牛彩紅 王淑春
摘要:抗生素和激素的廣泛應(yīng)用以及有創(chuàng)診療技術(shù)的發(fā)展,致使血液感染發(fā)病率逐漸升高,菌血癥是由致病菌侵入血液后所致的一種感染狀態(tài),而菌血癥治療時(shí)間長(zhǎng),費(fèi)用多,病死率高,危害極大,血培養(yǎng)是血液感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn),但培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng),即使陰性也不能除外感染,淋巴細(xì)胞亞群作為機(jī)體免疫功能的一個(gè)重要指標(biāo),在病原菌感染后,會(huì)發(fā)生一系列數(shù)量和比例的變化。本研究選擇107例血培養(yǎng)患者,分析其外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的變化,找出其規(guī)律,為臨床對(duì)菌血癥的輔助診斷、治療提供理論依據(jù)。
【中圖分類號(hào)】R552 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026(2021)03-294-02
1.資料與方法
1.1.資料:本次研究選取2018年10月至2019年11月在本院住院同時(shí)進(jìn)行血培養(yǎng)陽(yáng)性及外周血淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定的患者107例,男68例,女39例,年齡18-70歲,平均年齡44±22歲,送檢血培養(yǎng)與淋巴細(xì)胞亞群送檢時(shí)間不超過(guò)24小時(shí),并選同期健康體檢人員36例作為健康對(duì)照組,男21例,女15例,平均年齡43±19歲。
1.2分組:按細(xì)菌生長(zhǎng)情況分為革蘭氏陰性細(xì)菌感染組(82例)、革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染組(25例),同時(shí)設(shè)健康對(duì)照組(36例)。
1.2.方法:
1.2.1試劑與儀器:美國(guó)BD公司BACTEC9120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀及BD公司配套血培養(yǎng)瓶,美國(guó)BD公司PHOENIX-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏系統(tǒng)及原裝配套試劑,美國(guó)貝克曼公司FC-500流式細(xì)胞分析儀,稀釋液(COULTER ISOTON Ⅲ DILUENT),清洗液(COULTER CLENZ),四色復(fù)合試劑異硫氰酸鹽熒光素(FITC) 標(biāo)記的CD45、藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的CD4、藻紅蛋白-得克薩斯紅(ECD)標(biāo)記的CD8、藻青蛋白5(PC5)標(biāo)記的CD3。雙色復(fù)合試劑FITC標(biāo)記的CD3、PE標(biāo)記的CD(16/56)。單色試劑PC5標(biāo)記的CD19,藻青蛋白7(PC7)標(biāo)記的CD45。
1.2.2血培養(yǎng):靜脈采血16-20ml立即注入?yún)捬蹙托柩蹙囵B(yǎng)瓶各1瓶,每瓶8-10ml,并送實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室接受標(biāo)本編號(hào)、登記后,將血培養(yǎng)瓶置BD公司BACTEC9120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中培養(yǎng);當(dāng)儀器陽(yáng)性報(bào)警時(shí),用無(wú)菌注射器抽取培養(yǎng)液涂片、革蘭氏染色、鏡檢,根據(jù)染色鏡檢結(jié)果接種營(yíng)養(yǎng)血平板和/或巧克力平板,置于37℃孵育24h,待菌落形成后挑取單個(gè)菌落配成0.5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝痪褐肂D公司PHOENIX-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏系統(tǒng)對(duì)病原菌鑒定,另取菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢確認(rèn)。
1.2.3.淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè):靜脈采集外周血2 ml加入EDTA-K2抗凝管中。 取兩管分別標(biāo)記T、B&NK,分別加入抗凝血100ul,T系四色熒光素抗體20ul加入T管;CD45、 CD19、CD3單色熒光素抗體,CD16/56 單色熒光素雙抗體各20ul加入B&NK管。兩管輕輕混勻,避光染色15min后,均再加入500ul裂解液混勻,避光10min取出,300g離心5min,棄去上清液,加2ml0.01MPBS液洗滌,離心棄去上清液,再加入0.5ml0.01MPBS混勻,上流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、CD8淋巴細(xì)胞、4/8比值、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞百分含量。
1.3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料以表示,組間比較采用t檢驗(yàn)分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.結(jié)果
本次107例患者血培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果中,革蘭氏陰性菌感染組患者總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8、B淋巴細(xì)胞百分含量較健康對(duì)照組明顯升高(P<0.05)。革蘭氏陽(yáng)性菌感染組總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8比值與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。與革蘭氏菌陽(yáng)性組比較,革蘭氏陰性菌總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8比值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)組見(jiàn)附表。
3.討論
淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫反應(yīng)中主要作用細(xì)胞。機(jī)體在正常情況下,各淋巴細(xì)胞亞群保持一定的數(shù)量和比例,協(xié)同調(diào)節(jié),實(shí)現(xiàn)機(jī)體免疫功能正常運(yùn)行。而當(dāng)病原微生物侵入機(jī)體時(shí),免疫應(yīng)答會(huì)使淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量或功能發(fā)生變化,導(dǎo)致機(jī)體免疫功能失調(diào)。外周血中總T淋巴細(xì)胞,其表面的CD3分子參與T淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原,介導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)。T4淋巴細(xì)胞也稱誘導(dǎo)/輔助性T淋巴細(xì)胞,具有輔助B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生淋巴因子,增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答。
T8淋巴細(xì)胞包括抑制性/細(xì)胞毒性細(xì)胞,具有直接殺傷感染微生物的靶細(xì)胞的功能。4/8比值是監(jiān)測(cè)人體細(xì)胞免疫功能,反應(yīng)機(jī)體免疫狀態(tài)的主要指標(biāo),用于評(píng)價(jià)免疫失調(diào)、免疫狀態(tài)、以及免疫系統(tǒng)的損害程度。B淋巴細(xì)胞表達(dá)和分泌免疫球蛋白,執(zhí)行體液免疫以清除病原微生物。NK細(xì)胞屬自然殺傷細(xì)胞,具有抗感染、免疫調(diào)節(jié)等功能。
本研究中,革蘭氏陰性組和革蘭氏陽(yáng)性組總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8比值較健康對(duì)照組明顯升高,說(shuō)明菌血癥患者在病原菌侵入血液后,機(jī)體免疫功能失調(diào),動(dòng)態(tài)平衡紊亂,細(xì)胞免疫功能反應(yīng)性增強(qiáng)。革蘭氏陰性細(xì)菌感染組患者總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8、B淋巴細(xì)胞百分含量較健康對(duì)照組明顯升高,表示機(jī)體感染革蘭氏陰性菌后,以細(xì)胞免疫為代表的CD4細(xì)胞異?;罨磻?yīng)性增殖,介導(dǎo)體液免疫的B淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn),說(shuō)明機(jī)體此時(shí)細(xì)胞免疫和體液免疫同時(shí)對(duì)非己抗原誘發(fā)的免疫應(yīng)答,在對(duì)抗病原菌過(guò)程發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染組中T4淋巴細(xì)胞、4/8比值均高于對(duì)照組,但增高幅度不及革蘭氏陰性組,兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明機(jī)體此時(shí)以細(xì)胞免疫為主,但免疫反應(yīng)革蘭氏陰性菌組強(qiáng)于革蘭氏陽(yáng)性菌組,考慮為革蘭氏陽(yáng)性菌組以葡萄球菌為主,革蘭氏陽(yáng)性組以桿菌為主,球菌對(duì)機(jī)體刺激反應(yīng)弱于桿菌,這也可能與病例少有關(guān)系,是本研究的不足之處,還有待在后續(xù)工作中進(jìn)一步的研究改進(jìn)提高。
在淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)中影響因素眾多,如機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況,維生素和微量元素水平、體質(zhì)等,[2-5]但是在血培養(yǎng)患者中由于淋巴細(xì)胞亞群的異常活化,導(dǎo)致了免疫功能的紊亂,在臨床治療過(guò)程中,應(yīng)加強(qiáng)免疫功能調(diào)節(jié),適度使用免疫調(diào)節(jié)劑(如糖皮質(zhì)激素、免疫球蛋白、匹多莫德等)進(jìn)行治療,盡快平衡患者的淋巴細(xì)胞亞群比例,有助于促進(jìn)病情恢復(fù),縮短病程,減少并發(fā)癥。
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山西省陽(yáng)泉市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 045000