SLC6A4基因多態(tài)性位點(diǎn)rs2020936與中國西北部人群原發(fā)性失眠關(guān)系的研究

陳文娟 謝宇平 周麗雅 王旭斌 王靜 馬薇 惠培林 王金鳳 蘇曉艷 郭斌 陳雪萍 范杰 趙媛 楊軍 張尚麗 劉瑜

(1 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，蘭州，730000； 2 甘肅省人民醫(yī)院睡眠醫(yī)學(xué)中心，蘭州，730000； 3 蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳研究所，蘭州，730000)

原發(fā)性失眠(Primary Insomnia，PI)是指以睡眠障礙(難以入睡和/或維持睡眠困難或睡眠后精力未恢復(fù))為幾乎唯一的癥狀，每周至少出現(xiàn)3晚睡眠困難，時(shí)間在3個(gè)月以上，并具有臨床意義的苦惱及社交、職業(yè)或其他功能的損害；排除由其他睡眠與精神/心理障礙以及軀體的疾病、乙醇或藥物等導(dǎo)致的失眠[1]。研究證明長期失眠可引起焦慮、抑郁、記憶力下降[2]、免疫力低下，罹患心血管疾病、腦血管疾病、高血壓、糖尿病、癡呆、精神疾病和骨骼肌疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加[3]，并增加心臟病死亡率[4]。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月至2019年12月甘肅省人民醫(yī)院睡眠醫(yī)學(xué)中心收治的原發(fā)性失眠患者78例作為觀察組，另選取同期的體檢中心的健康人群82例作為對照組，對受試者進(jìn)行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測及量表評估，采用飛行質(zhì)譜法對SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 所有病例按照《美國精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊》第5版(DSM-5)的PI診斷標(biāo)準(zhǔn)納入。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 1)受試者伴有嚴(yán)重軀體疾病患者，如高血壓、心臟病、甲狀腺功能異常、糖尿病等；2)有其他明確的失眠原因，如近期有重大心理應(yīng)激而致失眠者；3)PSG監(jiān)測結(jié)果為主觀性失眠患者；4)PSG監(jiān)測結(jié)果AHI>15以及不適合量表評估的低齡和高齡人群均被排除。本研究經(jīng)過我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并經(jīng)患者及其家屬知情同意。

1.4 研究方法

1.4.1 SNP位點(diǎn)選擇 DNA提取、SNP分型、引物合成從HapMap計(jì)劃以及美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)單核苷酸多態(tài)性數(shù)據(jù)庫選擇5-HTT基因功能性SNP：1)在非翻譯區(qū)，我國人群中MAF>5%；2)在5′啟動(dòng)子2 kb以內(nèi)，我國人群中MAF>5%。依此標(biāo)準(zhǔn)選擇SLC6A4基因位點(diǎn)rs2020936，該位點(diǎn)位于5′端非翻譯區(qū)。采用TIANamp Blood DNA Kit血液基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)提取DNA。應(yīng)用TYPER4.0軟件獲取原始數(shù)據(jù)及基因分型圖，然后進(jìn)行生物信息分析得到最終SNP基因分型檢測數(shù)據(jù),飛行質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行基因測序?；蚍治鲈O(shè)計(jì)軟件(Assay Designer3.1)，進(jìn)行引物設(shè)計(jì)合成。引物序列為F:5′-ACGTTGGATGTAAATGGTGAGCAGGGTGAG-3′；R:5′-ACGTTGGATGGGCTCAAGAATGCAAACACC-3′(北京博淼生物科技公司)。

1.4.2 量表檢測、PSG監(jiān)測 所有受試者都在專業(yè)醫(yī)生的指導(dǎo)下進(jìn)行了以下測試以評估其心理狀態(tài)。失眠嚴(yán)重程度指數(shù)(Insomnia Severity Index，ISI)、匹茲堡睡眠質(zhì)量指數(shù)表(Pittsburgh Sleep Quality Index，PSQI)：通過上述2個(gè)問卷量表，篩選PI組入組人群。狀態(tài)-特質(zhì)焦慮問卷(STAI)、Beck抑郁自評量表排除焦慮相關(guān)失眠及抑郁相關(guān)失眠，并且評估PI患者因失眠導(dǎo)致的焦慮及抑郁狀態(tài)，記錄兩周睡眠日記。對所有病例進(jìn)行整夜睡眠監(jiān)測。記錄的時(shí)間不少于7 h。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，方差分析，卡方檢驗(yàn)，logistic回歸對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Rs2020936基因型頻率、等位基因頻率分布 2組患者Rs2020936基因型頻率、等位基因頻率分布比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；對其進(jìn)行性別分組后比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。原發(fā)性失眠患者多導(dǎo)睡眠監(jiān)測結(jié)果與rs2020936同基因型間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，不同的基因型間REM(%)睡眠(P=0.006)期及睡眠效率(%)(P=0.001%)之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。logistic回歸分析結(jié)果顯示，SNP位點(diǎn)rs2020936不是中國西北部人群原發(fā)性失眠的危險(xiǎn)因素(P=0.735)。見表2。

表1 多態(tài)性位點(diǎn)rs2020936基因型與相關(guān)量表和多導(dǎo)睡眠監(jiān)測結(jié)果分布

表2 可能與原發(fā)性失眠相關(guān)因素的logistic回歸分析

3 討論

PI目前缺少診斷特異性指標(biāo)，屬排除性疾病，因而造成了診斷和治療上的不確定性。

由于無創(chuàng)傷行中樞神經(jīng)組織學(xué)及分子水平研究目前尚無有效方法，通過臨床表型結(jié)合血液客觀檢測基因多態(tài)性的方法在提供分子機(jī)制線索中就顯得尤為重要。Su S等[5]在研究SLC6A4基因如何影響抑郁癥狀與IL-6之間的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)rs2020936與Beck抑郁量表顯著相關(guān)。Ishii T等[6]發(fā)現(xiàn)其與COPD發(fā)病率顯著相關(guān)。但本研究沒有發(fā)現(xiàn)SLC6A4基因多態(tài)性rs2020936與原發(fā)性失眠癥之間的相關(guān)性。值得注意的是，該突變與原發(fā)性失眠癥患者的睡眠效率有關(guān)。因此，我們推測突變導(dǎo)致5-HTT蛋白異常表達(dá)，基因個(gè)體突觸間隙5-HT再攝取能力降低，繼而導(dǎo)致患者睡眠質(zhì)量不佳。本研究旨在為原發(fā)性失眠的研究提供更多思路，為今后其基因診斷和藥物的個(gè)體化治療提供更多參考。