外源2,4-表油菜素內(nèi)酯對鎘脅迫下草地早熟禾葉綠素代謝的影響

朱瑞婷， ?？e， 張娣君， 楊 陽， 宋 云， 馬暉玲

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院， 草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 甘肅省草業(yè)工程實(shí)驗(yàn)室， 中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心， 甘肅 蘭州 730070)

鎘(Cadmium，Cd)污染是最為普遍的重金屬污染，對植物、動物和人類健康具有潛在的危害[1]。植物修復(fù)技術(shù)可用于去除土壤中的重金屬，該技術(shù)成本低廉、環(huán)境友好，是土壤重金屬修復(fù)研究中的熱點(diǎn)問題，應(yīng)用前景廣泛[2-4]。目前已發(fā)現(xiàn)多種Cd超積累植物，如天藍(lán)遏藍(lán)菜(Thlaspicaerulescens)、東南景天(Sedumalfredii)和龍葵(Solanumnigrum)等[5-6]，但已發(fā)現(xiàn)的超富集植物多為一年生植物，且生物量小，不適于我國北方寒旱地區(qū)種植[7]。相對而言，草坪草具有氣候環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，根系致密，多年生，耐地修剪等優(yōu)點(diǎn)，可以迅速地覆蓋地表，防止重金屬通過水或風(fēng)的侵蝕遷移到別處，這些優(yōu)點(diǎn)使草坪草比其他超富集植物在修復(fù)鎘污染土壤上具有顯著的優(yōu)越性[7-8]。已有研究表明，草地早熟禾(Poapratensis)、高羊茅(Festucaelata)和多年生黑麥草(Loliumperenne)等冷季型草坪草對Cd具有較強(qiáng)的耐受和富集能力，在80 mg·kg-1Cd處理下，草地早熟禾對土壤Cd的萃取率高達(dá)4.64%,而超富集植物龍葵只有0.43%[9-10]。因此，研究Cd脅迫下草坪草生長發(fā)育的調(diào)控對利用其修復(fù)Cd污染土壤具有重要意義。

油菜素甾醇(Brassinosteroids,BRs)是植物體中發(fā)現(xiàn)的一類甾醇類植物激素，在植物的正常生長發(fā)育和對生物、非生物脅迫適應(yīng)過程中起著重要作用[11]。2，4-表油菜素內(nèi)酯(2,4-Epibrassinolide，EBR)是作為外源物質(zhì)在植物上應(yīng)用最多的BRs化合物之一[12]。研究表明，外源EBR對植物低溫[13]、高溫[14]、干旱[15]、鹽[16]和重金屬[17]脅迫損傷均具有一定的緩解效應(yīng)。外源EBR可促進(jìn)逆境脅迫下植物的生長發(fā)育,增加葉綠素含量、提高光合能力和增強(qiáng)抗氧化能力[12-15]。葉綠素代謝和植物的光合作用聯(lián)系密切，但關(guān)于外源EBR調(diào)控Cd脅迫下葉片的葉綠素合成和降解代謝的研究鮮有報(bào)道。

草地早熟禾具有較強(qiáng)的耐Cd性，Cd脅迫可降低草地早熟禾葉綠素含量[8]，但Cd脅迫對草地早熟禾葉綠素合成和降解代謝的影響尚不清楚。因此，本試驗(yàn)以草地早熟禾‘午夜’為研究材料，對Cd脅迫和不同濃度EBR處理下的植株葉綠素合成中間產(chǎn)物和葉綠素含量以及葉綠素合成和降解通路相關(guān)基因的相對表達(dá)水平進(jìn)行了測定，旨在揭示Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素代謝的響應(yīng)及外源EBR對Cd脅迫下植物葉綠素代謝的調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為草地早熟禾‘午夜’品種，來自北京克勞沃公司。

1.2 試驗(yàn)處理

將種子播種在直徑為9 cm、高度為17 cm的育苗缽中，每組10盆。育苗缽中為營養(yǎng)土、蛭石和沙子，其比例為2∶1∶1，在生長室中培養(yǎng)。生長條件為：白天溫度為25℃，時(shí)間為16 h，光照強(qiáng)度為6 000 lux，夜晚溫度為20℃，時(shí)間為8 h，濕度為50%。待幼苗長45 d左右后，選擇長勢一致的幼苗移栽到水培盒中。移栽7 d后的草地早熟禾植株進(jìn)行不同濃度的EBR噴施處理和Cd脅迫處理，處理共有5組：(1)CK，Hoagland營養(yǎng)液培養(yǎng)；(2)Cd，含0.5 mM CdCl2·1/2 H20的Hoagland營養(yǎng)液培養(yǎng)(0.114 g CdCl2·1/2 H20溶于1 L Hoagland營養(yǎng)液中)；(3)Cd+5 nM EBR，含0.5 mM CdCl2·1/2 H20的Hoagland營養(yǎng)液培養(yǎng)和5 nM的2，4-油菜素內(nèi)酯預(yù)處理；(4)Cd+50 nM EBR，含0.5 mM CdCl2·1/2 H20的Hoagland營養(yǎng)液培養(yǎng)和50 nM的2，4-油菜素內(nèi)酯預(yù)處理；(5)Cd+100 nM EBR，含0.5 mM CdCl2·1/2 H20的Hoagland營養(yǎng)液培養(yǎng)和100 nM的2,4-油菜素內(nèi)酯預(yù)處理。EBR預(yù)處理是指在Cd脅迫開始的前3 d對草地早熟禾葉片噴施不同濃度EBR的處理，CK和Cd處理組噴施相同體積的蒸餾水。Cd脅迫處理后1 d，3 d，6 d時(shí)采集各處理組草地早熟禾葉片，每處理組4次重復(fù)。

1.3 光合色素及葉綠素合成前體物質(zhì)含量的測定

葉綠素a、葉綠素b和葉綠素總含量用乙醇-丙酮浸提法測定[18-19]，稱取0.2 g新鮮葉片，將其浸入10 mL提取液中，提取液為乙醇和丙酮溶液(體積比為1∶1)，黑暗靜置24 h后搖勻，在波長645 nm，652 nm和663 nm下測定吸光值A(chǔ)，并計(jì)算出其物質(zhì)含量。

采用Hodgins和Van Huystee (1986) 的方法[20]測定原卟啉Ⅳ(ProtoⅣ)、鎂-原卟啉Ⅳ(Mg-ProtoⅣ)和原葉綠素酸酯(Pchl)的含量。稱0.2 g新鮮葉片，分3次加入10 mL的提取液，提取液為丙酮和1%的氨水溶液(體積比為4∶1)，冰浴充分研磨后在4℃，12 000 r·min-1下離心18 min，離心結(jié)束后吸取上清液分別在不同的波長(575 nm，590 nm和628 nm)下測定吸光值A(chǔ)，并計(jì)算其物質(zhì)含量。

1.4 葉綠素代謝途徑相關(guān)基因的表達(dá)

葉片RNA提取使用天根公司植物RNA提取試劑盒，RNA反轉(zhuǎn)錄使用Prime Script RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect real time)試劑盒，第一步為去除基因組DNA反應(yīng)，第二步為反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，稀釋20倍作為模板。根據(jù)水稻(oryzasativaL.)葉綠體合成酶相關(guān)基因的登錄號，將本實(shí)驗(yàn)室已有和報(bào)道的草地早熟禾轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫作為本地?cái)?shù)據(jù)庫[21-22]，查找與葉綠素合成酶相關(guān)的基因系列，使用NCBI在線網(wǎng)站Prime-BLAST (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，設(shè)計(jì)的引物由蘭州天啟基因生物科技有限公司合成(表1)。表中基因?yàn)槟懮卦摪泵?PpPBGD)、原葉綠素酸酯氧化還原酶(PpPOX)、葉綠素酶(PpCLH)、脫鎂葉綠酸a氧化酶(PpPAO)、5-氨基酮戊酸脫水酶(PpALAD)、紅色葉綠素分解代謝物還原酶(PpRCCR)、脫鎂葉綠素酶(PpPPH)、谷氨酰tRNA合成酶(PpGTS)、Mg-螯合酶D亞基(PpCHLD)、Mg-螯合酶Ⅰ亞基(PpCHLI)。利用試劑盒進(jìn)行qRT-PCR分析，熒光定量試劑盒來自北京擎科新興生物技術(shù)有限公司。20 μL反應(yīng)體系如下：模板5 μL，引物1.6 μL，ddH2O 3.4 μL，2×TSINGKE Master Qpcr Mix 10 μL。熒光定量PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性1 min，50個(gè)循環(huán)的PCR擴(kuò)增，包括95℃變性10 s和60℃退火30 s，60℃時(shí)采集熒光信號。內(nèi)參基因?yàn)镻pACT，每個(gè)樣品設(shè)3次技術(shù)重復(fù)，基因的相對表達(dá)量使用2-ΔΔCT法計(jì)算[23]。

表1 葉綠素合成相關(guān)基因的引物系列

1.5 數(shù)據(jù)分析

使用Excel 2019統(tǒng)計(jì)和整理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，利用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，假定方差齊性選擇LSD和Duncan，顯著性水平為0.05，并用GraphPad Prism 8軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 外源EBR對Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素含量的影響

由圖1可知，Cd處理的草地早熟禾葉片的葉綠素a含量在1 d和6 d時(shí)顯著低于對照(CK)(P<0.05)，葉綠素b含量在1 d和6 d時(shí)高于CK，但差異不顯著。在Cd脅迫處理的第3 d，草地早熟禾葉片的葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量與CK無顯著性差異。在脅迫處理的第6 d，Cd處理的草地早熟禾葉片的葉綠素a和總?cè)~綠素含量較CK分別下降了54.80%和33.23%，葉綠素b較CK增加了14.51%。5 nM和50 nM EBR處理的草地早熟禾葉片的葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量在Cd脅迫期間(1～6 d)與CK無顯著性差異。在Cd脅迫6 d時(shí)，100 nM EBR處理的草地早熟禾葉片的葉綠素a和總?cè)~綠素含量顯著低于CK(P<0.05)，但其含量仍高于Cd處理，說明外源EBR可緩解Cd脅迫導(dǎo)致的草地早熟禾葉片的葉綠素a和總?cè)~綠素含量的降低。

圖1 外源EBR對鎘脅迫下草地早熟禾葉片的葉綠素a(A)、葉綠素b(B)和總?cè)~綠素含量(C)的影響

2.2 外源EBR對Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素合成前體物質(zhì)含量的影響

如圖2所示，Cd處理的草地早熟禾葉片的原卟啉Ⅳ、鎂-原卟啉Ⅳ和原葉綠素酸酯含量均顯著低于CK(P<0.05)。在Cd脅迫1 d時(shí)，草地早熟禾葉片的原卟啉Ⅳ和鎂-原卟啉Ⅳ含量的下降幅度最大，分別較CK下降了37.99%和34.36%；在Cd脅迫3 d時(shí)，草地早熟禾葉片的原葉綠素酸酯含量的下降幅度最大，較CK下降了34.57%；Cd處理的草地早熟禾葉片的鎂-原卟啉Ⅳ和原葉綠素酸酯含量在6 d時(shí)下降幅度最小。

外源添加5 ～100 nM EBR可減緩Cd脅迫下草地早熟禾葉片的原卟啉Ⅳ、鎂-原卟啉Ⅳ和原葉綠素酸酯含量的下降幅度(圖2)。50 nM EBR處理的草地早熟禾葉片的原卟啉Ⅳ含量在脅迫期間(1～6 d)均顯著高于Cd處理(P<0.05)，脅迫處理6 d與CK無顯著性差異。在Cd脅迫3 d時(shí)，5 ～100 nM EBR處理的草地早熟禾葉片的鎂-原卟啉Ⅳ和原葉綠素酸酯含量顯著高于Cd處理(P<0.05)，50 nM EBR處理下與CK無顯著性差異，說明外源EBR可緩解Cd脅迫導(dǎo)致的草地早熟禾葉片的葉綠素合成前體物質(zhì)含量的降低。

2.3 外源EBR對Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素合成通路基因表達(dá)的影響

PpGTS，PpALAD，PpPBGD，PpCHLD，PpCHLI和PpPOR基因編碼從谷氨酸到葉綠素a合成生物合成通路的關(guān)鍵酶，由圖3可知，Cd處理1 d后可下調(diào)PpPBGD，PpCHLD，PpCHLI和PpPOR基因的表達(dá)(P<0.05)，而PpGTS和PpALAD基因表達(dá)水平無明顯變化。在Cd處理3 d時(shí)，PpGTS，PpALAD，PpPBGD和PpCHLD基因表達(dá)水平與CK相比無顯著性差異;而在第6 d，Cd處理可誘導(dǎo)PpGTS,PpALAD,PpPBGD和PpPOR基因的上調(diào)表達(dá)(P<0.05)。該結(jié)果說明草地早熟禾葉綠素合成通路基因在短期Cd脅迫下被下調(diào)表達(dá)，而長期的Cd脅迫可在轉(zhuǎn)錄水平上誘導(dǎo)葉綠素合成通路基因的上調(diào)表達(dá)。

圖2 外源EBR對鎘脅迫下草地早熟禾葉片的鎂-原卟啉Ⅳ(A)、原葉綠素酸酯(B)和原卟啉Ⅳ含量(C)的影響

外源EBR處理可誘導(dǎo)Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素合成通路基因的上調(diào)表達(dá)(圖3)。50 nM EBR處理在Cd脅迫1 d可誘導(dǎo)PpGTS,PpALAD,PpPBGD和PpPOR基因的上調(diào)表達(dá)(P<0.05)。Cd脅迫3 d時(shí)，100 nM EBR處理可誘導(dǎo)PpGTS,PpALAD和PpCHLD基因的上調(diào)表達(dá)(P<0.05)，而50 nM EBR處理可誘導(dǎo)PpCHLI和PpPOR基因的上調(diào)表達(dá)(P<0.05)。Cd脅迫6 d時(shí)，5 ～100 nM EBR處理的草地早熟禾PpGTS,PpALAD,PpCHLD和PpCHLI基因表達(dá)水平與Cd處理無顯著性差異，而PpPBGD和PpPOR基因被誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)(P<0.05)，其中5，50和100 nM EBR處理的PpPOR基因相對表達(dá)量分別是Cd處理9.3，4.7和9.4倍，這說明外源EBR可在轉(zhuǎn)錄水平上促進(jìn)Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素生物合成通路。

2.4 外源EBR對Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素降解通路基因表達(dá)的影響

PpCLH,PpPPH,PpPAO和PpRCCR是葉綠素降解通路的關(guān)鍵基因。如圖4所示，Cd處理1 d后，PpCLH和PpPPH基因表達(dá)水平無明顯變化，PpPAO和PpRCCR基因被誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)(P<0.05)，而Cd處理6 d后，PpCLH,PpPPH,PpPAO和PpRCCR基因均被誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)(P<0.05)，其表達(dá)水平分別是CK的18.5,12.4,63.5和14.1倍。在Cd脅迫3 d和6 d，外源添加50～100 nM EBR的草地早熟禾PpCLH，PpPPH和PpPAO基因的表達(dá)量低于Cd處理(P<0.05)，50 nM EBR處理的PpRCCR基因表達(dá)水平在第1 d和6 d均低于Cd處理(P<0.05)。這說明Cd脅迫可在轉(zhuǎn)錄水平上誘導(dǎo)葉綠素降解，而外源的EBR添加可在一定程度上抑制Cd脅迫引起的葉綠素降解。

圖3 外源EBR對鎘脅迫下草地早熟禾葉綠素合成通路基因表達(dá)的影響

圖4 外源EBR對鎘脅迫下草地早熟禾葉綠素降解通路基因表達(dá)的影響

3 討論

3.1 草地早熟禾葉綠素代謝對Cd脅迫的響應(yīng)

在高等植物中，光合色素主要包括葉綠素(葉綠素a、葉綠素 b)和類胡蘿卜素，干旱、高溫和重金屬等非生物脅迫常導(dǎo)致植物光合色素含量的下降和內(nèi)囊體膜結(jié)構(gòu)的損傷，進(jìn)而使得光合能力下降[24-26]。本研究結(jié)果表明，Cd脅迫可顯著地降低草地早熟禾葉片的葉綠素a和總?cè)~綠素含量。葉綠素的含量的降低可能是由于葉綠素中間產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化過程受到了阻礙葉綠素的生物合成，進(jìn)而導(dǎo)致葉綠素含量降低[27-29]，也有可能是由于葉綠素的降解所導(dǎo)致的[30]。Cd脅迫下植物葉綠素含量降低的原因尚不清楚，因此，本研究對Cd脅迫下草地早熟禾葉片的葉綠素合成和降解途徑都進(jìn)行了研究。

高等植物葉綠素的生物合成通路主要是：甘氨酸→5-氨基乙酰丙酸→膽色素原→尿卟啉原III→原卟啉Ⅳ→鎂-原卟啉Ⅳ→原葉綠素酸酯→葉綠素a[31-32]，該過程是由一系列關(guān)鍵酶的催化反應(yīng)完成的，編碼這些酶基因表達(dá)的下調(diào)可導(dǎo)致酶活性的降低，進(jìn)而使得該過程的催化反應(yīng)受阻，降低受阻位點(diǎn)之后的中間產(chǎn)物[33]。前人研究結(jié)果表明，高溫、干旱和鹽堿等逆境脅迫可導(dǎo)致植物葉綠素合成途徑受阻[27-29]。本研究對編碼葉綠素生物合成通路的關(guān)鍵酶基因進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)Cd脅迫初期草地早熟禾PpGTS和PpALAD基因表達(dá)水平無明顯變化，但PpPBGD，PpCHLD，PpCHLI和PpPOR均被誘導(dǎo)下調(diào)表達(dá)，其中PpPBGD基因編碼酶催化從膽色素原到尿卟啉原III的轉(zhuǎn)化過程，說明Cd脅迫可能導(dǎo)致該轉(zhuǎn)化過程受阻。向麗霞等[28]發(fā)現(xiàn)高溫脅迫下番茄(Solanumlycopersicum)幼苗葉綠素的合成受阻位點(diǎn)是膽色素原到尿卟啉原III的轉(zhuǎn)化過程，可造成原卟啉Ⅳ、鎂-原卟啉、原葉綠素酸酯和葉綠素a的降低，這與本研究結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)Cd處理的草地早熟禾葉片的鎂-原卟啉Ⅳ和原葉綠素酸酯含量在脅迫6 d時(shí)較CK下降幅度有所減小，這可能與PpPBGD和PpPOR基因在脅迫后期的上調(diào)表達(dá)有關(guān)，但Cd處理葉綠素a和總?cè)~綠素含量在6 d時(shí)的降幅最大，這說明Cd脅迫后期葉綠素含量的降低可能與葉綠素的降解有關(guān)。

植物葉片衰老過程中的葉綠素降解過程包括：葉綠素酶催化的葉綠素去植醇基反應(yīng)；脫鎂葉綠素酶催化的去除鎂離子反應(yīng)；脫鎂葉綠素酸氧化酶催化的卟啉氧化降解反應(yīng)；紅色葉綠素分解代謝物還原酶催化熒光葉綠素降解中間產(chǎn)物的分解代謝[34]。PpCLH，PpPPH，PpPAO和PpRCCR基因分別編碼上述4個(gè)步驟的關(guān)鍵酶[35]。在高溫誘導(dǎo)的匍匐翦股穎(Agrostisstolonifera)葉片衰老過程中，葉綠素酶(CLH)和脫鎂葉綠素酶(PPH)活性顯著增高[26]。擬南芥(Arabidopsisthaliana)PPH基因的缺失突變體表現(xiàn)出滯綠的表型，其葉片衰老過程中葉綠素不能夠被降解[36]。此外，在小麥(Triticumaestivum)、黃瓜(Cucumissativus)和辣椒(Capsicumannuum)等農(nóng)作物上的研究表明，低溫、高溫、鹽和干旱等非生物脅迫均可誘導(dǎo)PAO和RCCR基因的上調(diào)表達(dá)[37-39]。本研究表明Cd處理可誘導(dǎo)PpCLH，PpPPH，PpPAO和PpRCCR基因的上調(diào)表達(dá)，說明Cd脅迫引起葉綠素的降解。

3.2 外源EBR對Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素代謝的調(diào)控

外源EBR可通過調(diào)節(jié)植物的生理代謝過程及生長發(fā)育來提高植物在干旱、鹽堿、高溫和重金屬等逆境脅迫的能力[14-17]。已有研究表明外源EBR具有提高逆境脅迫下葉綠素含量的作用[12,16]。Peng等[40]發(fā)現(xiàn)外源EBR可提高Cd脅迫下Cd超富集植物龍葵葉片的葉綠素含量。本研究亦發(fā)現(xiàn)外源EBR可緩解Cd脅迫導(dǎo)致的草地早熟禾葉綠素a和總?cè)~綠素含量的降低，這說明外源EBR可能對草地早熟禾葉綠素生物合成或者降解途徑具有一定的調(diào)控作用。

BZR1基因是BRs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑下游重要的轉(zhuǎn)錄因子，可通過調(diào)控相應(yīng)靶標(biāo)基因的表達(dá)來調(diào)控不同的生物學(xué)過程[41]，番茄BZR1基因沉默株系可引起葉綠素的降解[42]。光敏色素作用因子(PIFs)也參與BR信號的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，BZR1-PIF4復(fù)合體可調(diào)控植物的生物學(xué)過程，BZR1也可通過DELLA蛋白與PIF1,PIF3和PIF3互作[43]。已有研究表明，PIF1基因可介導(dǎo)POR基因的表達(dá)而直接調(diào)控?cái)M南芥葉片葉綠素的生物合成[44]。本研究外源EBR可顯著誘導(dǎo)Cd脅迫下草地早熟禾PpPOR基因的上調(diào)表達(dá)。這說明外源EBR可能是通過BR信號途徑介導(dǎo)PIF來調(diào)控Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素的生物合成。外源EBR可在一定程度上誘導(dǎo)草地早熟禾葉片的葉綠素a合成通路其他關(guān)鍵基因的上調(diào)表達(dá)，進(jìn)一步緩解Cd脅迫對草地早熟禾葉片葉綠素合成中間產(chǎn)物及葉綠素含量的抑制，同時(shí)，外源EBR可抑制Cd脅迫誘導(dǎo)的葉綠素降解代謝相關(guān)基因上調(diào)表達(dá)。Peng等[40]研究發(fā)現(xiàn)外源EBR可誘導(dǎo)逆境脅迫下龍葵葉片葉綠素合成基因的上調(diào)表達(dá)和降解通路基因的下調(diào)表達(dá)，這與本研究結(jié)果相似。然而，有關(guān)外源EBR是如何調(diào)控葉綠素合成和降解通路基因的問題有待進(jìn)一步的研究。

4 結(jié)論

Cd脅迫初期，草地早熟禾葉片的葉綠素合成前體物質(zhì)原卟啉Ⅳ、鎂-原卟啉Ⅳ和原葉綠素酸酯含量與CK相比顯著降低，PpPBGD,PpCHLD,PpCHLI和PpPOR基因下調(diào)表達(dá)，葉綠素降解基因PpCLH,PpPPH,PpPAO和PpRCCR基因上調(diào)表達(dá)，葉綠素a和總?cè)~綠素的含量顯著下降。外源5 ～100 nM EBR處理可顯著提高Cd脅迫下草地早熟禾葉片的鎂-原卟啉Ⅳ和原葉綠素酸酯含量，其中50 nM的EBR可顯著提高Cd脅迫下原卟啉Ⅳ、鎂-原卟啉Ⅳ、原葉綠素酸酯葉綠素a和總?cè)~綠素的含量，誘導(dǎo)Cd脅迫下草地早熟禾葉綠素合成通路基因的上調(diào)表達(dá)，使Cd脅迫下草地早熟禾葉片的葉綠素含量恢復(fù)到正常水平。