CDC25A、CDK6、CD?KN1A、E2F1、SGK3、TGFBR2和TIMP3作為細(xì)胞周期的監(jiān)測(cè)點(diǎn),控制細(xì)胞周期的正常過度,miR-21可通過調(diào)控這些基因促進(jìn)細(xì)胞增殖;ACTA2、BMPR2、CFL2和TPM1參與肌絲肌球蛋白的合成,miR-21可通過調(diào)控這些基因進(jìn)行微絲微管生成的調(diào)節(jié),進(jìn)而影響細(xì)胞分裂過程;FAM3C被鑒定為上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移進(jìn)展的新型調(diào)節(jié)劑,可用于區(qū)分臨床早期患者的預(yù)后[20]。有研究表明miR-21參與非小細(xì)胞肺癌上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化狀態(tài)的自分泌和旁分泌回路[21];HIPK3在癌癥組織和細(xì)胞系中表達(dá)不同,在癌癥細(xì)胞生長(zhǎng),轉(zhuǎn)移和血管生成中起雙重作用,可能是癌癥治療的潛在靶標(biāo)[22];MTAP具有腫瘤抑制活性,該基因編碼一種在多胺代謝中起主要作用的酶,其在許多癌癥中均缺乏[23];PTEN是一種抑癌基因,通過負(fù)調(diào)節(jié)AKT/PKB信號(hào)傳導(dǎo)途徑起抑癌作用[24],而miR-21可通過此途徑誘導(dǎo)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化起關(guān)鍵作用[25];RECK基因編碼的蛋白質(zhì)是富含半胱氨酸的胞外蛋白質(zhì),其表達(dá)在許多腫瘤和各種癌基因轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中均被強(qiáng)烈抑制,RECK的過表達(dá)可通過影響相關(guān)蛋白的表達(dá)來促進(jìn)p53信號(hào)通路的激活,進(jìn)而抑制宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲[26];RP2是X連鎖性視網(wǎng)膜色素變性的原因之一,多數(shù)X連鎖RP患者的色素性視網(wǎng)膜炎GTPase調(diào)節(jié)劑或RP2基因均發(fā)生突變[27];SERPINB5是一種腫瘤抑制蛋白,在細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)可用于預(yù)測(cè)p期IA肺腺癌患者的不良預(yù)后[28];SESN1基因編碼雌激素家族的成員,編碼的蛋白通過激活A(yù)MP激活的蛋白激酶介導(dǎo)p53對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制[29];SLC16A10是質(zhì)膜氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的成員,在頭頸癌中SLC16A10的表達(dá)量與預(yù)后存在明顯正相關(guān),該基因可能是一種腫瘤抑制基因[30];SOCS5是細(xì)胞因子誘導(dǎo)的細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)的負(fù)調(diào)節(jié)因子,與過敏性支氣管哮喘有關(guān)[31]。

    DAVID富集通路結(jié)果顯示,miR-21靶基因主要富集在“protein binding”通路上,蛋白質(zhì)作為反式作用因子與DNA結(jié)合,可影響細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期等生物學(xué)過程的發(fā)生,而腫瘤形成是細(xì)胞增殖與凋亡的調(diào)節(jié)和控制發(fā)生嚴(yán)重紊亂的結(jié)果[32-33]。

    有研究發(fā)現(xiàn),肺癌患者血清miR-21表達(dá)水平高于正常健康人群[34];對(duì)于非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移與預(yù)后具有診斷價(jià)值,其表達(dá)水平降低可作為肺癌治療效果的指標(biāo)[35-36],但尚未有miR-21表達(dá)水平針對(duì)肺癌病理分型檢測(cè)的報(bào)道。

    為了評(píng)價(jià)血清miR-21對(duì)于肺癌的診斷和分型的價(jià)值,本研究采用RT-qPCR方法,檢測(cè)不同病理類型肺癌患者血清miR-21的表達(dá)水平,結(jié)果顯示,肺癌患者總體血清miR-21表達(dá)水平遠(yuǎn)高于正常人群,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),與文獻(xiàn)報(bào)道相同;且腺癌患者血清miR-21表達(dá)水平顯著高于小細(xì)胞肺癌與鱗癌患者(P<0.05),而小細(xì)胞肺癌與鱗癌兩者之間無顯著差異(P>0.05),說明血清miR-21的表達(dá)與肺癌相關(guān),且表達(dá)水平與肺癌的病理類型有關(guān)。

    進(jìn)一步利用ROC曲線評(píng)價(jià)血清miR-21的診斷效能,已知ROC曲線下面積(AUC)越大,其臨床診斷效能越大,當(dāng)AUC<0.5時(shí),無診斷價(jià)值;AUC>0.9時(shí)具有高診斷價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,血清miR-21診斷效能良好:肺癌AUC為0.915;小細(xì)胞肺癌為0.879;非小細(xì)胞肺癌為0.934,肺鱗癌為0.911,腺癌為0.963。結(jié)果揭示,血清miR-21對(duì)于各種類型肺癌均具有較好的診斷價(jià)值;針對(duì)病理分型,血清miR-21對(duì)于非小細(xì)胞肺癌的診斷優(yōu)于小細(xì)胞肺癌,特別是對(duì)于腺癌具有最高的診斷價(jià)值,可能是作為AC早期診斷的高度敏感,穩(wěn)定和可重復(fù)的生物標(biāo)記。

    與臨床傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物相比,目前,臨床上診斷小細(xì)胞肺癌推薦首選胃泌素釋放肽前體(ProGRP),ProGRP診斷小細(xì)胞肺癌AUC為0.921,臨界值為65.66 ng/L,靈敏度和特異性分別為90.90%和89.90%,對(duì)于小細(xì)胞肺癌的診斷,該指標(biāo)優(yōu)于血清miR-21,但是ProGRP不適合非小細(xì)胞肺癌的診斷[37]。肺鱗癌診斷推薦首選細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段(CYFRA21-1)和鱗癌抗原(SCC-Ag);腺癌則以癌胚抗原(CEA)和糖類抗原125(CA-125)為首選。魏晟瀟等[38]研究揭示,CEA和CA-125診斷非小細(xì)胞肺癌的AUC分別為0.839和0.843,其靈敏度分別為44.70%和59.30%,特異性分別為95.30%和90.40%。而血清miR-21診斷非小細(xì)胞肺癌的AUC為0.934、靈敏度為92.31%、特異性為80.00%,對(duì)比可知,對(duì)于非小細(xì)胞肺癌的診斷,血清miR-21優(yōu)于CEA和CA-125。李沫等[39]研究揭示,CYFRA21-1、SCC-Ag和CEA對(duì)于肺癌診斷的AUC分別為0.710、0.403和0.667;靈敏度分別為70.50%、23.00%和52.50%;特異性分別為66.00%、69.80%和71.70%;CYFRA21-1和SCC-Ag診斷肺鱗癌的靈敏度分別為83.30%和46.70%;CEA診斷腺癌的靈敏度為63.00%;CYFRA21-1診斷肺鱗癌的靈敏度高于其他類型肺癌,CEA診斷腺癌的靈敏度高于其他類型肺癌,而血清miR-21診斷肺鱗癌的AUC、靈敏度和特異性分別為0.911、69.23%和100.00%,優(yōu)于CYFRA21-1,血清miR-21診斷腺癌的AUC、靈敏度和特異性分別為0.963、92.31%和88.89%,優(yōu)于CEA。

    綜上,miRNA-21靶基因主要分布在細(xì)胞外,參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖的調(diào)控過程、具有與ATP和蛋白質(zhì)結(jié)合的功能,miRNA-21靶基因的異常表達(dá)可能與癌癥的發(fā)生密切相關(guān)。肺癌患者血清miR-21表達(dá)水平顯著高于正常人群;不同病理類型肺癌相比,肺腺癌患者血清miR-21表達(dá)水平顯著高于小細(xì)胞肺癌與肺鱗癌患者。血清miR-21表達(dá)水平的測(cè)定能夠輔助肺癌診斷,且有望用于腺癌的鑒別和病理分型,但尚無法區(qū)分小細(xì)胞肺癌與肺鱗癌。血清miR-21作為診斷肺癌的潛在腫瘤標(biāo)志物,具有廣泛應(yīng)用前景,一旦其檢測(cè)方法和參考區(qū)間得以明確,并與傳統(tǒng)肺癌腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè),將顯著提高肺癌診斷效率,改善患者治愈率與生存期,臨床價(jià)值不容小覷。

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