新型冠狀病毒及其臨床檢測方法分析

張玉基

摘要：本文中簡單分析了新型冠狀病毒疫情在我國的特點(diǎn)，并探討了相應(yīng)的臨床檢測方式和病毒防控方式，旨在為我國新冠病毒控制提供參考。

關(guān)鍵詞：新型冠狀病毒;臨床監(jiān)測;疫情防控;病情管理

新冠疫情在2019年年底在我國武漢爆發(fā)，并且快速在全球范圍內(nèi)流行，直至2021年這一疾病已經(jīng)擴(kuò)散至全球。新型冠狀病毒主要通過呼吸道飛沫以及密切接觸進(jìn)行傳播，這種疾病具有極強(qiáng)的傳染性，尤其是部分患者不會出現(xiàn)病情癥狀，但依舊具有較強(qiáng)的感染力，這也直接導(dǎo)致新冠疫情的控制難度明顯增加。新冠肺炎的確診以及檢測對于疫情防控的開展來說極為重要，快速檢測患者的疾病，并及早對患者進(jìn)行隔離和治療，是疫情防控的關(guān)鍵點(diǎn)，新冠病毒的監(jiān)測以及核酸以及特異性抗體監(jiān)測涉及到的內(nèi)容較為復(fù)雜，需要針對新型冠狀病毒的病原學(xué)特點(diǎn)和我國目前所具有的檢測方式進(jìn)展進(jìn)行綜合評估，只有這樣才能夠保障我國現(xiàn)代化的新型冠狀病毒的監(jiān)測工作順利開展。

一、新型冠狀病毒的病原學(xué)特點(diǎn)

在2019年12月，一種由新型冠狀病毒所引發(fā)的肺炎，在武漢爆發(fā)并且正逢我國的春節(jié)，這一集并快速在我國形成傳播趨勢，并且新冠病毒具有極強(qiáng)的人傳人能力，疾病已經(jīng)被作為急性呼吸道傳染疾病并納入我國的傳染病防治法中，屬于乙類傳染病，并且在進(jìn)行管控時選擇甲類傳染病的預(yù)防管控方案。新冠病毒不僅對于我國的醫(yī)療環(huán)境產(chǎn)生了極大的威脅，同時也在一定程度上波及了全球的公共衛(wèi)生安全，所以快速準(zhǔn)確的對患者的疾病進(jìn)行判斷并開展有效的防控工作，是現(xiàn)代相關(guān)管理人員需要重視的一項(xiàng)問題。新型冠狀病毒是發(fā)現(xiàn)的第7種β屬冠狀病毒，對其進(jìn)行分析可以發(fā)現(xiàn)其具有包膜，并且顆粒呈現(xiàn)圓形或橢圓形，直徑大約為60～140nm。新型冠狀病毒的遺傳物質(zhì)為單股正鏈RNA，而其中的基因組大小大約為30KB，是目前已知基因組最大的一種RNA病毒。對其生物學(xué)行為進(jìn)行研究可以發(fā)現(xiàn)這一疾病的轉(zhuǎn)錄模式與2012年出現(xiàn)的SARS-CoV具有較高的相似性。新型冠狀病毒中包含14個ORF，這一物質(zhì)對其中的27種蛋白質(zhì)進(jìn)行編譯。在近年來的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)這種疾病與蝙蝠冠狀病毒的同源性可以達(dá)到85%以上，而新型冠狀病毒在體外分離的環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，在人呼吸道上皮細(xì)胞中可以在培養(yǎng)96小時后被發(fā)現(xiàn)，而在分離培養(yǎng)皿中大約發(fā)現(xiàn)時間為6天。新型冠狀病毒對于環(huán)境中的溫度以及紫外線有較高的敏感度，在56攝氏度的環(huán)境下對新型冠狀病毒進(jìn)行處理，大約30分鐘即可被完全滅活，同時乙醚和75%乙醇以及含氯消毒劑均能夠有效滅活新型冠狀病毒。在相關(guān)研究中證實(shí)， ACE2作為受體蛋白與病毒一起被內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞，這也直接導(dǎo)致細(xì)胞表面的ACE2蛋白酶出現(xiàn)明顯減少，這也在一定程度上導(dǎo)致患者的血管緊張素以及腎素系統(tǒng)完全失衡。患者本身存在類似于糖尿病、高血壓的基礎(chǔ)疾病患者在發(fā)生感染后病情則更加嚴(yán)重。針對新冠肺炎患者進(jìn)行研究，可以發(fā)現(xiàn)患者的下呼吸道病毒含量，相較于上呼吸道來說明顯更高。而在對患者進(jìn)行病情檢驗(yàn)時，患者的呼吸道病毒檢驗(yàn)準(zhǔn)確度相較于血液檢測來說明顯更高，所以在進(jìn)行患者的病情取樣時，一般情況下建議選擇下呼吸道樣本，肺泡灌洗液和支氣管灌洗液，其次可選擇患者的呼吸道深部深部痰液以及患者口咽部位的粘液。在對患者進(jìn)行診斷前取樣，應(yīng)當(dāng)根據(jù)患者的接受度以及診斷需求來進(jìn)行調(diào)整，所以目前我國在對普通民眾進(jìn)行檢測時，選擇的是鼻咽拭子，而在對重癥患者進(jìn)行診斷時，則主要采用下呼吸道標(biāo)本來進(jìn)行檢驗(yàn)，以保障患者的診斷準(zhǔn)確度。除此之外，部分患者的檢驗(yàn)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)糞便樣本與常用的因式子咽拭子樣本的診斷準(zhǔn)確率基本相似，甚至檢驗(yàn)準(zhǔn)確率更高，需要相關(guān)工作人員引起高度重視。

二、檢測方法

1.實(shí)驗(yàn)室的病毒分離以及鑒定

病毒培養(yǎng)以及分離鑒定是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)開展病原體檢測的新標(biāo)準(zhǔn)，研究人員在進(jìn)行研究時通過獲取患者的支氣管肺泡灌洗液，將其分離的病毒接種制人上皮細(xì)胞后，大約在96小時后，可在人氣道上皮細(xì)胞的表層觀察到其細(xì)胞出現(xiàn)病變。在進(jìn)行判斷是工作人員可以在透射電鏡的環(huán)境下，觀察到病毒顆粒所具備的冠狀病毒日冕的特殊結(jié)構(gòu)。在進(jìn)行病情分析室分離，純化病毒能夠?yàn)榻窈蟮牟《旧飳W(xué)特征以及致病機(jī)理和疫苗研發(fā)奠定基礎(chǔ)，但由于不同病毒的培養(yǎng)時間以及培養(yǎng)技術(shù)有不同的要求，所以工作人員在進(jìn)行管理時，應(yīng)當(dāng)在三級安全的生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)開展鑒定以及分離，所以這一技術(shù)也僅僅適合應(yīng)用于疫情期間的研究，而并不適用于新型冠狀病毒的快速診斷。

2.核酸檢測

核酸檢測涉及到的內(nèi)容較為復(fù)雜，而核酸檢測是目前我國對新冠肺炎進(jìn)行診斷的最常用的一種方式。面對新型冠狀病毒所引發(fā)的本次疫情，在進(jìn)行病毒的控制前，對病毒進(jìn)行遺傳序列的基因組測序，則能夠幫助研究人員了解病毒所具有的遺傳學(xué)特征，同時還能夠幫助研究人員預(yù)測病毒可進(jìn)行的進(jìn)化以及變異，同時還能在一定程度上解釋病毒所具備的獨(dú)立來源，做好病毒的追蹤以及溯源分析，在進(jìn)行檢測時通過對病毒的基因組進(jìn)行測序，還能夠研發(fā)特異性的檢驗(yàn)試劑盒，為疫苗研發(fā)工作提供基礎(chǔ)的理論支持。而在本次疫情爆發(fā)后，我國研究人員在一個月以內(nèi)就通過宏轉(zhuǎn)錄測序技術(shù)對病毒的基因組進(jìn)行了有效的促敘，了解了病毒的發(fā)育樹特征，并且在測序完成后將測序結(jié)果直接上報給whoWHO，并且全世界范圍內(nèi)進(jìn)行共享，對于各個國家的疫情防控提供了基礎(chǔ)的理論支持。研究人員通過第3代測序技術(shù)，在6～10小時內(nèi)完成了新型冠狀病毒以及其他病毒的檢測，不僅十分快速，并且準(zhǔn)確度極高。高通量測序技術(shù)在應(yīng)用過程中所展現(xiàn)出的高度準(zhǔn)確以及高度靈敏的特征，為相關(guān)工作人員開展檢驗(yàn)工作打下了堅實(shí)的基礎(chǔ)。并且這一技術(shù)在應(yīng)用過程中還可通過鑒定的方式了解其他的致病病原體，但在檢驗(yàn)過程中，高通量測序技術(shù)具有較高的檢驗(yàn)成本，并且檢測時間較長，并且還需要專業(yè)的生物研究人員對最終的測試結(jié)果進(jìn)行分析和解答，導(dǎo)致專業(yè)性要求較高，所以并不適合在疫情的高發(fā)時間段內(nèi)進(jìn)行大規(guī)模的應(yīng)用，僅僅適合應(yīng)用于病毒的特征學(xué)研究中。

實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)在應(yīng)用過程中同樣能夠獲得較為良好的效果。熒光探針法具有較高的特異性，在進(jìn)行判斷時通過不同的診斷要求合理設(shè)計探針，則能夠區(qū)分常見的不同病原菌，對于多個靶標(biāo)進(jìn)行同時監(jiān)測，也能夠在一定程度上使檢測工作的準(zhǔn)確度得到提升。除此之外，在進(jìn)行檢測是時PCR技術(shù)還可進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化，例如將其分為一步法和兩步法，一步法，診斷相較于兩步法，診斷來說，不僅操作簡單并且也十分迅速，能夠有助于提高樣本的反應(yīng)濃度，并且減少開蓋次數(shù)，有助于避免樣本遭到周圍環(huán)境或空氣的污染。熒光定量PCR技術(shù)在應(yīng)用過程中，憑借其檢測快速以及成本較低的特征，被廣泛應(yīng)用于我國疫情期間的病情診斷中。這項(xiàng)檢測技術(shù)在應(yīng)用過程中容易受到多方面因素的影響，而出現(xiàn)假陰性的情況，所以在進(jìn)行病情判斷時，應(yīng)當(dāng)對其進(jìn)行多次檢測，通過這種方式保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性。

三、監(jiān)測結(jié)果受影響以及疫情防控方法探討

新冠病毒核酸檢測在應(yīng)用過程中陽性檢出率大約為30%～50%，在檢測時應(yīng)用于檢測的樣本不合格或者樣品收集過早過晚，都有可能導(dǎo)致檢出結(jié)果受到影響，所以在進(jìn)行樣本采集時，一般情況下建議選擇多個部位的樣本進(jìn)行混合檢查或者同時檢查，尤其是在進(jìn)行樣本采集時，一定要嚴(yán)格按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行處理。相關(guān)研究人員針對鼻拭子、咽拭子以及痰液等樣本的檢測準(zhǔn)確率進(jìn)行對比可以發(fā)現(xiàn)支氣管肺泡灌洗液具有最高的診斷陽性率，其次則為痰液標(biāo)本，鼻咽拭子經(jīng)對比分析未見明顯差異，所以在目前我國進(jìn)行檢查時，所選擇的檢測方式為鼻咽拭子檢測方案。這一檢測技術(shù)能夠在最短的時間內(nèi)完成病原菌的檢測，并且還能為相關(guān)工作人員提供患者的病原感染菌特征，以確保患者的診斷準(zhǔn)確度，降低外界因素對檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響。

病毒核酸檢測陽性是新型冠狀病毒的病原學(xué)診斷依據(jù)，目前臨床上在對患者的病情進(jìn)行診斷時，主要采用上呼吸道鼻咽拭子作為核酸檢測樣本，而其他生物樣本在臨床上的診斷準(zhǔn)確度較少。在研究結(jié)果中，痰液樣本診斷陽性率最高的原因可能是由于新型冠狀病毒經(jīng)呼吸道分泌物進(jìn)入消化道所導(dǎo)致的，但也并不排除消化道粘膜屏障損傷，可能會導(dǎo)致患者陽性率增加的情況。在患者假陰性出院以及出院后患者的復(fù)陽性風(fēng)險較高，故而醫(yī)務(wù)人員在對患者的病情進(jìn)行判斷時，可根據(jù)患者的臨床癥狀作出相應(yīng)的診斷方式選擇必要時可以采用消化道檢測聯(lián)合痰液檢測的方式對患者進(jìn)行判斷，能夠有助于改善患者的病情。而在對患者進(jìn)行診斷時，所應(yīng)用的診斷方式會在一定程度上影響檢驗(yàn)效率，故而醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)選擇一種最有效率的檢驗(yàn)方案，以保障檢驗(yàn)工作的有效性。

總結(jié)

新冠疫情在發(fā)生后對病毒進(jìn)行檢驗(yàn)，受到了相關(guān)工作人員的高度重視，而新型冠狀病毒的檢驗(yàn)方式較多并且其優(yōu)勢和劣勢各不相同，在對患者進(jìn)行檢測時，應(yīng)當(dāng)提高檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性，并盡量選擇全自動流水式的快速檢驗(yàn)方式，只有這樣才能夠使現(xiàn)代化的檢驗(yàn)工作更加順利的開展，方便普通民眾在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)內(nèi)進(jìn)行篩查，這樣能夠有助于提高新冠病毒的檢驗(yàn)準(zhǔn)確度，使檢測效率得到提升。

參考文獻(xiàn)

[1]李彩玉，陳夢媛，張師音，葛勝祥. 新型冠狀病毒核酸檢測假陰性原因分析及控制要點(diǎn)[J]. 廈門大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2020，59（03）：310-316.

[2]王露瑩，陳品儒，鄭國灣，漆楠，楊科. 新型冠狀病毒檢測方法的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代藥物與臨床，2020，35（03）：411-416.

[3]王達(dá)，董梁，卿松，閆中強(qiáng). 新型冠狀病毒核酸檢測中的思維誤區(qū)[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2020，30（08）：1167-1170.

[4]王旭東，施健，丁偉峰，鞠少卿，趙建華. 2019新型冠狀病毒核酸檢測的研究狀況與應(yīng)用探討[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志，2020，38（02）：81-84.