廣州市醫(yī)療機構(gòu)HIV 抗體不確定的蛋白印跡試驗結(jié)果及與轉(zhuǎn)歸情況的關(guān)系

李麗雅 胡鳳玉 蘭蕓 蔡曉莉 譚奕洲 范慶紅 賈衛(wèi)東

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬市八醫(yī)院傳染病研究所 510060

準確和及時診斷HIV 是實現(xiàn)抗病毒治療和病毒控制目標的必要條件。目前最常用的HIV 抗體確證試驗方法是蛋白印跡試驗（WB），其試驗結(jié)果可判為HIV 抗體陽性、陰性和不確定。 HIV 抗體不確定結(jié)果不僅給實驗室檢測和臨床診斷帶來困擾，也給受檢者帶來沉重的心理負擔(dān)。 由于受檢者后續(xù)隨訪依從性差，若處于HIV 感染窗口期，將有可能繼續(xù)傳染，造成疫情擴大。 本研究通過對廣州醫(yī)科大學(xué)附屬市八醫(yī)院艾滋病確證實驗室2015—2019 年報告的HIV 抗體不確定的WB 結(jié)果進行分析，旨在了解HIV 抗體不確定結(jié)果的流行病學(xué)特征、WB 帶型特征及其與感染轉(zhuǎn)歸的關(guān)系，為臨床診治和疫情防控提供依據(jù)。

對象與方法

一、研究對象

查詢廣州醫(yī)科大學(xué)附屬市八醫(yī)院艾滋病確證實驗室病例登記信息庫， 納入2015—2019 年進行HIV 抗體篩查試驗陽性，經(jīng)WB 試驗判為HIV 抗體不確定的病例共199 例。 通過醫(yī)院電子病歷系統(tǒng)，收集并錄入患者的社會人口學(xué)信息、臨床資料及實驗室檢查結(jié)果，并將HIV 抗體不確定者分為HIV 陽轉(zhuǎn)、陰轉(zhuǎn)和失訪人群。

二、檢測方法

HIV 抗體篩查試驗采用ELISA 法和快速試驗（RT），分別采用HIV 抗原抗體診斷試劑盒（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司）和HIV 抗體檢測試劑盒（膠體金法，廈門英科新創(chuàng)科技術(shù)有限公司）。

HIV 抗體確證試驗采用HIV-1+2 型抗體免疫試劑盒（WB，HIV BLOT2.2）（新加坡MP 生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司）， 儀器為AutoBlot System 20 免疫印跡儀。 以上試驗具體操作參照試劑說明書和實驗室標準操作規(guī)程，所有試劑均在有效期內(nèi)，所有儀器均經(jīng)過校驗。 HIV 抗體確證試驗結(jié)果根據(jù)試劑盒說明書進行判定。

三、結(jié)果判斷標準

參照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2015 年修訂版）[1]和試劑說明書，HIV 抗體確證試驗WB 結(jié)果判斷 標 準：（1）HIV 抗 體 陽性： 檢 測 出2 條 外 膜 蛋白（env）帶（ gp160／gp41 和gp120） 及1 條核心蛋白（gag）帶（ p17、 p24 和p55）或反轉(zhuǎn)錄酶蛋白（pol）帶（ p31、 p51 和p66）；（2）HIV 抗體陰性：無HIV抗體特異條帶出現(xiàn)；（3）HIV 抗體不確定：出現(xiàn)HIV 抗體特異條帶，但不足以被判定陽性。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 23.0 軟件進行統(tǒng)計分析。 計數(shù)資料以例數(shù)和率表示，組間比較采用χ2檢驗。 所有統(tǒng)計檢驗均為雙側(cè)，P<0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、HIV 抗體不確定人群的流行病學(xué)特征

2015—2019 年共有3 365 份樣本進行了WB確證試驗， 其中HIV 抗體不確定者199 例，占5.91%， 5 年間不確定者檢出率差異無統(tǒng)計意義（χ2=6.475，P＞0.05）。 流行病學(xué)分析顯示，HIV 抗體不確定者以50 歲以下的中青年男性為主， 可能的感染途徑以性傳播為主。 近5 年不確定人群在平均年齡、性別、婚姻狀況、文化程度和感染途徑上的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P 均＞0.05）。

二、HIV 抗體不確定的WB 帶型特征與轉(zhuǎn)歸情況

1. 組合帶型出現(xiàn)頻率

199 例HIV 不確定者的WB 組合帶型共有13種，出現(xiàn)最多的是p24+gp160，占32.66%（65 例），其次是gp120+gp160 和gp41+gp120+gp160， 分別占16.58%（33 例）和16.08%（32 例）。 HIV 的三個主要結(jié)構(gòu)抗原：env 類的組合帶型有11 種， 占86.93%；gag 類的組合帶型有2 種，占13.07%。

2. 不確定結(jié)果的轉(zhuǎn)歸情況

199 例HIV 抗體不確定結(jié)果中，185 例有后續(xù)隨訪結(jié)果，失訪14 例。185 例隨訪結(jié)果中，轉(zhuǎn)歸為陽性的比例為89.73%（166 例），轉(zhuǎn)歸為陰性的比例為10.27%（19 例）。 在上述最常見的3 種組合帶型中，除了1 例gp120+gp160 組合帶型患者最后轉(zhuǎn)歸為陰性，其他均轉(zhuǎn)歸為陽性。 然而，23 例組合帶型為p24單條帶型的患者中，10 例（43.48%）轉(zhuǎn)歸為陰性。 詳見表1。

表1 HIV 抗體不確定結(jié)果的蛋白印跡試驗帶型分布及轉(zhuǎn)歸情況

3. 組合帶型條帶數(shù)量與轉(zhuǎn)歸情況的關(guān)系

對185 例明確轉(zhuǎn)歸的HIV 抗體不確定者組合帶型條帶數(shù)量與轉(zhuǎn)歸情況進行分析，各種組合帶型條帶數(shù)不超過3 條，以2 條帶為主（52.43%，97/185），陽轉(zhuǎn)率97.94%（95/97）； 帶型為單條帶占27.03%（50/185），陽轉(zhuǎn)率66.00%（33/50）；帶型為3 條帶占20.54%（38/185），陽轉(zhuǎn)率100.00%（38/38）。隨著條帶數(shù)增加，陽轉(zhuǎn)率顯著增高，陽轉(zhuǎn)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=41.993，P＜0.01）。

三、HIV 抗體不確定單條帶型出現(xiàn)頻率情況

分析185 例明確轉(zhuǎn)歸的HIV 抗體不確定結(jié)果單條帶型出現(xiàn)頻率， 發(fā)現(xiàn)gp160、p24 和gp120 帶型出現(xiàn)頻率最高， 分別為84.32%、49.73%和37.30%。 此外， 陽轉(zhuǎn)者gp160 和gp120 帶型出現(xiàn)率顯著高于陰轉(zhuǎn)者（χ2=36.116 和4.188，P＜0.01 或＜0.05），詳見表2。

四、ELISA 試驗S/CO 值與轉(zhuǎn)歸情況

對185 例有明確轉(zhuǎn)歸結(jié)果的患者進行ELISA篩查， 由于19 例轉(zhuǎn)歸為陰性者中有15 例樣本的ELISA 試驗S/CO 值≤6， 據(jù)此分為S/CO 值≤6 組（88 例）和＞6 組（97 例），其中S/CO 值≤6 組的陽轉(zhuǎn)率 為82.95%（73/88），S/CO 值＞6 組 的 陽 轉(zhuǎn) 率 為95.88%（93/97），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.360，P＜0.01）。

表2 HIV 抗體不確定結(jié)果單條帶型的分布情況[出現(xiàn)頻數(shù)（%）]

討 論

中國艾滋病疫情形勢嚴峻，截至2017 年底，我國報告的現(xiàn)存活HIV/AIDS 患者758 610 例， 當(dāng)年報告死亡30 718 例[2]。 對于HIV 抗體不確定者，需要通過流行病學(xué)史、定期隨訪和實驗室檢測結(jié)果判定，盡早明確診斷，實現(xiàn)早期干預(yù)，減少艾滋病的傳播風(fēng)險， 同時也可盡早解除非HIV 感染者的心理壓力。

既往研究結(jié)果顯示，WB 試驗結(jié)果為不確定的比例為3.45%～14.5%[3-5]，本研究發(fā)現(xiàn)HIV 抗體不確定的比例為5.9%，與文獻報道基本一致。 HIV 抗體不確定的原因尚未完全清楚，既往研究認為，出現(xiàn)WB 試驗不確定結(jié)果的可能原因包括HIV 窗口期感染、艾滋病終末期和非特異性反應(yīng)[6-7]。 人體從感染HIV 到能夠檢測到HIV 抗體的窗口期約為2 周，早期感染發(fā)生時，病原體抗體滴度較低，與抗原的親和力低，就會導(dǎo)致抗體檢測出現(xiàn)不確定結(jié)果或漏檢的情況[8]。 患者進入艾滋病期，由于機體出現(xiàn)免疫功能受損以及血液中大量病毒復(fù)制并且與抗體產(chǎn)生抗原抗體復(fù)合物， 抗體滴度會下降， 也會導(dǎo)致HIV抗體檢測不確定結(jié)果。 國內(nèi)關(guān)于HIV 抗體不確定的報道一般認為以非特異性條帶反應(yīng)為主， 繆禮鋒等[9]報道90.0%以上的不確定結(jié)果為非感染樣本，吳守麗等[10]報道由非特異性反應(yīng)所引起的HIV 抗體不確定結(jié)果比例分別為52.4%。 本研究199 例WB試驗不確定結(jié)果中， 有185 例明確轉(zhuǎn)歸， 其中89.73%轉(zhuǎn)歸為陽性，可見大多數(shù)的不確定結(jié)果是由HIV 感染引起。 本研究結(jié)果與上述研究不一致的主要原因可能是研究對象不同，廣州醫(yī)科大學(xué)附屬市八醫(yī)院是廣州市艾滋病治療定點醫(yī)院，進行此項檢測的患者多是在外院先行篩查試驗為感染待確定者或有明確高危行為、吸毒史等特殊人群以及出現(xiàn)艾滋病相關(guān)癥狀的晚期感染者， 因此， 本院的HIV抗體不確定陽轉(zhuǎn)率較高，與謝思燕等[11-12]報道基本一致。

Schüpbach 等[13]和王繼寶等[14]的研究顯示，不同WB 帶型不確定結(jié)果預(yù)示HIV 感染的意義不同。gp160 和p24 是HIV 感染后最早出現(xiàn)的帶型， 是早期感染的重要信息[3]。 本研究結(jié)果顯示，組合帶型以env 類為主， 最常見的組合帶型p24+ gp160 隨訪中最后轉(zhuǎn)歸均為陽性，提示env 帶（gp160/gp120/gp41）和p24 同時出現(xiàn)可能有更大的感染風(fēng)險，而且該人群很可能是早期感染者。 有研究表明， 急性期HIV傳播能力是其他階段的26 倍[15]，因此早期、準確、可靠的診斷尤為重要，是防止HIV 廣泛傳播的關(guān)鍵。

譚卓等[16]報道187 例不確定結(jié)果中，出現(xiàn)單條帶114 例（60.96%），認為不確定結(jié)果通常不超過3條條帶，以單一和2 條帶型為主。 本文對明確轉(zhuǎn)歸的不確定結(jié)果WB 條帶數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，組合帶型以2 條帶為主，組合帶型為3 條帶的陽轉(zhuǎn)率為100.00%，隨著條帶數(shù)增加， 陽轉(zhuǎn)率顯著增高， 表明出現(xiàn)帶型3條及以上條帶，基本可以排除非特異性反應(yīng)，高度懷疑為HIV 感染，需要密切隨訪。 轉(zhuǎn)歸為陰性的多為單條帶反應(yīng)，19 例陰轉(zhuǎn)者中有17 例檢出為單條帶，其中p24 單條帶型10 例。 p24 在早期感染的檢測中有重要意義，但同時具有非特異性，楚承霞等[3]報道p24 帶型隨訪者轉(zhuǎn)歸均為陰性，然而本研究結(jié)果顯示，單條p24 帶型超過一半比例（56.52%）最后轉(zhuǎn)歸為陽性，此外，出現(xiàn)單條gp160 帶型的HIV 抗體不確定轉(zhuǎn)歸為陽性的比例也較高 （79.17%）。 因此，在定點醫(yī)療機構(gòu)，對于HIV 感染高危人群，在出現(xiàn)單條帶型gp160 和p24 的不確定結(jié)果時， 仍要警惕，注意復(fù)檢或結(jié)合其他檢測方法如病毒載量檢測等進行診斷。

本研究發(fā)現(xiàn)，ELISA 試驗的S/CO 值與最終轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，19 例轉(zhuǎn)歸為陰性的患者中，15 例S/CO值≤6，S/CO 值＞6 的不確定者轉(zhuǎn)陽率明顯高于≤6者，與夏燕等[17]研究結(jié)果一致。 ELISA 試驗的S/CO值的大小與樣本中含HIV 抗體種類的多少和濃度相關(guān)，S/CO 值越高，陽性概率越大[18]，提示對于S/CO值＞6 的HIV 抗體不確定樣本， 臨床可根據(jù)就診者是否有高危行為等流行病學(xué)史和臨床癥狀及時進行復(fù)檢。

WB 試驗是目前被公認為最有效、 最普遍的HIV 抗體確證試驗。 對于HIV 抗體不確定結(jié)果，根據(jù)WB 帶型特征和ELISA 結(jié)果的S/CO 值范圍，可以對不確定結(jié)果的感染風(fēng)險進行初步評估。 env 類不確定結(jié)果以及ELISA 試驗S/CO 值＞6 預(yù)示HIV感染的意義比較大。 p24+ gp160 組合帶型的不確定結(jié)果很可能處于感染早期，應(yīng)縮短復(fù)檢時間，結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果、CD 細胞計數(shù)和病毒載量檢測，爭取盡早確診，盡早治療，降低發(fā)病率和病死率，防止HIV 進一步擴散。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突