飼料中蘇丹紅的測定方法及儀器適用性驗證

蔣婷婷，鄭金星

（浙江福立分析儀器股份有限公司，浙江臺州317500）

蘇丹紅是一種由親脂性偶氮化合物合成的紅色染料，并非食品添加劑，被廣泛應(yīng)用于溶劑、油、蠟、汽油的增色以及鞋、地板等增光。由于蘇丹紅對食品具有染色功能，而且比天然色素價格低廉且染色牢固，導(dǎo)致一些廠商受利益驅(qū)使仍違禁使用。而在禽用飼料中，使用蘇丹紅會使禽類所產(chǎn)的蛋黃顏色發(fā)紅，人食用后會在體內(nèi)緩慢蓄積，對人體的肝腎器官具有明顯的毒性作用。我國及歐盟（EU）等國家已禁止蘇丹紅在食品及飼料中添加。

在食品方面有關(guān)蘇丹紅的檢測方法有國家標(biāo)準(zhǔn)2005《食品中蘇丹紅染料的檢測方法高效液相色譜法》及歐盟標(biāo)準(zhǔn)方法《辣椒粉及以辣椒為主要成分的產(chǎn)品中蘇丹紅和胭脂樹橙的含量分析》。在飼料方面我國農(nóng)業(yè)部在2007年頒布了關(guān)于使用高效液相色譜儀測定飼料中蘇丹紅染料的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。本文根據(jù)飼料行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對某飼料中的蘇丹紅進(jìn)行檢測，驗證方法以及儀器的適用性。

1 實(shí)驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC5090（配置為LC5090 四元低壓輸液泵、LC5090脫氣機(jī)、LC5090自動進(jìn)樣器、LC5090柱溫箱、LC5090 紫外檢測器、LC5090+色譜工作站），浙江福立分析儀器股份有限公司；KS康氏振蕩器，常州隆和儀器制造有限公司；GT16-3高速臺式離心機(jī)，北京時代北利離心機(jī)有限公司；CYNS-12氮吹儀，杭州川一實(shí)驗儀器有限公司；注射器濾膜（有機(jī)系），13 mm×0.45 μm，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；乙腈，色譜級；蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，純度不低于85.0%，5 g，上海安譜科學(xué)儀器有限公司。

蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)貯備液：分別準(zhǔn)確稱取蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各10 mg，精確至0.000 1 g，分別置于100 mL容量瓶中，加乙腈超聲至完全溶解并定容至刻度。

蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確移取蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)貯備液10 mL 至100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度配制成濃度為10 μg/mL的蘇丹紅溶液。

蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別準(zhǔn)確移取蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)中間液1 mL、2 mL、5 mL、10 mL、20 mL 于100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度配制成濃度分別為0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2 色譜條件

色譜柱：Sapphiresil C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：A相-水，B相-乙腈（0～8 min，B相95%～100%保持20 min，28～29 min；B 相100%～95%保持6 min）；流速：1 mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣體積：10 μL；檢測波長：蘇丹紅Ⅰ478 nm，蘇丹紅Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ520 nm。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取某飼料樣品10 g（精確至0.001 g）置于150 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL乙腈，置于振蕩器振蕩提取30 min，取上清液于5 000 rpm 下離心3 min，靜置后取上清液5 mL，設(shè)置氮吹儀水浴溫度50℃，用氮?dú)獯蹈珊蠹? mL乙腈超聲30 s，過孔徑為0.45 μm的有機(jī)濾膜，濾液根據(jù)上述色譜條件上機(jī)測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液按1.2中的色譜條件進(jìn)行測定，外標(biāo)法定量。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999 5（見表1），符合定量要求。

表1 蘇丹紅的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 檢出限

經(jīng)計算，基線噪音為32.8 μAU，當(dāng)蘇丹紅濃度為0.02 μg/mL 時，S/N=3.1，經(jīng)計算換算，該方法檢出限為0.02 mg/kg，達(dá)到了NY/T 1258-2007《飼料中蘇丹紅染料的測定高效液相色譜法》0.5 mg/kg的要求。

2.3 精密度

對0.5 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7 次，考查儀器的精密度，保留時間和峰面積的重復(fù)性結(jié)果如表2 所示。保留時間RSD 在0.039%～0.047%之間，峰面積RSD 在0.152%～0.410%之間，儀器的精密度良好（見表2）。

表2 重復(fù)性結(jié)果（n=7）

2.4 樣品及加標(biāo)回收率

對某飼料進(jìn)行蘇丹紅檢測，經(jīng)保留時間比對，蘇丹紅四組分均未檢出。同時對某飼料進(jìn)行加標(biāo)，加標(biāo)濃度為0.5 μg/mL，加標(biāo)回收率結(jié)果見表3，色譜圖見圖1、圖2。

圖1 某飼料未加標(biāo)色譜圖

圖2 某飼料加標(biāo)后色譜圖

表3 回收率結(jié)果

3 結(jié)論

采用福立高效液相色譜儀LC5090 低壓梯度系統(tǒng)測定飼料中的蘇丹紅，具有靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，滿足NY/T 1258-2007《飼料中蘇丹紅染料的測定高效液相色譜法》的檢測要求。四種蘇丹紅分離度良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性度均大于0.999 5，儀器檢出限計算值為0.02 mg/kg。連續(xù)進(jìn)樣7次，四種蘇丹紅的保留時間和峰面積RSD分別在0.039%～0.047%和0.152%～0.410%，儀器精密度良好。對某飼料進(jìn)行蘇丹紅檢測，檢測結(jié)果未檢出四種組分，樣品的加標(biāo)回收率在92%～103%。使用該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)測定飼料中的蘇丹紅靈敏度高，分離度好，且儀器測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，儀器適用性好。