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    984例高齡孕婦無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)結(jié)果與妊娠結(jié)局分析

    2021-05-17 09:20:18趙艷芳朱健生汪鳳儀
    關(guān)鍵詞:三體高齡染色體

    趙艷芳 朱健生 萬(wàn) 寧 汪鳳儀

    1.安徽省蕪湖市婦幼保健院(241001);2.安徽省婦幼保健院

    相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示,我國(guó)新生兒出生缺陷總發(fā)生率為5%~6%,且有逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)[1]。出生缺陷中染色體異常是最常見(jiàn)病因,產(chǎn)前胎兒染色體異常篩查是最有效防控措施[2]。血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)及彩超檢查是目前早期篩查出生缺陷的常規(guī)手段,但血清學(xué)標(biāo)志物檢出率為60%~85%,且存在5%假陽(yáng)性,影響其檢測(cè)精度[3]。介入性羊膜腔穿刺或絨毛穿刺檢測(cè)染色體異常能夠獲取準(zhǔn)確性高達(dá)98%~99%的檢測(cè)結(jié)果,成為產(chǎn)前胎兒染色體異常篩查的金標(biāo)準(zhǔn)[4]。但有創(chuàng)操作存在流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)。利用孕婦外周血胎兒游離DNA無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)技術(shù)(NIPT)[5],在21-三體、18-三體、13-三體、性染色體等染色體異常檢測(cè)中敏感性、特異性均優(yōu)于常規(guī)血清學(xué)檢測(cè)[6]。本研究對(duì)蕪湖地區(qū)984例高齡孕婦產(chǎn)前NIPT檢測(cè)結(jié)果及妊娠結(jié)局進(jìn)行回顧性分析,探討NIPT篩查價(jià)值。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批批準(zhǔn),選取2018年9月-2020年1月本院自愿行NIPT檢測(cè)的高齡孕婦臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn):≥35歲單胎妊娠;孕婦及家屬知情自愿要求行NIPT檢測(cè)。排除標(biāo)準(zhǔn):①孕周<12周;②夫妻一方有明確染色體異常;③1年內(nèi)接受過(guò)異體輸血、移植手術(shù)、異體細(xì)胞治療等;④胎兒超聲檢查提示有結(jié)構(gòu)異常必須產(chǎn)前診斷;⑤有基因遺傳病家族史或提示胎兒罹患基因病高風(fēng)險(xiǎn);⑥孕期合并惡性腫瘤。

    1.2 檢測(cè)方法

    1.2.1標(biāo)本采集采集孕婦空腹外周靜脈血取上清血漿離心處理后取上層血漿,置-80℃待測(cè)。

    1.2.2 NIPT檢測(cè)試劑盒購(gòu)自安諾優(yōu)達(dá)基因科技(北京)有限公司,提取待測(cè)樣本中胎兒游離DNA。經(jīng)cffDNA末端修復(fù)及連接反應(yīng)后得到雙鏈DNA分子。經(jīng)PCR擴(kuò)增后得到DNA測(cè)序文庫(kù)。采用高通量基因測(cè)序技術(shù)進(jìn)行樣本測(cè)序檢測(cè)。計(jì)算每條染色體reads占比及Z值,分析染色體非整倍體異常情況。

    1.2.3染色體核型分析及基因芯片檢測(cè)對(duì)NIPT檢測(cè)提示高風(fēng)險(xiǎn)孕婦建議行羊膜腔穿刺產(chǎn)前診斷。告知侵入性產(chǎn)前診斷風(fēng)險(xiǎn),簽署知情同意書(shū)后常規(guī)消毒,B超引導(dǎo)下經(jīng)腹羊膜腔穿刺取羊水。①核型分析: 1500r/min離心處理10min,將羊水細(xì)胞接種培養(yǎng)7~10d,獲取羊水細(xì)胞制片,經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)低滲、固定、制片、G顯帶、染色處理后分析細(xì)胞核型,并與ISCN2016進(jìn)行核型比對(duì)分析。②基因芯片檢測(cè):應(yīng)用單核苷酸多態(tài)微陣列(美國(guó)AffymetrixCytoScan 750K),按照芯片操作手冊(cè)進(jìn)行DNA消化、擴(kuò)增、純化、片段化、標(biāo)記信號(hào)、雜交、洗片染色及掃描等。采用美國(guó)Affymetrix 基因芯片染色體分析軟件(ChAS)將掃描所得原始芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行分析??截悢?shù)變異的報(bào)告閾值是缺失≥200kb,重復(fù)≥500kb。

    1.3 妊娠結(jié)局隨訪

    對(duì)所有NIPT檢測(cè)高齡孕婦電話(huà)隨訪,記錄產(chǎn)前檢測(cè)結(jié)果及妊娠結(jié)局、新生兒狀況等,隨訪截止到2020年7月。

    2 結(jié)果

    2.1 NIPT篩查

    共納入984例研究對(duì)象,年齡(40.7±5.5)歲(35~47歲),孕周(20.6±4.1)周(13~24周)。984例行NIPT技術(shù)檢測(cè),有14例提示染色體篩查結(jié)果異常,篩查陽(yáng)性率為1.42%。其中21-三體4例、18-三體3例13-三體2例、性染色體異常4例,其他染色體異常1例。

    2.2 NIPT篩查與產(chǎn)前診斷對(duì)比

    對(duì)14例NIPT篩查結(jié)果異常的高齡孕婦行羊膜腔穿刺并產(chǎn)前診斷。見(jiàn)表1。

    2.3 妊娠結(jié)局

    隨訪984例NIPT檢測(cè)高齡孕婦,篩查低風(fēng)險(xiǎn)970 例中961例正常妊娠,9例因妊娠并發(fā)癥或其他原因終止妊娠。NIPT篩查高風(fēng)險(xiǎn)14例經(jīng)產(chǎn)前診斷明確染色體異常10例,其中3例21-三體(47,XN,+21),2例18-三體(47,XN,+18)、2例13-三體(47,XN,+13),1例特納綜合征(45,X)及1例XXY綜合征(47,XXY)。其中9例選擇引產(chǎn)終止妊娠;1例胎兒XXX綜合征(47,XXX)堅(jiān)持妊娠,產(chǎn)后新生兒狀況正常;其余4例產(chǎn)前診斷結(jié)果正常(46,XN),產(chǎn)后新生兒狀況正常。見(jiàn)表2。

    表1 NIPT篩查異常與產(chǎn)前診斷結(jié)果對(duì)比情況

    表2 14例NIPT檢測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)孕婦羊水穿刺檢測(cè)及妊娠結(jié)局

    3 討論

    大量研究表明[7],高齡孕婦不僅存在妊娠期并發(fā)癥高風(fēng)險(xiǎn),也存在新生兒出生缺陷風(fēng)險(xiǎn)。染色體非整倍體異常是臨床常見(jiàn)出生缺陷,只能通過(guò)產(chǎn)前篩查來(lái)降低此類(lèi)出生缺陷。常規(guī)B超檢查和血清學(xué)檢測(cè)有助于產(chǎn)前診斷,但假陽(yáng)性率及假陰性率較高無(wú)法確診[8]。羊水穿刺作為新生兒染色體異常排查的“金標(biāo)準(zhǔn)”特異性與靈敏性較高,但介入性檢測(cè)有流產(chǎn)和感染風(fēng)險(xiǎn),且患傳染病孕婦不適合羊水穿刺。相關(guān)研究證實(shí)[9],孕12周后孕母外周血游離胎兒DNA片段已夠檢測(cè)所需量,DNA片段基本包含胎兒所有基因組序列,通過(guò)檢測(cè)孕婦外周血游離DNA即可獲得胎兒染色體情況。NIPT可直接檢測(cè)孕母外周血胎兒游離DNA而明確新生兒染色體情況,在常規(guī)產(chǎn)檢及染色體異常篩查中有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

    隨著NIPT技術(shù)的廣泛應(yīng)用,有關(guān)NIPT假陽(yáng)性案例報(bào)道不斷增多。Suzumori[10]等提出NIPT對(duì)21-三體異常檢出率為90.1%,假陽(yáng)性率為0.21%;Hashilon[11]等報(bào)道NIPT作為一線(xiàn)篩查方案時(shí)其對(duì)高危、低危孕婦假陽(yáng)性率不同;張衛(wèi)華[12]等報(bào)道NIPT對(duì)21-三體、18-三體、13-三體假陽(yáng)性率為0.17%,該研究針對(duì)非高齡孕婦。可見(jiàn),雖然NIPT優(yōu)于常規(guī)血清標(biāo)志物篩查,但臨床假陽(yáng)性提示NIPT檢測(cè)特異性有限,其陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、敏感性仍有待提高。本研究結(jié)果顯示,984例高齡孕婦NIPT檢測(cè)陽(yáng)性率為1.42%,與文獻(xiàn)[13]結(jié)果一致。通過(guò)對(duì)14例NIPT高風(fēng)險(xiǎn)者行產(chǎn)前診斷, 21-三體陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為75.0%,18-三體陽(yáng)性預(yù)測(cè)值66.7%;13-三體陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為100%,性染色體陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為75.0%,他染色體陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為0%。考慮本研究對(duì)象針對(duì)高齡孕婦,且樣本量較少,與文獻(xiàn)[14-15]等結(jié)果存在一定差異。同時(shí)檢測(cè)技術(shù)的局限性,NIPT對(duì)特殊結(jié)構(gòu)異常如染色體倒位、易位不敏感。此外,本研究中尚有4例NIPT檢測(cè)異常但產(chǎn)前診斷結(jié)果正常,這可能與限制性胎盤(pán)嵌合有一定關(guān)聯(lián),具體原因需進(jìn)一步研究。提示,NIPT雖然是一種優(yōu)于常規(guī)血清學(xué)檢測(cè)的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷手段,檢測(cè)敏感性較好,但特異性受限導(dǎo)致NIPT尚不能徹底取代介入性染色體核型分析、基因芯片等產(chǎn)前診斷方法。

    綜上所述,NIPT技術(shù)應(yīng)用于高齡孕婦有較好的篩查價(jià)值, NIPT篩查結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)者仍需進(jìn)行介入性產(chǎn)前診斷,從而避免假陽(yáng)性或非必要引產(chǎn)。

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