多菌靈降解菌djl-6和啶蟲(chóng)脒降解菌D-2固體菌劑的研發(fā)①

徐銘陽(yáng)，盧家森，孟獻(xiàn)雨，林澤彬，何 健，黃 星

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，南京 210095)

目前農(nóng)藥殘留降解菌劑大多為液體劑型，其長(zhǎng)距離運(yùn)輸不方便，保存期較短。固體劑型相對(duì)于液體劑型而言，其保存期長(zhǎng)、運(yùn)輸及施用方便[1-3]。但目前對(duì)于農(nóng)藥殘留降解菌的固體劑型的研究很少。微生物固體菌劑的研究大多采用載體吸附方法，應(yīng)用于菌劑吸附的載體應(yīng)具有對(duì)微生物無(wú)毒、抗微生物分解、易于攜帶運(yùn)輸、價(jià)格低廉等特點(diǎn)[4-6]。目前研究常使用的載體有土壤、珍珠巖、淤泥、泥炭、硅藻土、菌糠、米糠、秸稈、蛭石、有機(jī)堆肥、海藻酸鈉、鋸末、煤炭、高嶺土等[7-9]。載體材料大多都具備多孔的結(jié)構(gòu)，可以容納不斷進(jìn)行增殖的接種微生物，從而使得載體內(nèi)接種微生物的密度增大。

微生物固體菌劑的質(zhì)量?jī)?yōu)劣主要體現(xiàn)在3個(gè)方面，一是菌劑要有良好的適應(yīng)能力，微生物的活性強(qiáng)；二是要有較長(zhǎng)的貨架期；三是要有較高的有效活菌數(shù)和較低的雜菌污染率[10-12]。基于此，本文首先利用常見(jiàn)的載體泥炭、花生殼粉、米糠以及有機(jī)堆肥來(lái)吸附菌劑。菌劑中所含的多菌靈及啶蟲(chóng)脒降解菌株由本實(shí)驗(yàn)室分離并保藏，所用的多菌靈降解菌株djl-6在3 d內(nèi)將100 mg/L多菌靈降解100.0%，啶蟲(chóng)脒降解菌株D-2在3 d內(nèi)將50 mg/L啶蟲(chóng)脒降解99.0%[13-14]。然后以泥炭作為對(duì)照，探究有機(jī)堆肥作為吸附載體的微生物菌劑的活菌數(shù)量變化及其保存期，并通過(guò)盆缽?fù)寥涝囼?yàn)檢測(cè)了保藏后的菌劑的降解效果。本文的研究可以為降解菌固體菌劑的應(yīng)用和保存提供一些理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

供試載體：泥炭、米糠、花生殼粉購(gòu)自晟圖園藝有限公司，蚯蚓糞有機(jī)肥、雞糞有機(jī)肥、豬糞有機(jī)肥、秸稈有機(jī)肥購(gòu)自南京易循環(huán)農(nóng)業(yè)科技有限公司，上述各供試材料均在自然狀態(tài)下風(fēng)干3 d后過(guò)40目篩，經(jīng)121 ℃ 間歇式高壓濕熱滅菌后備用。

多菌靈原藥購(gòu)自江蘇新沂農(nóng)藥廠(純度99.8%)。啶蟲(chóng)脒原藥購(gòu)自綠源制藥(純度98.3%)。

1.2 供試菌株與土壤

多菌靈降解菌株Rhodococcus qingshengiidjl-6、啶蟲(chóng)脒降解菌株P(guān)igmentiphagasp. D-2，均由本實(shí)驗(yàn)室分離并保藏。

供試土壤為黃棕壤，采集于南京農(nóng)業(yè)大學(xué)牌樓實(shí)驗(yàn)基地。土壤基本理化性質(zhì)：pH 6.91，全氮 0.86 g/kg，有效氮15.76 mg/kg，全磷0.32 g/kg，有效磷 7.95 mg/kg，全鉀1.41 g/kg，有效鉀80.27 mg/kg，有機(jī)質(zhì)15.12 g/kg，總碳 6.84 g/kg。

1.3 載體材料基本性質(zhì)測(cè)定

各供試載體的含水率采用烘干法[15]進(jìn)行測(cè)定；pH采用pH儀測(cè)定[16]；氮、磷、鉀含量分別采用半微量凱式定氮法、鉬銻抗試劑測(cè)定法以及氫氧化鈉熔融-原子吸收分光光度計(jì)法測(cè)定[17-18]；每個(gè)載體設(shè)3個(gè)重復(fù)，最終結(jié)果取3次測(cè)定的平均值。

準(zhǔn)確稱取100 g已滅菌的載體材料放于封口袋內(nèi)，在無(wú)菌條件下，按照一定梯度加入無(wú)菌水到載體材料中，并用玻璃棒將載體與無(wú)菌水進(jìn)行充分的攪勻混合，直至載體與無(wú)菌水混勻且載體疏松、濕潤(rùn)不成塊。以100 g干燥的滅菌載體所能吸附的水分作為載體的吸水率，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)，取3次試驗(yàn)的平均值作為載體的吸水率。

1.4 載體對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響

準(zhǔn)確稱取經(jīng)滅菌后的不同載體各20 g，分別加入到盛有200 ml去離子水的三角瓶中，然后置于30 ℃搖床中150 r/min振蕩24 h。振蕩后取4 ml加入到已滅菌空試管中，進(jìn)行高溫滅菌。滅菌后再向其中每個(gè)試管中分別加入0.1 ml的菌株D-2和菌株djl-6的種子液，置于搖床中于150 r/min、30 ℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)，分別于2 d和4 d進(jìn)行取樣，利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)。通過(guò)與原始接種菌液中的菌數(shù)進(jìn)行比較，判斷載體是否對(duì)降解菌菌株的生長(zhǎng)有抑制作用。每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)平行。

1.5 載體的單一最大吸菌量

準(zhǔn)確稱取已經(jīng)滅菌的不同載體各2 g分裝到50 ml干凈的滅菌離心管中，將各載體分別與10 ml降解菌菌株D-2和djl-6的菌液在常溫條件下吸附5 h，放置于離心機(jī)中以4 ℃、1 000 r/min離心10 min，離心后傾去上清液，繼續(xù)向沉淀中加入10 ml 無(wú)菌水，于渦旋儀上充分振蕩5 min后，再次置于離心機(jī)中以4 ℃、1 000 r/min離心10 min，傾出上清液，測(cè)定其中的活菌數(shù)。重復(fù)3次，3次測(cè)得的總菌數(shù)除以加入的載體質(zhì)量即為單位載體的單一最大吸菌量[19-20]，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)平行。

1.6 菌劑的有效菌數(shù)釋放率

將載體菌劑制備后置于陰涼處室溫保存2 d，然后取2 g加入到裝有玻璃球的20 ml無(wú)菌水中，以150 r/min條件下振蕩2 h，取出后立即采用稀釋涂布，測(cè)定菌劑中釋放的有效活菌數(shù)，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)平行。有效菌數(shù)釋放率(%)=載體菌劑釋放的有效菌密度/接種的細(xì)菌密度(cfu)×100

1.7 菌劑活菌數(shù)檢測(cè)

采用稀釋涂布平板法，分別準(zhǔn)確稱取不同處理的菌劑2 g加入到盛有20 ml無(wú)菌水的三角瓶中，并在其中放置玻璃珠；靜置30 min后置于搖床中，充分震蕩30 min，得到的菌懸液即為10–1菌懸液。將菌懸液吸取1 ml加入到盛有9 ml無(wú)菌水的試管中繼續(xù)稀釋，如此重復(fù)，將稀釋液稀釋到合適的濃度梯度后，分別吸取0.1 ml稀釋液涂布于固體LB培養(yǎng)基的平板上，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)平行，每個(gè)梯度設(shè)置3個(gè)平行，培養(yǎng)3 d后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

1.8 菌劑含水率的變化

將菌劑制備后放置于陰涼處保存，于120 d時(shí)稱取不同菌劑處理各5 g，進(jìn)行載體菌劑的含水率測(cè)定。含水率采用烘干法測(cè)定[15]。

1.9 土壤農(nóng)藥殘留降解

在供試土壤中分別加入多菌靈和啶蟲(chóng)脒的水溶液，攪拌均勻，使土壤中多菌靈和啶蟲(chóng)脒濃度分別為5 mg/kg干土和10 mg/kg干土。用清水調(diào)節(jié)土壤含水率為20%，靜置3 h后使啶蟲(chóng)脒和多菌靈能夠充分被土壤吸收。在無(wú)菌條件下準(zhǔn)確稱取保存30 d的各個(gè)載體菌劑20 g，與含有多菌靈和啶蟲(chóng)脒的180 g供試土壤進(jìn)行混勻，將其分裝于兩層一次性塑料杯中，用黑色塑料袋遮蓋防止農(nóng)藥的光解，向其中加入無(wú)菌水至其含水量為20%；并設(shè)置加入農(nóng)藥而不加降解菌的對(duì)照。置于光照培養(yǎng)箱中，模擬自然環(huán)境，白光照射12 h，溫度為26 ℃，黑暗狀態(tài)12 h，溫度為20 ℃。分別于第3、5、7、10天取不同處理的土樣萃取后，采用HPLC檢測(cè)土壤中多菌靈和啶蟲(chóng)脒的殘留量。

2 結(jié)果與分析

2.1 載體材料的基本性質(zhì)

載體的吸水能力直接影響菌株的生存，載體吸水率是一個(gè)表征菌劑質(zhì)量的指標(biāo)。在自然條件下風(fēng)干3 d后的載體的吸水能力如表1所示，在普通載體中以花生殼粉和米糠吸水率最高，分別達(dá)到了96.00% 和87.33%，泥炭吸水率最低，僅為63.67%；而在有機(jī)肥載體中，雞糞肥吸水率最低，僅為58.00%，秸稈肥吸水率最高，達(dá)到了73.00%。載體作為菌劑吸附的基質(zhì)，為微生物的生長(zhǎng)提供水分。在一定范圍內(nèi)，載體的吸水率越高，說(shuō)明載體的持水能力越強(qiáng)，保水能力也就越強(qiáng)，過(guò)多的水分也能夠疏泄出去。

表1 不同載體的吸水率、含水率、pH 和營(yíng)養(yǎng)成分Table 1 Water absorption, water contents, pH values and nutritional contents of different carriers

自然條件下風(fēng)干后的載體含水率不宜過(guò)高，過(guò)高會(huì)產(chǎn)生霉變，過(guò)低又難以供給接種微生物的日常需求，因此載體的含水率對(duì)于菌劑來(lái)說(shuō)也至關(guān)重要。不同載體的含水率如表 1所示，不同載體之間含水率差異明顯，載體自然條件下風(fēng)干3 d后的含水率介于7.09% ~ 16.70%。在普通載體中以泥炭處理最低，為7.09%，而含水率最高的處理為米糠，高達(dá)10.60%；在有機(jī)肥類載體中，含水率為11.10% ~ 16.70%，其中豬糞有機(jī)肥的含水率最高，為16.70%，秸稈肥最低，為11.10%。各載體自然狀態(tài)下的含水率能夠滿足接種微生物的生長(zhǎng)。

pH是一個(gè)影響微生物生存的重要因素，絕大多數(shù)微生物生存的pH介于6 ~ 8。而本研究所用的兩株降解菌的生長(zhǎng)及降解也隨pH變化而產(chǎn)生影響。常規(guī)載體pH變化的幅度較小，幅度僅為0.84，常規(guī)載體均呈現(xiàn)出弱酸性，其中以花生殼粉最低，為5.95，泥炭最高，為6.79；而有機(jī)肥類載體方面pH幅度較大，為1.47，其中以豬糞肥最高，為8.30，蚯蚓糞肥最低，為6.83。

不同載體的營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1，其中花生殼粉的氮、磷、鉀含量最低，分別為1.70、0.60和2.60 g/kg。全氮含量最高的載體為豬糞肥，達(dá)到了13.66 g/kg，各處理差異顯著。全磷含量除花生殼粉外，各載體含磷量均高于對(duì)照泥炭。全鉀含量最高的為泥炭，達(dá)到9.07 g/kg。

2.2 不同載體對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響

載體不僅能夠?yàn)槲⑸锏纳L(zhǎng)提供養(yǎng)分，而且對(duì)微生物的生長(zhǎng)有一定影響，是微生物賴以生存的空間。良好的載體應(yīng)當(dāng)有利于微生物的生長(zhǎng)繁殖，能夠有效地提高微生物在土壤以及植物根系中的存活率。由圖1可以看出，接種菌株djl-6和D-2后，本研究所使用的載體均表現(xiàn)出對(duì)供試菌株djl-6、D-2的生長(zhǎng)無(wú)害，而且能夠促進(jìn)供試菌株的生長(zhǎng)，可以用作載體來(lái)制備djl-6、D-2菌劑。

2.3 不同載體的單一最大吸菌量

載體的單一吸菌量也是表征載體質(zhì)量的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，單一吸菌量指的是單位質(zhì)量的載體所能吸附的最大活菌數(shù)。良好的載體需要有一個(gè)較大的吸菌量，從而能夠增加細(xì)胞的密度。各項(xiàng)載體的單一最大吸菌量如圖2所示，其中對(duì)于菌株djl-6來(lái)說(shuō)，以泥炭作為吸附載體的處理最高，能夠達(dá)到2.30×1011cfu/g；以豬糞有機(jī)肥最低，僅為2.69×1010cfu/g。對(duì)于菌株D-2來(lái)說(shuō)，也是以泥炭作為吸附載體的處理最高，能夠達(dá)到1.65×1011cfu/g；以豬糞有機(jī)肥最低，僅為2.39×1010cfu/g。

2.4 不同載體的有效菌數(shù)釋放率

載體的有效菌數(shù)釋放率也是一個(gè)表征菌劑質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)，在選擇微生物的載體時(shí)除了要考慮到其吸附能力之外，還必須測(cè)定其能夠釋放的有效活菌數(shù)，即真正能夠被釋放出來(lái)的活菌數(shù)。以djl-6作為菌劑接種微生物的載體的有效菌數(shù)釋放率如圖3所示，其中以蚯蚓糞肥為載體的有效菌數(shù)釋放率最高，達(dá)到了100.40%；而以秸稈肥作為載體的有效菌釋放率最低，僅為34.27%。以D-2作為菌劑接種微生物的載體的有效菌數(shù)釋放率與djl-6一致，即以蚯蚓糞肥為載體的有效菌數(shù)釋放率最高，達(dá)到了82.03%；以秸稈肥作為載體的有效菌數(shù)釋放率最低，僅為39.65%。

2.5 不同載體菌劑的活菌數(shù)變化

以djl-6、D-2為接種微生物的菌劑活菌數(shù)變化如圖4所示，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，其中各項(xiàng)載體菌劑的活菌數(shù)均呈現(xiàn)下降狀態(tài)，以30 d時(shí)活菌數(shù)最多，因此，菌劑應(yīng)在30 d內(nèi)使用最為合適。以djl-6做接種微生物的菌劑保存30 d時(shí)活菌數(shù)大小為：泥炭>蚯蚓糞肥>花生殼粉>米糠>秸稈肥>雞糞肥>豬糞肥；保存120 d時(shí)，以蚯蚓糞肥作為載體的djl-6菌劑活菌數(shù)最高。以D-2作為接種微生物的菌劑保存30 d時(shí)活菌數(shù)大小為：泥炭>雞糞肥>花生殼粉>米糠>豬糞肥>蚯蚓糞肥>秸稈肥；保存120 d時(shí)，以豬糞肥作為載體的D-2菌劑活菌數(shù)最高。以兩種菌株做接種微生物的菌劑中均以花生殼粉活菌數(shù)下降最快，這是因?yàn)檫^(guò)高的含水量以及持水能力過(guò)大導(dǎo)致其在保存30 d時(shí)出現(xiàn)了雜菌污染。

2.6 不同載體菌劑的含水率變化

菌劑的含水率變化直接影響到接種微生物的存活，含水率過(guò)高和過(guò)低都不利于菌劑的保存。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，各菌劑含水率整體都有下降。各載體菌劑保存120 d后的含水率變化如圖5所示，以菌株djl-6和D-2作為接種微生物的菌劑中均以泥炭作為載體的菌劑含水率最低，分別為13.34% 和13.60%；以米糠作為載體的菌劑含水率最高，分別高達(dá)25.69%和26.18%；以堆肥作為菌劑吸附載體的各個(gè)處理中，含水率均在20.00% 左右。

2.7 不同載體菌劑對(duì)土壤農(nóng)藥殘留的降解

圖6為不同載體菌劑對(duì)土壤農(nóng)藥殘留的降解。由圖可見(jiàn)，與對(duì)照相比，以djl-6為接種微生物的各載體菌劑中多菌靈含量均有不同程度的下降；3 d時(shí)，以施加泥炭菌劑的處理中多菌靈降解最快，其余菌劑處理降解較慢；10 d時(shí)，各處理以施加蚯蚓糞菌劑的降解率最高，在第10 天時(shí)的降解率可以達(dá)到94.30%，其降解效果優(yōu)于泥炭以及其他堆肥載體。以D-2為接種微生物的各載體菌劑中啶蟲(chóng)脒含量均有不同程度的下降；3 d時(shí)，以施加蚯蚓糞菌劑的處理中啶蟲(chóng)脒降解最快；7 d時(shí)，各處理以施加蚯蚓糞菌劑的降解率最高，在第7 天時(shí)的降解率可以達(dá)到81.87%，其降解效果優(yōu)于泥炭以及其他堆肥載體；第10 天時(shí)，各處理中啶蟲(chóng)脒含量與對(duì)照相比均顯著下降，這可能與啶蟲(chóng)脒的自然降解有關(guān)。

3 討論

作為評(píng)價(jià)菌劑質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)，載體的吸水率直接影響著接種微生物的生長(zhǎng)[21-23]。載體需要為吸附在其上面的微生物的生長(zhǎng)提供濕潤(rùn)的生存環(huán)境才能使得微生物能夠在較長(zhǎng)的一段時(shí)間生存，這也就意味著可以延長(zhǎng)菌劑的保存時(shí)間。而本研究中所使用的載體除了雞糞肥之外，其余載體吸水率均處于60%以上，能為接種微生物的生長(zhǎng)提供充足的水分。微生物接種材料含水率過(guò)低不能供應(yīng)微生物的日常生存需求，而含水率過(guò)高會(huì)導(dǎo)致載體菌劑在保存時(shí)期菌劑的質(zhì)量發(fā)生變化，產(chǎn)生霉菌，危及接種菌株的生存。本文所研究的各個(gè)載體自然狀態(tài)下風(fēng)干3 d后的含水率在7.09% ~ 16.70%，滿足制作菌劑的所需的載體含水率標(biāo)準(zhǔn)[24]。pH也是一個(gè)影響微生物在載體中生存的因素，pH為中性的條件下適合微生物在載體中的生長(zhǎng)繁殖，當(dāng)pH低于5時(shí)，微生物生長(zhǎng)受到明顯的抑制[25-26]。然而不同的細(xì)菌，其最適的生長(zhǎng)pH也不相同。本研究所使用的兩株農(nóng)藥降解菌其最適生長(zhǎng)的pH范圍為6 ~ 8，而本研究所使用的大多載體的pH也介于6 ~ 8，可以滿足細(xì)菌生長(zhǎng)的條件。對(duì)于不同載體養(yǎng)分情況的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)豬糞肥、雞糞肥等有機(jī)肥中氮磷等元素含量較高。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)以豬糞肥、雞糞肥等有機(jī)肥作為載體時(shí)固體菌劑的有效菌數(shù)釋放率與活菌數(shù)較高，這可能與降解菌株更好地利用氮磷等營(yíng)養(yǎng)元素生長(zhǎng)有關(guān)。

當(dāng)前，人們對(duì)于固體菌劑質(zhì)量評(píng)估的標(biāo)準(zhǔn)主要是以活菌數(shù)作為一個(gè)重要指標(biāo)，卻極少報(bào)道固體菌劑的有效菌數(shù)釋放率，然而后者卻是真正能夠反映接種菌劑應(yīng)用效果的一個(gè)指標(biāo)。本研究表明，同種菌的有效菌數(shù)釋放率隨著不同的載體改變而變化，同種載體接種不同的微生物，其有效菌數(shù)釋放率也不同，這與牛彥波等[27]的研究結(jié)果一致。載體的有效菌數(shù)釋放率過(guò)低可能是因?yàn)橥庠唇臃N的微生物對(duì)載體需要有一個(gè)不同時(shí)間的適應(yīng)過(guò)程，也可能是因?yàn)檩d體中內(nèi)部微孔結(jié)構(gòu)中可利用的有效營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)太少而導(dǎo)致微生物大量死亡。而本研究中以djl-6作為接種微生物的載體菌劑中，以蚯蚓糞有效菌數(shù)釋放率最高，達(dá)到了100.40%，這是因?yàn)榻臃Ndjl-6到蚯蚓糞后，djl-6在其中進(jìn)行了大量的增殖。而以D-2作為接種微生物的載體菌劑中，也是以蚯蚓糞有效菌數(shù)釋放率最高，達(dá)到了82.03%。

固體菌劑的活菌數(shù)是載體菌劑評(píng)價(jià)的主要指標(biāo)[28]。本試驗(yàn)通過(guò)稀釋涂布平板法計(jì)算各菌劑的活菌數(shù)，結(jié)果表明，各菌劑活菌數(shù)均隨時(shí)間的延長(zhǎng)而下降。固體菌劑最適保藏期在30 d內(nèi)，而如若保存時(shí)間太長(zhǎng)，也會(huì)出現(xiàn)污染。因此，有必要根據(jù)不同的載體進(jìn)行不同的滅菌處理來(lái)提高菌劑活菌數(shù)。微生物的生長(zhǎng)，除了要保證其所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、礦質(zhì)元素之外，還需要保證氧含量以及生長(zhǎng)的濕度。本研究表明，各載體菌劑的含水率均隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降，這可能是菌劑中活菌數(shù)下降的主要原因。但過(guò)高的含水率又會(huì)導(dǎo)致菌劑的污染，比如以花生殼粉作為吸附載體的固體菌劑在30 d左右外觀開(kāi)始變黑且出現(xiàn)雜菌。目前的研究中關(guān)于固體菌劑保存過(guò)程中含水率動(dòng)態(tài)變化的研究極少，因此有必要通過(guò)調(diào)節(jié)固體菌劑在保存過(guò)程中的含水率來(lái)調(diào)控菌劑的活菌數(shù)。

不同的載體菌劑其降解農(nóng)藥的速度也并不相同，固體菌劑加入到土壤中后，其降解速度相對(duì)較慢，這是因?yàn)榻臃N微生物從載體中釋放到土壤中需要一個(gè)適應(yīng)過(guò)程。兩種菌劑均以蚯蚓糞作為載體的菌劑降解效果最好，其中以djl-6作為接種微生物的蚯蚓糞能夠在10 d內(nèi)降解土壤中90% 以上的濃度為5 mg/kg干土的多菌靈，以D-2作為接種微生物的蚯蚓糞能夠在7 d內(nèi)降解土壤中80% 以上的濃度為10 mg/kg干土的啶蟲(chóng)脒。

4 結(jié)論

以蚯蚓糞肥作為載體時(shí)，菌株djl-6、D-2有效菌數(shù)釋放率最高，分別達(dá)到了100.40% 和82.03%。以蚯蚓糞為載體的djl-6菌劑以及D-2菌劑在保存120 d時(shí)，活菌數(shù)均能維持在108cfu/g。以蚯蚓糞為載體的djl-6菌劑以及D-2菌劑在保存30 d后仍能有效降解土壤中的多菌靈及啶蟲(chóng)脒農(nóng)藥殘留。菌劑在保存30 d時(shí)，雖然以泥炭為載體的菌劑活菌數(shù)最高，但是泥炭作為一種不可再生資源，其價(jià)格偏高且再生速度慢，因此可將以蚯蚓糞為載體的菌劑進(jìn)行大規(guī)模應(yīng)用。