梅毒螺旋體感染者血清Tim-3水平與機(jī)體免疫功能相關(guān)性分析

刁玉增，安仲武，李海英，程良碧，談 笑

梅毒是由梅毒螺旋體感染所致的慢性性傳播疾病，是我國(guó)目前發(fā)病率最高的性傳播疾病之一，主要通過(guò)性交傳染，也可通過(guò)母體子宮垂直傳播，引起新生兒先天梅毒[1]。關(guān)于梅毒的治療雖然有標(biāo)準(zhǔn)的診治指南，但復(fù)發(fā)率仍較高。研究[2]表明，機(jī)體的免疫功能在清除梅毒螺旋體過(guò)程中發(fā)揮重要作用，免疫功能受抑制是梅毒病程遷延、反復(fù)發(fā)作的重要原因。T淋巴細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing molecule 3，Tim-3)是T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白家族中的一員，通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答，在多種疾病的病情發(fā)展中發(fā)揮作用[3]。本文通過(guò)分析梅毒病人血清Tim-3表達(dá)水平，并檢測(cè)體液免疫功能指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)變化，同時(shí)分析治療前后Tim-3水平變化，探討Tim-3在梅毒病程進(jìn)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年7月至2019年6月在我院門(mén)診及住院治療的梅毒螺旋體感染者共105例，男56例，女49例，年齡18～65歲。根據(jù)中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS 237-2018)梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)分為一期梅毒病人男15例，女11例；二期梅毒病人男14例，女13例；三期梅毒病人男9例，女12例；隱性梅毒病人男15例，女16例。排除其他性傳播疾病、神經(jīng)梅毒、心血管梅毒、病毒感染性疾病、自身免疫性疾病及惡性腫瘤等及3個(gè)月內(nèi)服用過(guò)免疫調(diào)節(jié)藥物者。另選擇同期30名健康體檢者作為對(duì)照組，男16名，女14名，年齡18～64歲，均無(wú)自身免疫性疾病、病毒感染性疾病等。

1.2 方法

1.2.1 一般處理 所有入選對(duì)象治療前和經(jīng)正規(guī)驅(qū)梅治療3個(gè)月后分別用紫色EDTA抗凝管及黃色分離膠管抽取兩管靜脈血，EDTA抗凝管立即在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)分析T淋巴細(xì)胞亞群，黃色分離膠管待凝固后4 000 r/min離心10 min分離血清備用。

1.2.2 免疫功能指標(biāo)檢測(cè) 采用西門(mén)子特種蛋白儀及配套試劑檢測(cè)IgG、IgM、IgA水平；BD流式細(xì)胞儀及配套試劑進(jìn)行外周血T淋巴細(xì)胞亞群分析，并計(jì)算CD4+/CD8+值。

1.2.3 Tim-3檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)Tim-3水平，試劑購(gòu)自上海瓦蘭生物科技有限公司，用北京普朗新技術(shù)有限公司NDM-9602G酶標(biāo)儀讀取數(shù)值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用t檢驗(yàn)、方差分析、q檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 2組病人血清Tim-3水平、體液免疫指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 梅毒組病人血清Tim-3、IgG、IgM、IgA水平明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。梅毒組病人CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+值均明顯低于對(duì)照組(P<0.01)，CD8+T細(xì)胞水平明顯高于對(duì)照組(P<0.01)(見(jiàn)表1)。

表1 2組病人血清Tim-3水平、體液免疫指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

2.2 不同分期梅毒病人血清Tim-3水平、體液免疫功能指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 一期、二期、三期梅毒組Tim-3水平高于隱性組(P<0.05～P<0.01)；二期、三期梅毒組Tim-3水平高于一期梅毒組(P<0.05～P<0.01)。三期梅毒組血清IgM明顯高于一期梅毒組和隱性組(P<0.01)；二期、三期梅毒組IgA水平高于一期梅毒組(P<0.05)。二期、三期梅毒組CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+值明顯降低于隱性組(P<0.01)，CD8+T細(xì)胞水平明顯高于隱性組(P<0.01)(見(jiàn)表2)。

2.3 梅毒病人治療前后血清Tim-3水平、體液免疫功能指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞亞群水平水平比較 梅毒病人治療前后血清IgG水平變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后血清Tim-3水平和外周血CD8+T細(xì)胞水平明顯低于治療前(P<0.01)，外周血CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+值均明顯高于治療前(P<0.01)(見(jiàn)表3)。

2.4 梅毒病人Tim-3水平與體液免疫功能指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞水平相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析,顯示梅毒螺旋體感染者Tim-3水平與CD8+T細(xì)胞水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.52，P<0.05)，與CD4+T細(xì)胞水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.46，P<0.05)；Tim-3水平與IgG、IgM、IgA無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。

表2 不同分期梅毒病人血清Tim-3水平、體液免疫功能指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

表3 梅毒病人治療前后血清Tim-3水平、體液免疫功能指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

3 討論

流行病學(xué)調(diào)查顯示，近年來(lái)梅毒的發(fā)病呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，越來(lái)越多的學(xué)者又重新關(guān)注梅毒的預(yù)防、診斷、治療及遷延復(fù)發(fā)的研究。梅毒的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，梅毒螺旋體通過(guò)逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視而致病[4]，而復(fù)雜的免疫機(jī)制變化一直是梅毒沒(méi)有得到良好控制的重要原因之一，困擾著臨床醫(yī)生對(duì)梅毒的治療。研究[5]表明梅毒的清除與機(jī)體免疫功能相關(guān)，梅毒感染早期，在機(jī)體的免疫反應(yīng)過(guò)程中細(xì)胞免疫中占主導(dǎo)地位，以T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)為主，T淋巴細(xì)胞在梅毒病程進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，同時(shí)引起組織損害及相關(guān)臨床癥狀的發(fā)生[6-7]。感染晚期細(xì)胞免疫受到相應(yīng)抑制[8]，體液免疫功能發(fā)揮一定的作用。因此尋找能夠監(jiān)控機(jī)體免疫功能的變化，特別是細(xì)胞免疫功能變化的指標(biāo)，對(duì)于闡述梅毒的發(fā)展進(jìn)程及病情的遷延有重要價(jià)值。

Tim-3的免疫調(diào)節(jié)功能越來(lái)越成為研究的熱點(diǎn)，與PD-1功能類(lèi)似[9]，Tim-3是對(duì)免疫應(yīng)答具有抑制性調(diào)節(jié)作用的分子，參與T淋巴細(xì)胞凋亡及機(jī)體免疫耐受的調(diào)節(jié)，在免疫介導(dǎo)的疾病中具有十分重要的作用[10]。研究[11]發(fā)現(xiàn)慢性感染的小鼠CD8+T淋巴細(xì)胞表面的PD-1和Tim-3的高表達(dá)，另有文獻(xiàn)[12]報(bào)道Tim-3過(guò)度表達(dá)在慢性乙肝病人CD4+及CD8+T淋巴細(xì)胞表面，并且參與HIV、HCV、膿毒血癥等慢性感染[13-15]，提示Tim-3參與了機(jī)體慢性感染或病毒感染后的免疫應(yīng)答。既往研究[16]證實(shí)梅毒螺旋體感染者體內(nèi)存在著免疫功能的紊亂，本文通過(guò)分析不同臨床分期梅毒螺旋體感染者的血清Tim-3水平，同時(shí)監(jiān)測(cè)各期病人體液免疫及T淋巴細(xì)胞亞群的變化，進(jìn)一步分析Tim-3與各指標(biāo)之間的相關(guān)性，探討其在梅毒發(fā)展進(jìn)程中的作用。

本研究結(jié)果顯示，梅毒螺旋體感染者Tim-3水平及體液免疫功能指標(biāo)IgG、IgM、IgA較健康對(duì)照組均升高，在各期梅毒中尤其以二期和三期梅毒變化最為顯著，分析原因可能為機(jī)體感染梅毒螺旋體后，體液免疫應(yīng)答被激活導(dǎo)致血清免疫球蛋白水平升高，也可能是機(jī)體感染梅毒螺旋體后，產(chǎn)生保護(hù)性應(yīng)答而分泌出保護(hù)性抗體，引起體液免疫功能指標(biāo)的整體升高。但本研究對(duì)活動(dòng)期梅毒病人經(jīng)正規(guī)驅(qū)梅治療3個(gè)月后再次檢測(cè)血清Tim-3、IgG、IgM、IgA水平，發(fā)現(xiàn)治療后血清Tim-3、IgM、IgA水平明顯下降，而IgG變化不明顯。并且相關(guān)性分析顯示，Tim-3水平與IgM、IgA水平無(wú)明顯的相關(guān)性，說(shuō)明Tim-3不參與調(diào)節(jié)機(jī)體體液免疫。

比較梅毒病人及對(duì)照組淋巴細(xì)胞亞群水平發(fā)現(xiàn)，梅毒病人CD4+T細(xì)胞水平顯著降低而CD8+T細(xì)胞水平顯著升高，CD4+/CD8+T細(xì)胞的比值倒置，進(jìn)一步分析各期梅毒淋巴細(xì)胞亞群水平變化發(fā)現(xiàn)，二期和三期梅毒差異最為顯著，提示梅毒螺旋體感染者存在著細(xì)胞免疫功能的紊亂，隨著疾病的進(jìn)展CD4+及CD8+T細(xì)胞水平的失衡更為嚴(yán)重。同時(shí)對(duì)活動(dòng)期梅毒病人經(jīng)正規(guī)驅(qū)梅治療3個(gè)月后再次檢測(cè)外周血CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及CD4+/CD8+T水平，發(fā)現(xiàn)治療后梅毒病人CD8+T細(xì)胞表達(dá)水平顯著降低，CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+值較治療前顯著增高，進(jìn)一步分析Tim-3與CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及CD4+/CD8+相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，Tim-3與CD8+T細(xì)胞水平呈正相關(guān)關(guān)系，與CD4+T細(xì)胞水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示機(jī)體感染梅毒螺旋體后Tim-3高表達(dá)，且經(jīng)過(guò)正規(guī)驅(qū)梅治療后水平顯著降低，提示Tim-3可能通過(guò)參與機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)來(lái)作用于梅毒疾病的發(fā)展進(jìn)程。

綜上所述，梅毒螺旋體感染者體內(nèi)存在著體液免疫功能指標(biāo)和淋巴細(xì)胞亞群水平的改變，Tim-3作為免疫抑制性因子，其水平與淋巴細(xì)胞亞群變化密切相關(guān)，可能參與到梅毒病程的進(jìn)展，并在梅毒的治療過(guò)程中發(fā)揮作用。本研究由于病例較少及方法學(xué)限制，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究，Tim-3可以作為梅毒病人免疫應(yīng)答水平及治療效果的監(jiān)測(cè)指標(biāo)之一，在梅毒疾病的進(jìn)展與治療中發(fā)揮重要作用。