陜西核桃黑斑病病原菌鑒定及藥劑防治研究

瞿 佳，門 欣，孫曉宇，趙玲俠，寧碩瀛，陳 銳

(1.陜西省微生物研究所，西安 710043；2.陜西省動(dòng)物研究所，西安 710032)

核桃是胡桃科(Juglandaceae)，核桃屬(Juglans)植物，經(jīng)濟(jì)價(jià)值顯著，是中國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)樹種[1]。陜西是中國(guó)核桃的主要產(chǎn)地之一，目前全省核桃面積、產(chǎn)量和產(chǎn)值均列全國(guó)第二位[2]。近年來(lái)，受栽培面積過(guò)大、管理粗放、品種混雜等因素影響，核桃病害頻發(fā)，嚴(yán)重威脅核桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[3]。

核桃黑斑病，是一種嚴(yán)重的細(xì)菌性病害，傳播能力強(qiáng)，危害程度高，發(fā)生危害時(shí)可造成核桃葉片、嫩梢、枝條、果實(shí)等出現(xiàn)黑斑，隨后腐爛、壞死、早落，嚴(yán)重影響核桃的產(chǎn)量和品質(zhì)[4-5]。長(zhǎng)期以來(lái)，普遍認(rèn)為核桃黑斑病是由樹生黃單胞菌核桃致病變種Xanthomonasarboricolapv.juglandis引起[6-7]。自Frutos[8]首次發(fā)現(xiàn)野油菜黃單胞菌Xanthomonascampestris可引起核桃黑斑病以來(lái)，有學(xué)者相繼在北京、隴南地區(qū)的核桃黑斑病病葉、病果上分離獲得野油菜黃單胞菌X.campestris[9-10]。此外，還有研究認(rèn)為成團(tuán)泛菌Pantoeaagglomerans也是引起核桃黑斑病的病原菌[11-13]。長(zhǎng)期以來(lái)，由于陜西省核桃黑斑病危害區(qū)域廣、病情重、發(fā)生頻繁，且缺乏對(duì)致病菌類型的系統(tǒng)研究，導(dǎo)致防治工作中存在病情診斷延誤、濫用藥劑、防效不佳等問(wèn)題，使其成為限制陜西核桃產(chǎn)業(yè)化發(fā)展和提質(zhì)增效的主要因素之一[2,14]。

鑒于陜西核桃黑斑病危害嚴(yán)重，致病菌種類多樣，造成田間防治困難。因此，本研究對(duì)陜西核桃黑斑病的病原菌進(jìn)行分離鑒定，通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定和田間防效試驗(yàn)，以期闡明陜西核桃黑斑病的致病菌種類，篩選獲得核桃黑斑病的高效防治藥劑，為科學(xué)有效控制陜西核桃黑斑病的危害提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試材料 供試樣品：于2018年4月至2019年10月，自陜西渭南、安康等區(qū)縣核桃種植區(qū)采集表現(xiàn)典型黑斑病病斑的當(dāng)年生核桃病葉和病果樣品各15份。采后單獨(dú)裝入無(wú)菌樣品袋內(nèi)，4 ℃保存，備用。

1.1.2 試劑與主要儀器 供試培養(yǎng)基及試劑，篩選用培養(yǎng)基為L(zhǎng)B培養(yǎng)基：蛋白胨 10 g，NaCl 10 g，酵母提取物 5 g，ddH2O 1 000 mL，pH 7.0～7.2，若制備固體培養(yǎng)基需加入18 g/L瓊脂。試驗(yàn)所用試劑包括TaqDNA聚合酶、dNTPs、2×ExTaqPremix、DNA Marker，細(xì)菌基因組DNA小量純化試劑盒、DNA凝膠回收試劑盒，均購(gòu)于Takara(日本)大連寶生物工程有限公司；細(xì)菌16S rDNA通用引物購(gòu)于上海生工生物工程股份有限公司。

室內(nèi)測(cè)定供試藥劑：99%中生菌素原藥、71.5%春雷霉素原藥購(gòu)于義務(wù)盛隆生物科技有限公司；80%代森錳鋅原藥、98%溴菌腈原藥、90%乙蒜素原藥購(gòu)于湖北貓爾沃生物醫(yī)藥有限公司；99%腈菌唑原藥、99%四霉素原藥購(gòu)于武漢榮燦生物科技有限公司；97%甲基托布津原藥購(gòu)于湖北帝柏化工有限公司；96%氟吡菌酰胺原藥、98%氟啶胺原藥、98%嘧菌酯原藥、98%琥膠肥酸銅原藥、99%吡唑醚菌酯原藥、98%多菌靈原藥、98%百菌清原藥、98%啶酰菌胺原藥購(gòu)于深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司；98%噻霉酮原藥、98%乙酸銅原藥、98%二氰蒽醌原藥、98%噻唑鋅原藥、99%戊唑醇原藥由陜西省農(nóng)藥管理鑒定所提供。

田間試驗(yàn)供試藥劑：2%春雷霉素水劑購(gòu)于日本北興化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社；12%中生菌素可濕性粉劑購(gòu)于福建凱立生物制品有限公司；1.5%噻霉酮水劑購(gòu)于陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司；20%乙酸銅可濕性粉劑購(gòu)于齊齊哈爾四有化工有限公司；22.7%二氰蒽醌懸浮劑購(gòu)于江西禾益化工股份有限公司；30% 琥膠肥酸銅可濕性粉劑購(gòu)于齊齊哈爾四有化工有限公司；20%噻唑鋅懸浮劑購(gòu)于浙江新農(nóng)化工股份有限公司。

主要儀器包括：隔水式培養(yǎng)箱(GH500，北京科偉永興儀器有限公司)，搖瓶培養(yǎng)箱(TS-2102，上海天呈實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司)，立式壓力蒸汽滅菌鍋(LDZX-50KBS，上海申安醫(yī)療器械廠)，高速冷凍離心機(jī)(GL-20G-H，上海安亭科學(xué)儀器廠)，Biolog自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)(Gen III Microstation，BIOTEK，美國(guó))、基因擴(kuò)增儀(TProfessional Standard Gradient 96，BIOMETRA，德國(guó))，紫外可見分光光度計(jì)(722型，上海菁華科技儀器有限公司)。

1.2 方 法

1.2.1 病原菌分離、保存及致病性測(cè)定 參照《植病研究方法》中組織分離法分離病原菌[15]。選取典型癥狀的病葉，用體積分?jǐn)?shù)75%酒精進(jìn)行表面消毒后置于滅菌研缽內(nèi)搗碎，加入無(wú)菌生理鹽水混勻、稀釋，在LB平板上涂布，于28 ℃下倒置培養(yǎng)48 h。待長(zhǎng)出單菌落后，挑取不同形態(tài)單菌落，劃線純化，并將株系接種于斜面培養(yǎng)基上，4 ℃保存，備用。病原菌致病性測(cè)定采用針刺法接種：于28 ℃下活化培養(yǎng)病原菌，挑取單菌落在液體LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)，配制108cfu/mL菌懸液。利用醫(yī)用無(wú)菌注射器吸取少量菌液直接穿刺健康核桃葉片，迅速置于無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，以無(wú)菌生理鹽水為對(duì)照，每處理重復(fù)5次，每日記錄發(fā)病情況。

1.2.2 病原菌的鑒定 將株系在固體培養(yǎng)基平板上劃線純化，30 ℃培養(yǎng)4 d，觀察菌落形態(tài)，測(cè)量菌落大小(重復(fù)30次)，并參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[16]與《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[17]進(jìn)行革蘭氏染色、氧化酶及接觸酶試驗(yàn)，確定株系種類。通過(guò)Biolog自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)檢測(cè)株系對(duì)醇、糖、酸等71種碳源(無(wú)菌水用作空白對(duì)照)的利用情況和對(duì)23 種化學(xué)敏感物質(zhì)的反應(yīng)，分析鑒定結(jié)果。

16S rDNA序列分析：采用細(xì)菌基因組DNA小量純化試劑盒提取菌株基因組DNA。16S rDNA擴(kuò)增引物(正向：5′-AGAGTTTGATCCTG-GCTCA-3′；反向：5′-GGTTACCTTGTTAC-GACTT-3′)。25 μL反應(yīng)體系為：DNA模板3.0 μL(10 ng/μL)，2×ExTaqPremix 12.5 μL，引物各1 μL(10 μmol/L)，ddH2O 7.5 μL。擴(kuò)增程序：94 ℃5 min；94 ℃1 min，55 ℃45 s，72 ℃ 2 min，30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物由上海生工生物有限公司測(cè)序。利用Blast(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)與GenBank中序列進(jìn)行相似性比對(duì)，使用MEGA 5.1軟件(Arizona State University，美國(guó))Neighborhood-joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹[18]。

1.2.3 藥劑初篩及室內(nèi)毒力測(cè)定 供試藥劑初篩：將分離獲得的兩種病原菌接種于LB液體培養(yǎng)基中，28 ℃、150 r/min 件下培養(yǎng)24 h。通過(guò)抑菌圈法進(jìn)行藥劑初篩：將供試藥劑用丙酮溶解，并用含體積分?jǐn)?shù) 0.1% 吐溫 80 溶液的無(wú)菌水稀釋成 100 mg/L的藥液。將滅菌后的LB培養(yǎng)基冷卻至50 ℃，加入體積分?jǐn)?shù) 2% 的菌液混勻后倒入平板。待培養(yǎng)基凝固后均勻打 3 個(gè)孔(直徑 6.0 mm)，每孔均加入60 μL藥液，重復(fù) 3 次。28 ℃下培養(yǎng) 72 h 后觀察是否有明顯的抑菌圈[19]。

藥劑抑菌率測(cè)定：選取初篩結(jié)果中對(duì)兩種病原菌均有抑制效果的藥劑用丙酮溶解，加入體積分?jǐn)?shù)1% 吐溫 80 制成1%乳油，并用無(wú)菌水分別稀釋成質(zhì)量濃度梯度藥劑。將培養(yǎng)24 h 的菌液1 mL接種于含不同藥劑不同質(zhì)量濃度的100 mL LB液體培養(yǎng)基中，于28 ℃、150 r/min條件下培養(yǎng)3 d，無(wú)菌水為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。從各個(gè)三角瓶中吸取2 mL菌懸液置于無(wú)菌離心管，并加入2 mL無(wú)菌水振蕩混勻，液體LB培養(yǎng)基加無(wú)菌水調(diào)零作為參比，測(cè)定波長(zhǎng)600 nm 下各藥劑不同質(zhì)量濃度梯度處理組的OD值，計(jì)算不同藥劑質(zhì)量濃度的細(xì)菌生長(zhǎng)抑制率[20]。抑制率:Y=(OD1-OD2)/OD1；其中OD1代表無(wú)菌水對(duì)照的OD值，OD2代表藥劑處理的OD值，并依據(jù)抑制率計(jì)算藥劑毒力回歸方程、EC50值。

1.2.4 田間防效試驗(yàn) 試驗(yàn)于安康市石泉縣饒豐鎮(zhèn)(N34°7′,E108°10′)核桃黑斑病連續(xù)多年發(fā)病的核桃園進(jìn)行，該園核桃病葉、病果中均檢出 2 種病原菌，栽培品種為‘香玲’和‘陜核5號(hào)’。2019年5月-8月，從核桃黑斑病發(fā)病初期開始，采用2%春雷霉素水劑 1 000 倍液，12%中生菌素可濕性粉劑 2 400 倍液，1.5%噻霉酮水劑 3 000倍液，20%乙酸銅可濕性粉劑 2 500 倍液，22.7%二氰蒽醌懸浮劑 1 000 倍液，30%琥膠肥酸銅可濕性粉劑 850 倍液，20%噻唑鋅懸浮劑 1 000 倍液，通過(guò)噴霧防治，設(shè)置空白對(duì)照。田間小區(qū)隨機(jī)分布排列，每個(gè)處理組 10 株，各處理組設(shè)置 3 次重復(fù)。噴施藥劑時(shí)，均勻噴施在病葉及病果表面，施藥量標(biāo)準(zhǔn)為葉片正反面及果實(shí)均勻著藥，稍有藥液下滴。噴藥結(jié)束后，懸掛標(biāo)識(shí)牌并記錄。每次噴藥間隔 15 d，期間不進(jìn)行其他農(nóng)事處理。

田間調(diào)查時(shí)間為施藥后 10 d，調(diào)查葉片和果實(shí)黑斑病發(fā)生及藥劑防治效果。具體調(diào)查方法如下：每個(gè)處理組隨機(jī)抽樣調(diào)查 3 株。調(diào)查時(shí)每株選取 8 個(gè)樣點(diǎn)，分別為植株?yáng)|、南、西、北方向的中層枝和下層枝，各樣點(diǎn)隨機(jī)調(diào)查 5 片樹葉或果實(shí)[19,21]。依據(jù)黑斑面積設(shè)定病級(jí)(表1)，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)、計(jì)算病情指數(shù)及藥劑防治效果，公式如下：

表1 核桃黑斑病病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Scale for disease severity of walnut blight

病情指數(shù)=∑[各級(jí)病葉(果)數(shù)量×代表值]/[調(diào)查總?cè)~(果)數(shù)×5]×100

防治效果=(對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對(duì)照病情指數(shù)×100%

1.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析 采用Clustal X 1.83(University College Dublin，愛爾蘭)和MEGA 5.1(Arizona State University，美國(guó))軟件進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析，構(gòu)建進(jìn)化樹；采用SPSS 22(IBM，美國(guó))計(jì)算毒力回歸式、EC50值及田間防效。田間防治試驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò)單因素ANOVA分析，其后檢驗(yàn)通過(guò)Duncan’s新復(fù)極差法分析差異顯著性(P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌分離、純化及其致病性檢測(cè)

經(jīng)組織分離法分離，培養(yǎng)48 h，挑取單菌落劃線純化后，在LB培養(yǎng)基上出現(xiàn)兩種黃色菌落，分別標(biāo)記為HTX和HTP。株系HTX菌落圓形，呈淡黃色，表面光滑，凸起，培養(yǎng)4 d后呈奶油狀，黃色加深(圖1-A)；株系HTP菌落圓形，呈蠟黃色，表面光滑，凸起(圖1-C)。通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，HTX單個(gè)菌體呈短桿狀，菌體大小為(0.5～1.2) μm×(1.0～2.4) μm(圖 1-B)；HTP單個(gè)菌體呈直桿狀，菌體大小為(0.5～ 2.0) μm×(0.6～3.0) μm(圖 1-D)。

將純化菌落活化培養(yǎng)后制成108cfu/mL菌懸液，并于核桃幼嫩葉片上進(jìn)行回接試驗(yàn)。7 d后接種的核桃葉片上出現(xiàn)黑色、多角形病斑，而對(duì)照組葉片僅有針刺孔(圖2)，結(jié)果表明分離獲得的病原菌株系具有致病性，能夠引起葉片產(chǎn)生與自然狀態(tài)下類似的核桃黑斑病典型癥狀。依據(jù)柯赫氏法則，采集接種后病葉重新對(duì)病原菌進(jìn)行分離、鑒定。結(jié)果表明，后分離獲得病原菌的菌落形態(tài)特征與接種株系一致。以上2種病原菌株系HTX和HTP均可通過(guò)傷口侵染葉片，引起核桃黑斑病發(fā)生。

2.2 株系HTX及HTP的生理生化特征

常規(guī)生理生化特征分析表明，株系HTX為革蘭氏陰性(G-)細(xì)菌，單端極生鞭毛，氧化酶反應(yīng)陰性，接觸酶反應(yīng)陽(yáng)性；株系HTP為革蘭氏陰性(G-)細(xì)菌，周生鞭毛，氧化酶反應(yīng)陰性，接觸酶反應(yīng)陽(yáng)性。Biolog分析表明：菌株HTX可有效利用19種碳源，對(duì)林肯霉素、四唑紫、四唑藍(lán)不敏感，可在1%NaCl溶液、pH=6的條件下生長(zhǎng)；HTP可有效利用27種碳源，對(duì)醋竹桃霉素、利福霉素SV、萬(wàn)古霉素等不敏感，可在1%乳酸鈉溶液、1%NaCl溶液、pH=6條件下生長(zhǎng)；株系HTX與野油菜黃單胞菌油菜致病變種X.campestrispv.campestris的相似性為0.655；株系HTP與成團(tuán)泛菌P.agglomerans的相似性為0.702(表2)。

表2 株系HTX與HTP對(duì)Biolog板上各底物的利用能力Table 2 Utilization of substrates on Biolog plate by strains HTX and HTP

2.3 病原菌的分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析

株系HTX和HTP的16S rDNA序列擴(kuò)增長(zhǎng)度分別為1 444 bp和1 440 bp，通過(guò)NCBI的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行在線序列分析和同源性比對(duì)，結(jié)果表明，株系HTX序列與野油菜黃單胞菌野油菜致病變種X.campestrispv.campestris的序列同源性為99.93%；株系HTP序列與成團(tuán)泛菌P.agglomerans的序列同源性為98.88%(圖3)。序列已提交NCBI的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)，登錄號(hào)分別為MT626033和MT635441。

2.4 供試藥劑對(duì)病原菌的室內(nèi)毒力

抑菌圈法試驗(yàn)表明，供試藥劑中生菌素、春雷霉素、噻霉酮、乙酸銅、琥膠肥酸銅、二氰蒽醌、噻唑鋅在質(zhì)量濃度為100 mg/L條件下對(duì)株系HTX和HTP均有明顯抑制作用，可作為田間防治候選藥劑；嘧菌酯、戊唑醇、溴菌腈、腈菌唑、氟吡菌酰胺等7種藥劑對(duì)2種病原菌均無(wú)明顯抑制作用；其余藥劑中除氟啶胺對(duì)成團(tuán)泛菌HTP有明顯抑制作用外，其余5種藥劑則對(duì)HTX有明顯抑制作用(表3)。

表3 不同藥劑對(duì)2種病原菌的抑制作用Table 3 Antimicrobial activity of different chemicalsto strains HTX and HTP

在抑菌圈法初篩的基礎(chǔ)上，通過(guò)紫外分光光度法測(cè)定抑制藥劑對(duì)株系HTX和HTP的室內(nèi)毒力。結(jié)果表明，7種藥劑對(duì)黃單胞桿菌HTX的抑制作用依次為乙酸銅>春雷霉素>琥膠肥酸銅>噻霉酮>中生菌素>二氰蒽醌>噻唑鋅(表4、表5)；對(duì)成團(tuán)泛菌HTP的抑制作用依次為春雷霉素>中生菌素>噻霉酮>乙酸銅>噻唑鋅>二氰蒽醌>琥膠肥酸銅(表4、表5)。

表4 不同藥劑對(duì)株系HTX的室內(nèi)毒力測(cè)定Table 4 Toxicity test of different chemicals against strain HTX

表5 不同藥劑對(duì)株系HTP的室內(nèi)毒力測(cè)定Table 5 Toxicity test of different chemicals against strain HTP

2.5 藥劑田間防效

田間防效結(jié)果表明，施藥后各處理組核桃黑斑病的病情指數(shù)與對(duì)照組相比均有明顯下降，7種藥劑對(duì)核桃葉片和果實(shí)的黑斑病均具有一定防治效果，防效隨施藥次數(shù)逐漸提高。

供試藥劑對(duì)核桃葉片黑斑病防治效果較好的為中生菌素和琥膠肥酸銅，第 3 次施藥10 d后防效分別為73.71%和73.05%，隨后依次為春雷霉素、噻唑鋅和噻霉酮，但無(wú)顯著差異；而乙酸銅和二氰蒽醌防效較差，第 3 次藥后10 d 的防效分別為 42.62%和24.14%(表6)。

表6 供試藥劑對(duì)葉片黑斑病的田間防效Table 6 Control effect of tested chemicals to walnut blight on leaves

與葉片相比，供試藥劑對(duì)核桃果實(shí)黑斑病的防治效果較好的為中生菌素，第 3 次施藥10 d后防效分別為70.88%和68.72%，其后依次為噻唑鋅、琥膠肥酸銅、噻霉酮和春雷霉素，但無(wú)顯著差異；二氰蒽醌和乙酸銅防效較差，第 3 次藥后 10 d的防效分別為41.7%和25.24%(表7)。

表7 供試藥劑對(duì)果實(shí)黑斑病的田間防效Table 7 Control effect of tested chemicals to walnut blight on fruits

3 討論與結(jié)論

通過(guò)對(duì)陜西核桃主產(chǎn)區(qū)的核桃黑斑病病原菌進(jìn)行分離、鑒定及致病性檢測(cè)，結(jié)果表明：引起陜西核桃黑斑病的病原菌為野油菜黃單胞菌野油菜致病變種X.campestrispv.campestris和成團(tuán)泛菌P.agglomerans，與甘肅隴南地區(qū)該病害的病原菌一致[10,13]。而部分學(xué)者在北京、四川、山東等地發(fā)現(xiàn)的核桃黑斑病致病菌為單一菌源[9-12]。此外，有學(xué)者將云南核桃黑斑病病原菌鑒定為樹生黃單胞菌核桃致病變種(X.arboricolapv.juglandis)和成團(tuán)泛菌(P.agglomerans)[22]，與本文結(jié)果存在差異。

前人研究結(jié)果表明，野油菜黃單胞菌野油菜致病變種X.campestrispv.campestris可通過(guò)分泌胞外多糖溶液引起核桃典型黑斑癥狀[23]，還可引起芥苔屬植物的黑腐病[24]。成團(tuán)泛菌P.agglomerans可引起香蕉鞘腐病[25]、玉米細(xì)菌干莖腐病[26]、桃李細(xì)菌性穿孔病[27]、火龍果腐爛病[28]等多種細(xì)菌病害。盡管成團(tuán)泛菌可通過(guò)水平基因轉(zhuǎn)移獲取其他病原菌的一種包含致病島的質(zhì)粒，從而演變?yōu)榧闹鲗；虏【鶾29]，但其引起核桃黑斑病的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。本研究結(jié)果表明，陜西核桃黑斑病是由這2種病原菌復(fù)合侵染引起，推測(cè)這可能是造成陜西不同地區(qū)核桃黑斑病發(fā)病規(guī)律存在差異的根本原因。

陜西省核桃栽培面積大、品種多樣化程度高，存在藥劑濫用、施藥不規(guī)范等問(wèn)題，給核桃黑斑病的防治帶來(lái)一定難度[2,14]。本研究選取21種供試藥劑，通過(guò)室內(nèi)與田間試驗(yàn)，獲得對(duì)野油菜黃單胞菌野油菜致病變種株系HTX和成團(tuán)泛菌株系HTP均有良好防效的藥劑5種，分別為中生菌素、春雷霉素、噻唑鋅、琥膠肥酸銅和噻霉酮。室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，這5種藥劑對(duì)野油菜黃單胞菌野油菜致病變種株系HTX的EC50值為 12.08～104.47；對(duì)成團(tuán)泛菌株系HTP的EC50值為23.08～346.841；田間防治試驗(yàn)結(jié)果表明，第 3 次施藥后10 d對(duì)葉片、果實(shí)核桃黑斑病的防效均達(dá)到60%以上。在本研究藥劑初篩中發(fā)現(xiàn)，由于核桃黑斑病屬于細(xì)菌病害，春雷霉素、含銅鋅制劑等防效較好。而適用于防治真菌病害的藥劑如嘧啶酯、吡唑醚菌酯、戊唑醇等，在防治核桃黑斑病時(shí)防治效果不佳，與前人研究結(jié)果類似[19,21,30]。

目前，市場(chǎng)中用于防治核桃黑斑病的藥劑種類繁多，給種植戶的選擇帶來(lái)一定困難。本研究結(jié)果表明，中生菌素、春雷霉素等5種藥劑對(duì)核桃黑斑病防治效果較好，可作為核桃黑斑病的田間防治藥劑。受氣候影響，核桃黑斑病在陜西危害期較長(zhǎng)，除春季普遍發(fā)生外，夏秋季條件適宜時(shí)仍可造成核桃葉片、幼芽等組織發(fā)生危害[19]。田間防治中還應(yīng)避免因單一、重復(fù)使用藥劑而導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性，通過(guò)科學(xué)交替使用藥劑或復(fù)配，減緩抗藥性的產(chǎn)生[31-32]；應(yīng)注重園區(qū)內(nèi)栽種時(shí)保持合理行株距，確保通風(fēng)透光；加強(qiáng)園區(qū)害蟲的防治，減少傷口，降低核桃黑斑病病原菌的侵染；結(jié)合如修剪病枝、清除病果等各類農(nóng)事操作，達(dá)到有效控制核桃黑斑病危害的目的[2-3,33]。

本研究明確了陜西省核桃黑斑病由2種致病菌侵染引起，篩選獲得了5種高效防治藥劑，為陜西核桃黑斑病的防治提供了理論依據(jù)。但鑒于核桃黑斑病產(chǎn)生抗藥性等因素，今后應(yīng)進(jìn)一步開發(fā)具有明顯抑制作用的靶向生防菌劑，為有效控制核桃黑斑病提供新思路。