宮頸癌患者HPV感染狀況及外周血Th1/Th2細胞因子變化研究

姜愛華 孫俊紅 張芳芳 李自平

宮頸癌(uterine cervical cancer)是婦科常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居女性惡性腫瘤第一位，而且發(fā)病率有逐年增高、有低齡化趨勢。輔助性T細胞(T helper，Th)亞群在人體免疫功能中起到重要作用，主管細胞免疫，具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)功能，CD4是T細胞主要效應(yīng)細胞成員之一，可分為Th1和Th2兩類亞群，Th1主要介導(dǎo)細胞免疫，Th2主要介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，在正常情況下Th1/Th2處于動態(tài)平衡狀態(tài)，研究顯示Th1/Th2的變化在惡性腫瘤免疫逃逸中起著十分重要的作用[1-2]，本研究對宮頸癌患者HPV感染狀況及外周血Th1/Th2細胞因子變化進行了研究，分析其在宮頸癌發(fā)生及發(fā)展中所起的可能機制，為宮頸癌的臨床防治提供參考，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2016年1月2019年7月期間在醫(yī)院診治的80例宮頸癌患者為研究對象(宮頸癌組)，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)過病理檢查確診為宮頸癌。②均為初診。③納入研究前未進行放化療等治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不符合納入標(biāo)準(zhǔn)。②妊娠期及哺乳期婦女。③合并其他惡性腫瘤。④合并有糖尿病、高血壓、心血管類疾病者。⑤合并明確的急慢性感染性疾病。⑥長期服用免疫抑制劑或糖皮質(zhì)激素者。選取同期門診體檢的健康女性80例為對照(對照組)，兩組患者年齡分布構(gòu)成比比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。本研究患者知情同意，經(jīng)過倫理委員會審核通過。

表1 兩組臨床資料分布及構(gòu)成比比較(例，%)

1.2 方法

1.2.1 HPV檢測方法 被檢查者取膀胱截石位，窺陰器下暴露宮頸口，將宮頸外口的分泌物用無菌棉球擦拭干凈，然后將廣東凱普生物科技有限公司生產(chǎn)的HPV取樣器插入宮頸內(nèi)口位置，以順時針方向旋轉(zhuǎn)3周，停留約10 s取出，將HPV取樣器刷桿凹痕位置折斷后分離頂端置入專用保存液中，在檢測離心后取得沉淀細胞液，細胞液中加入細胞裂解液提取DNA，采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)檢測HPV-DNA，細胞裂解液及37種HPV分型檢測試劑盒均購自廣東凱普生物科技有限公司，在濟南賽福生物科技有限公司生產(chǎn)的MB-530酶標(biāo)儀進行顯色，根據(jù)試劑盒說明書觀察薄膜上顯像為紫藍色圓點為陽性，多個紫藍色圓點診斷為多重感染，基因型分型則依據(jù)試劑盒條膜上的陽性點分布位點對照后進行確定。

1.2.2 外周血Th1/Th2細胞因子檢測方法 抽取被檢查者外周血5 ml，進行離心處理取得血清標(biāo)本，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測Th1/Th2細胞因子水平，Th1細胞因子主要檢測白細胞介素-2(IL-2)和干擾素-γ(IFN-γ)，Th2細胞因子主要檢測白細胞介素-4(IL-4)和白細胞介素-6(IL-6)，檢測試劑盒購自南京凱基生物科技有限公司，IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6抗體購自羅氏公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組HPV感染狀況比較

宮頸癌組70例檢出HPV，感染率為87.50%，對照組5例檢出HPV，感染率為6.25%，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=106.039，P=0.000)，宮頸癌組HPV分型60例高危型、10例低危型，分別占85.71%、14.29%，38例單一感染、32例多重感染，分別占54.29%、45.71%，對照組HPV分型0例高危型、5例低危型，分別占0.00%、100.00%，5例單一感染、0例多重感染，分別占100.00%、0.00%，兩組HPV分型及感染類型比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組HPV感染分型及感染類型分布及構(gòu)成比比較(例，%)

2.2 兩組外周血Th1/Th2細胞因子水平比較

宮頸癌組兩組外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組外周血Th1/Th2細胞因子水平比較

2.3 宮頸癌組HPV與無HPV感染患者外周血Th1/Th2細胞因子水平比較

HPV感染患者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明顯高于無HPV感染患者，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 宮頸癌組HPV與無HPV感染患者外周血Th1/Th2細胞因子水平比較

2.4 對照組HPV與無HPV感染者外周血Th1/Th2細胞因子水平比較

HPV感染者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明顯高于無HPV感染者，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表5。

表5 對照組HPV與無HPV感染者外周血Th1/Th2細胞因子水平比較

3 討論

宮頸癌的發(fā)病機制目前仍然不是完全很清楚，與宮頸癌有關(guān)的病毒感染因素中，高危型的HPV持續(xù)感染已經(jīng)被證實是宮頸癌的主要致病因素之一，HPV具有嗜鱗狀上皮性和免疫逃逸性，臨床研究顯示[3-5]，高危型的HPV感染可引起宮頸上皮細胞發(fā)生內(nèi)瘤變，進而發(fā)展為宮頸癌，宮頸癌患者高危型HPV感染率明顯高于正常人群，本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者HPV 感染率為87.50%，明顯高于正常人群的6.25%感染率，宮頸癌組高危型HPV占85.71%，而且多重感染率高達45.71%，對照組未檢出高危型，也無多重感染者，研究結(jié)果符合高危型HPV是引起宮頸癌的危險因素的研究結(jié)論，進一步證實了高危型HPV感染與宮頸癌之間關(guān)系密切。HPV在感染初期，可在基底上皮細胞內(nèi)進行病毒蛋白的復(fù)制，不會引起全身炎癥反應(yīng)，但是感染持續(xù)存在，可進一步改變細胞因子及趨化因子的表達，逃避機體免疫功能對其攻擊清除作用，病毒蛋白在基底細胞內(nèi)持續(xù)的復(fù)制及釋放病毒顆粒，逐步引起上皮細胞出現(xiàn)異常增殖及惡變，同時HPV還會改變部分抑癌基因功能，促進宮頸癌的發(fā)生。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展與人體免疫功能密切相關(guān)，B淋巴細胞和T淋巴細胞均參與了免疫反應(yīng)過程，其中T淋巴細胞起到主導(dǎo)作用，可對病毒及腫瘤細胞起到抑制和殺傷作用[6-7]。T淋巴細胞包括CD4和CD8兩個亞群，CD4根據(jù)表面標(biāo)記和功能又可分為若干亞群，共同起到免疫調(diào)節(jié)作用，在各亞群中CD4輔助性T細胞(Th)亞群最為重要，包括Th1和Th2、Th17等，其中Th1是參與腫瘤免疫的主要細胞之一，可通過其分泌淋巴細胞因子增強和擴大免疫應(yīng)答過程，同時誘導(dǎo)其他免疫細胞因子共同參與到抗腫瘤的過程之中[8-10]，Th1可分泌IFN-γ，誘導(dǎo)NK細胞抗腫瘤活性增強，分泌IL-2可誘導(dǎo)單核細胞、巨噬細胞、中性粒細胞等聚集及浸潤，加重細胞損傷，導(dǎo)致正常細胞發(fā)生異常增殖及癌??；Th2主要功能是抑制NK細胞的活化及減少腫瘤細胞抗原的表達等，進而抑制免疫系統(tǒng)反應(yīng)對腫瘤的抗腫瘤作用。大部分育齡期婦女一生之中都會感染過HPV，一般情況下通過自身免疫系統(tǒng)功能可清除病毒，只有少部分患者會出現(xiàn)持續(xù)的HPV感染，在清除HPV的過程中T淋巴細胞也是最重要的免疫細胞。臨床研究顯示[9]，宮頸癌患者臨床分期與Th1和Th2異常表達直接關(guān)系密切，如分期越晚，則IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6表達越高，而且趨勢越明顯。在相關(guān)研究中顯示[11-13]，Th1和Th2可反應(yīng)出機體抗腫瘤的免疫動態(tài)變化，宮頸癌患者可出現(xiàn)CD4細胞核CD4/CD8比值的降低，CD8則隨著分期可出現(xiàn)升高，提示宮頸癌患者細胞免疫功能低下，而且分期越晚免疫功能越低下。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平高于正常婦女，表明Th1/Th2平衡右移可引起T淋巴細胞免疫功能發(fā)生抑制，導(dǎo)致免疫監(jiān)察功能下降，是宮頸癌細胞出現(xiàn)免疫逃逸的主要原因。分析HPV感染與無HPV感染的宮頸癌患者外周血IFN-γ、IL-4、IL-6水平變化，結(jié)果顯示HPV感染患者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明顯高于無HPV感染患者，而且非宮頸癌的正常對照組中HPV感染者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平也高于無HPV感染者，提示Th2/Th2的異常變化與HPV感染有關(guān)?？紤]IFN-γ、IL-4、IL-6水平的異常表達，可引起宮頸正常的上皮細胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷及自身免疫性損傷。

綜上所述，宮頸癌患者存在HPV感染率增高及外周血Th1/Th2細胞因子紊亂，HPV感染可加重Th1/Th2細胞因子紊亂，HPV感染及外周血Th1/Th2細胞因子紊亂在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中可能起到了促進作用。