腹主動(dòng)脈瘤病人長(zhǎng)鏈非編碼RNA?；撬嵘险{(diào)基因1表達(dá)水平及意義

徐永平，陳偉彬，陳俊卯，王長(zhǎng)友，楊德久

華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院，1.醫(yī)學(xué)影像科，2.普通外科，3.介入醫(yī)學(xué)科，河北 唐山 063000

腹主動(dòng)脈瘤是指腹主動(dòng)脈某段發(fā)生異常擴(kuò)張或膨脹至正常直徑的1.5倍及以上的一種血管疾病，易發(fā)生管壁破裂，導(dǎo)致大出血，甚至死亡[1-3]。據(jù)調(diào)查顯示，我國(guó)腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病率為2.0%～8.9%，且呈逐年升高趨勢(shì)[4]。腹主動(dòng)脈瘤病人早期常見癥狀主要為腹痛，臨床上極易誤診導(dǎo)致治療延遲，增加腹主動(dòng)脈瘤破裂風(fēng)險(xiǎn)[5]。腹主動(dòng)脈瘤一旦破裂，死亡風(fēng)險(xiǎn)較高，死亡率為80%～90%[6]。因此，及早診斷并治療可有效降低腹主動(dòng)脈瘤死亡率。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一種由200及以上核苷酸組成的長(zhǎng)鏈RNA，不具備編碼蛋白質(zhì)功能，但可參與細(xì)胞的增殖、凋亡、分化等過程[7]。目前，已有多數(shù)lncRNA被報(bào)道與腹主動(dòng)脈瘤有關(guān)，如lncRNA H19[8]、lncRNA SOX2OT[9]及l(fā)ncRNA LBX2-AS1[10]等。LncRNA?；撬嵘险{(diào)基因1(taurine up-regulated gene 1，TUG1)作為lncRNA家族中的一員，已被多數(shù)研究報(bào)道可調(diào)控微RNA-29b的表達(dá)[11-12]。微RNA-29b在腹主動(dòng)脈瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，干預(yù)其表達(dá)可抑制腹主動(dòng)脈瘤進(jìn)展[13-14]。本研究推測(cè)lncRNA TUG1通過調(diào)控微RNA-29b表達(dá)參與腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。目前，鮮有關(guān)于lncRNA TUG1與腹主動(dòng)脈瘤相關(guān)性的報(bào)道，因此，本研究通過分析腹主動(dòng)脈瘤病人lncRNA TUG1的表達(dá)水平及其對(duì)腹主動(dòng)脈瘤診斷的價(jià)值，以期為腹主動(dòng)脈瘤的早期診斷及治療靶點(diǎn)提供參考。

資料與方法

一、一般資料

前瞻性選取2017年3月至2020年4月在華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院就診的126例腹主動(dòng)脈瘤病人(腹主動(dòng)脈瘤組)作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)影像學(xué)檢查診斷為腹主動(dòng)脈瘤；(2)簽署了知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并惡性腫瘤；(2)有肝纖維化、骨髓增生異常綜合征史；(3)入院前接受過介入或手術(shù)治療；(4)嚴(yán)重炎癥性疾病及血液系統(tǒng)疾?。?5)假性動(dòng)脈瘤、囊性動(dòng)脈瘤或感染性動(dòng)脈瘤。選取同期參加健康體檢的100例受試者作為對(duì)照組。腹主動(dòng)脈瘤組男性81例，女性45例，年齡(66.98±8.24)歲(48～82歲)；對(duì)照組男性69例，女性31例，年齡(67.41±7.11)歲(49～83歲)。兩組病人其他臨床資料詳見表1。本研究經(jīng)華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

二、方法

1.臨床信息收集 收集所有受試者年齡、性別、吸煙史、疾病史(高血壓、糖尿病、冠心病、缺血性腦卒中、肝纖維化、惡性腫瘤及骨髓增生異常綜合征等)、腹主動(dòng)脈瘤直徑等信息。用CT檢查所有腹主動(dòng)脈瘤病人瘤體最大直徑。

2.lncRNA TUG1表達(dá)水平檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)lncRNA TUG1表達(dá)水平。抽取所有受試者空腹肘部靜脈血10 mL，室溫下3 500 r/min離心10 min(離心半徑10 cm)，提取上層清液。用TRIzol試劑提取總RNA，然后用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其純度。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后用PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件為95 ℃ 5 min,95 ℃ 15 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,35個(gè)循環(huán)。lncRNA TUG1序列，上游引物：5′-CTGAAGAAAGGCAACATC-3′，下游引物：5′-GTAGGCTACTACAGGATTTG-3′；內(nèi)參GAPDH序列，上游引物：5′-CAAAGGTGGATCAGATTCAAG-3′，下游引物：5′-GGTGAGCATTATCACCCAGAA-3′。用2-ΔΔCt表示lncRNA TUG1的相對(duì)表達(dá)水平。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、兩組基線資料比較

兩組在年齡、性別、吸煙史、糖尿病史、高血壓史、冠心病史和缺血性腦卒中史方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，有可比性，見表1。

表1 兩組基線資料比較

二、兩組lncRNA TUG1表達(dá)水平比較

腹主動(dòng)脈瘤組lncRNA TUG1表達(dá)水平為0.48±0.14，高于對(duì)照組的(0.29±0.08)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=13.650，P<0.001)。

三、lncRNA TUG1診斷腹主動(dòng)脈瘤的效能分析

lncRNA TUG1診斷腹主動(dòng)脈瘤的ROC曲線下面積、最大約登指數(shù)、最佳截?cái)帱c(diǎn)、敏感度和特異度分別為0.899[95%CI(0.852,0.935)]、0.670、0.36、80.95%和86.00%，見圖1。

四、lncRNA TUG1表達(dá)水平與腹主動(dòng)脈瘤臨床參數(shù)的關(guān)系

腹主動(dòng)脈瘤病人lncRNA TUG1表達(dá)水平與年齡、性別、吸煙史、糖尿病史、高血壓史、冠心病史和缺血性腦卒中史均無關(guān)(P>0.05)，而與瘤體直徑有關(guān)(P<0.05)。瘤體直徑>7 cm的病人lncRNA TUG1表達(dá)水平高于瘤體直徑<5 cm和瘤體直徑5～7 cm的病人，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

圖1 lncRNA TUG1診斷腹主動(dòng)脈瘤的受試者工作特征(ROC)曲線

表2 lncRNA TUG1表達(dá)水平與腹主動(dòng)脈瘤臨床參數(shù)的關(guān)系(±s)

五、lncRNA TUG1表達(dá)水平與腹主動(dòng)脈瘤直徑的關(guān)系

126例腹主動(dòng)脈瘤病人瘤體直徑為(5.87±1.71) cm。腹主動(dòng)脈瘤病人lncRNA TUG1的表達(dá)水平與瘤體直徑呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.218，P=0.014)，見圖2。

圖2 lncRNA TUG1表達(dá)水平與瘤體直徑的散點(diǎn)圖

討 論

腹主動(dòng)脈瘤破裂前病人并無不適癥狀，一旦破裂，死亡風(fēng)險(xiǎn)極高，即使接受急診修復(fù)手術(shù)治療，圍手術(shù)期死亡率也高達(dá)50%[15]。早期診斷并進(jìn)行治療是降低腹主動(dòng)脈瘤死亡率的有效方法之一。本研究推測(cè)lncRNA TUG1通過調(diào)控微RNA-29b表達(dá)參與腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，經(jīng)驗(yàn)證，結(jié)果顯示腹主動(dòng)脈瘤組lncRNA TUG1表達(dá)水平高于對(duì)照組，該結(jié)果表明lncRNA TUG1與腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病有關(guān)，其表達(dá)水平或可有助于腹主動(dòng)脈瘤診斷。

在腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病過程中，若用診斷效能較高的標(biāo)志物進(jìn)行預(yù)測(cè)監(jiān)控將對(duì)腹主動(dòng)脈瘤診療大有裨益。既往應(yīng)用于腹主動(dòng)脈瘤診斷的標(biāo)志物主要有Notch1、核轉(zhuǎn)錄因子-κB及腫瘤壞死因子前體轉(zhuǎn)換酶等。時(shí)明濤[16]研究結(jié)果顯示Notch1診斷腹主動(dòng)脈瘤的ROC曲線下面積、敏感度和特異度分別為0.751、77.38%和80.00%；此外，該項(xiàng)研究結(jié)果還顯示核轉(zhuǎn)錄因子-κB診斷腹主動(dòng)脈瘤的ROC曲線下面積、敏感度和特異度分別為0.723、71.43%和76.00%；上述兩指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷腹主動(dòng)脈瘤的ROC曲線下面積、敏感度和特異度分別為0.786、69.05%和96.00%。無論Notch1、核轉(zhuǎn)錄因子-κB單獨(dú)診斷腹主動(dòng)脈瘤，亦或是二者聯(lián)合診斷腹主動(dòng)脈瘤，診斷效能均偏低，且敏感度或特異度也偏低，因此，對(duì)腹主動(dòng)脈瘤診斷價(jià)值有限。黃寶駿等[17]研究表明腹主動(dòng)脈瘤病人血漿Notch1和腫瘤壞死因子前體轉(zhuǎn)換酶水平高，且二者均與瘤體直徑有關(guān)，但該研究并未分析二者診斷腹主動(dòng)脈瘤的效能。此外，還有研究[18-22]指出s-彈性蛋白肽、肺炎衣原體和纖溶酶-抗纖溶酶復(fù)合物與腹主動(dòng)脈瘤有關(guān)，但鑒于樣本量偏小及研究方法學(xué)異質(zhì)性，欲將上述標(biāo)志物作為腹主動(dòng)脈瘤發(fā)展的標(biāo)志物仍需開展多中心、大樣本、前瞻性研究予以驗(yàn)證。本研究構(gòu)建了lncRNA TUG1診斷腹主動(dòng)脈瘤的ROC曲線，結(jié)果顯示其診斷腹主動(dòng)脈瘤的ROC曲線下面積、敏感度和特異度分別為0.899、80.95%和86.00%，該結(jié)果表明lncRNA TUG1診斷腹主動(dòng)脈瘤的效能較高，有助于腹主動(dòng)脈瘤的診斷。

為進(jìn)一步明確lncRNA TUG1與腹主動(dòng)脈瘤的關(guān)系，本研究分析了lncRNA TUG1表達(dá)水平與腹主動(dòng)脈瘤病人臨床參數(shù)的關(guān)系，結(jié)果顯示lncRNA TUG1表達(dá)水平與瘤體直徑有關(guān)，瘤體直徑>7 cm病人lncRNA TUG1表達(dá)水平高于瘤體直徑<5 cm和瘤體直徑5～7 cm的病人，該結(jié)果提示lncRNA TUG1參與了腹主動(dòng)脈瘤進(jìn)展。通過分析lncRNA TUG1與瘤體直徑的關(guān)系，結(jié)果顯示lncRNA TUG1表達(dá)水平與瘤體直徑呈正相關(guān)關(guān)系，該結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了lncRNA TUG1與腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病有關(guān)，推測(cè)其參與腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病機(jī)制是通過調(diào)控微RNA-29b表達(dá)參與腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病及進(jìn)展。關(guān)于lncRNA TUG1參與腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病及進(jìn)展的病理生理機(jī)制仍需開展基礎(chǔ)研究予以證實(shí)。

本研究尚存在一定不足，一是單中心研究、樣本量偏小，分析結(jié)果可能存在一定偏倚；二是僅檢測(cè)了腹主動(dòng)脈瘤病人治療前的lncRNA TUG1表達(dá)水平，并未觀察治療后lncRNA TUG1的表達(dá)水平動(dòng)態(tài)變化及其評(píng)價(jià)預(yù)后的價(jià)值；三是未開展基礎(chǔ)研究分析lncRNA TUG1對(duì)微RNA-29b及其他靶點(diǎn)的調(diào)控作用。下一步筆者將針對(duì)以上不足進(jìn)行補(bǔ)充，以彌補(bǔ)本研究不足。

綜上所述，腹主動(dòng)脈瘤病人lncRNA TUG1表達(dá)水平高于非腹主動(dòng)脈瘤受試者，且lncRNA TUG1表達(dá)水平與腹主動(dòng)脈瘤瘤體直徑呈正相關(guān)關(guān)系。檢測(cè)lncRNA TUG1表達(dá)水平有助于腹主動(dòng)脈瘤診斷，降低死亡率。