檢材中巴比妥類藥物殘留量的檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

夏靜雪 趙 琳 周海珍

1.河南峰創(chuàng)檢測技術(shù)有限公司 河南 鄭州 450001；2.漯河食品職業(yè)學(xué)院 河南 漯河 462300

引言

巴比妥類藥物屬于巴比妥酸的衍生物，是一類作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的鎮(zhèn)靜劑，還可以用作抗焦慮藥、安眠藥、抗痙攣藥，但長期使用則會導(dǎo)致成癮性，吸毒成癮者服用后可減輕其焦慮，與鴉片類毒品進(jìn)行混合服用后，能夠達(dá)到更強(qiáng)烈刺激的目[2]。

目前巴比妥類藥物提取方法主要是液液萃取、固相萃取等凈化[2，4]，檢測方法主要有液質(zhì)譜聯(lián)用法、氣質(zhì)譜聯(lián)用法。實(shí)驗(yàn)對肌肉組織中的巴比妥類藥物，經(jīng)乙腈提取，固相萃取柱凈化，利用LCMSMS檢測，取得了較好的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 XevoTQLCMSMS，Waters公司；ML802E型電子天平，MettlerToledo公司；VX-III型多管平行振蕩器，Targin公司；GL-21M型離心機(jī)，湘儀離心機(jī)有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置，Eyela公司；固相萃取裝置，Waters公司。

1.2 試劑和材料 巴比妥類標(biāo)準(zhǔn)品，中國標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；乙腈(質(zhì)譜純)、甲醇(色譜純)和乙酸乙酯(色譜純)均購自Fisher公司；水為屈臣氏水；PEP-2固相萃取柱，60mg/3cc，Agela公司。

1.3 試劑及標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.3.1 0.2mol/L乙酸鈉緩沖液(p H5.2)。

1.3.2 0.1%乙酸乙腈溶液。

1.3.3 淋洗液Ⅰ 乙酸鈉緩沖液-甲醇(90+10)。

1.3.4 淋洗液Ⅱ 正己烷-乙酸乙酯(95+5)。

1.3.5 洗脫液 正己烷-乙酸乙酯(50+50)。

1.3.6 標(biāo)準(zhǔn)系列的配制 用乙腈+水(10+90，v/v)溶液將標(biāo)準(zhǔn)使用液稀釋成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

1.4 儀器條件

1.4.1 液相色譜條件[5]色譜柱：WatersBEH-C18柱(2.1×50mm，1.7μm)；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流動相：A：水，B：乙腈，梯度洗脫。

1.4.2 質(zhì)譜條件 采用ESI-多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式，掃描方式：負(fù)離子掃描：毛細(xì)管電壓：2.5KV；離子源溫度：150℃；干燥器溫度：400℃，干燥氣流量：900L/h；錐孔反吹氣流量：35L/Hr。選擇離子多反應(yīng)監(jiān)測條件見表1所示。

表1 MRM模式下巴比妥類的檢測條件

1.5 樣品處理

1.5.1 提取 稱取樣品2.00±0.01g于50ml離心管中，加入適量無水硫酸鈉和10m L0.1%乙酸乙腈溶液，振蕩混勻10min，離心5min，取上清液于另一離心管中，重復(fù)提取一次，合并上清液。在提取液中加入10mL乙腈飽和的正己烷，振蕩混勻10min，離心5min，取下層乙腈于加有5ml正丙醇的50ml蒸餾瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45℃蒸干。用5mL淋洗液Ⅰ復(fù)溶，待凈化。

1.5.2 凈化 先后用5m L甲醇和5m L乙酸鈉緩沖液預(yù)淋洗，把提取液上柱。用5m L淋洗液Ⅰ洗滌柱子，并徹底抽干，再用5mL正己烷和5m L淋洗液Ⅱ淋洗，最后用10mL洗脫液洗脫。收集洗脫液氮?dú)獯蹈?。?.0mL乙腈+水(10+90)溶解殘?jiān)瑸V膜過濾，上機(jī)檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理的優(yōu)化 由于生物檢材基質(zhì)成分復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)通過溶劑提取后，選取PEP-2柱及HLB柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[1]，結(jié)果表明使用PEP-2柱巴比妥類回收率要比HLB柱略高，但過PEP-2柱時(shí)，由于樣品較臟，需抽真空或加壓處理。

2.2 儀器條件的優(yōu)化[1]巴比妥類在ESI-電離模式下易失去H形成較為穩(wěn)定的[M-H]-的分子離子，本試驗(yàn)采用全掃描和子離子掃描獲得巴比妥類物質(zhì)的母離子掃描圖和特征碎片離子掃描圖，選擇最優(yōu)的定量及定性離子，優(yōu)化后的多反應(yīng)監(jiān)測條件見表1。

圖1 巴比妥類特征碎片離子掃描圖

2.3 回收率和精密度 分別以選定的定量離子峰面積y對含量x(ng/mL)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，三種巴比妥加標(biāo)量分別為1、2、5μg/kg時(shí)對應(yīng)的回收率及精密度見表2。

表2 肌肉組織中巴比妥類回收率及精密度

3 結(jié)論

采用LC-MS/MS測定肌肉組織中的巴比妥類藥物殘留量，方法簡單、快速且靈敏度高，雜峰干擾小。方法定量限為1.0μg/kg，線性范圍為0.5-10ng/mL，在肌肉組織樣品中的回收率為63%-87%，RSD為1.6%-13.4%。本方法可適用于司法鑒定中檢測肌肉組織中巴比妥類的定性定量分析。