虎尾輪降低高尿酸血癥大鼠血清尿酸水平作用初探

藍(lán)梓華，王捷頻，刁文飛，鄭康演，劉 讓，黃 闐，高分飛，陳 穗

(1.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院2016級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科班，廣東 汕頭 515041；2.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)室，廣東 汕頭 515041）

高尿酸血癥(男性血清尿酸≥416.0 μmol/L，女性血清尿酸≥357.0 μmol/L），可以導(dǎo)致尿酸鈉在關(guān)節(jié)、肌腱或其他組織中積累，引起痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，腎臟疾病等多種并發(fā)癥。中國45歲及以上的人群的高尿酸血癥患病率為6.4%，高尿酸血癥患病率隨著年齡段的上升而增加，高尿酸血癥在男性中(7.9%)比在女性中(4.9%)更常見[1]。目前臨床上治療高尿酸血癥的藥物主要有別嘌醇、苯溴馬隆、拉布立酶等[2]。但由于這些藥物可能導(dǎo)致胃腸不適、過敏反應(yīng)、腎毒性以及肝毒性等副作用，其臨床應(yīng)用受到不同程度的限制[3-4]。中藥煎劑如加味四妙湯、桂枝附子湯治療高尿酸血癥及痛風(fēng)已有較長的歷史。近年來關(guān)于對(duì)比中藥煎劑和西藥在高尿酸血癥及痛風(fēng)的療效研究報(bào)道也越來越多[5-6]。虎尾輪(Uraria crinita）為豆科植物貍尾草屬，又名貓尾射。藥用范圍廣，具有散瘀止血，行氣止痛的作用[7-8]。而虎尾輪在民間雖有治療高尿酸血癥及痛風(fēng)的應(yīng)用，卻并未有相關(guān)的研究報(bào)道，本文通過研究虎尾輪對(duì)大鼠血清尿酸水平的影響，初步探討虎尾輪對(duì)高尿酸血癥的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物SPF 級(jí)SD 大鼠30 只，雄性，體重200～220 g，由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 藥品與試劑別嘌醇購自黑龍江澳利達(dá)奈德制藥公司，氧嗪酸鉀購自美國Sigma公司，黃嘌呤和羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)購自北京索萊寶科技公司，尿酸測定試劑盒購自貝克曼庫爾特實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試劑配制虎尾輪水煎液的制備：打磨虎尾輪，取42.00 g虎尾輪(按人與大鼠體表面積比換算)，加8 倍蒸餾水，煎煮濃縮至20 mL 儲(chǔ)備液，灌胃前再用蒸餾水配至所需濃度。黃嘌呤0.5%CMC-Na 溶液的配制：熱水浴使CMC-Na 溶于60 mL蒸餾水中配成0.5%CMC-Na溶液后，邊攪拌邊加入1 800 mg黃嘌呤。

1.2.2 動(dòng)物的分組為避免雌激素的影響，選擇雄性鼠制備模型。SD 雄性大鼠30 只，分籠飼養(yǎng)，每籠6 只，自由進(jìn)食，并定期清潔、消毒。適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d 后隨機(jī)分為5 組，分別為空白對(duì)照組、模型組、別嘌醇陽性對(duì)照組、虎尾輪低劑量組和虎尾輪高劑量組，每組6只。

1.2.3 大鼠高尿酸血癥模型建立利用腹腔注射黃嘌呤聯(lián)合皮下注射氧嗪酸鹽的改良方法[9-10]。除正常組外的4組大鼠腹腔注射300.00 mg/kg黃嘌呤0.5% CMC-Na 溶液，再皮下注射100.00 mg/kg 氧嗪酸鉀。正常對(duì)照組大鼠腹腔注射0.5%CMC-Na溶液，后皮下注射0.5%CMC-Na溶液。

1.2.4 灌胃給藥制備SD 大鼠高尿酸血癥模型60 min 后，正常對(duì)照組與模型組灌胃給予10.00 mL/kg 生理鹽水，陽性對(duì)照組灌胃5.00 mg/kg 別嘌醇?；⑽草喅扇擞昧繛?0 g[8]，根據(jù)體表面積比換算，虎尾輪低劑量組以5.25 g/kg 虎尾輪水煎液灌胃，高劑量組以21.00 g/kg虎尾輪水煎液灌胃。

1.2.5 采血與尿酸測定灌胃給藥120 min 后用3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，股動(dòng)脈取血2 mL，待凝血后離心，2 500 r/min，3 min，取上層血清200 μL，用尿酸測定試劑盒測定血清尿酸水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有計(jì)量資料用±s表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組大鼠干預(yù)前后，毛色、進(jìn)食、活動(dòng)等一般狀況并未見明顯改變。模型組的血清尿酸濃度為(426.07±107.93) μmol/L，與正常對(duì)照組相比升高(P＜0.01），提示氧嗪酸鉀與黃嘌呤聯(lián)合誘導(dǎo)的高尿酸血癥模型效果良好。與模型組相比，別嘌醇陽性對(duì)照組、虎尾輪低、高劑量組大鼠血清尿酸濃度均下降(均P＜0.01）?；⑽草喌蛣┝拷M與別嘌醇陽性對(duì)照組相比，血清尿酸濃度升高(P＜0.05），虎尾輪高劑量組與別嘌醇陽性對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.157）。見圖1。

圖1 虎尾輪對(duì)高尿酸血癥大鼠血清尿酸的影響(n=6)

3 討論

本研究結(jié)果表明虎尾輪水煎液可大幅度降低高尿酸血癥大鼠的血清尿酸濃度，臨床上使用的西藥如別嘌醇和苯溴馬隆等均具有肝毒性，會(huì)損害肝臟功能，而虎尾輪對(duì)肝臟有一定的保護(hù)作用，因此針對(duì)肝損傷合并高尿酸血癥，虎尾輪可能有更大的應(yīng)用前景[11-12]。

尿酸是黃嘌呤和次黃嘌呤在人體內(nèi)通過黃嘌呤氧化酶催化產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，主要通過腎臟排泄。長期的尿酸產(chǎn)生過多以及排出下降，導(dǎo)致尿酸代謝紊亂，從而導(dǎo)致高尿酸血癥。尿酸水平的上升，促使尿酸鈉晶體沉積在關(guān)節(jié)中，引發(fā)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。目前治療高尿酸血癥的藥物主要分為減少尿酸生成與增加尿酸排泄兩大類。黃嘌呤氧化酶是生成尿酸的關(guān)鍵酶，別嘌醇和非布司他等藥物抑制黃嘌呤氧化酶，從而降低血清尿酸水平；苯溴馬隆、丙磺舒作用于腎近曲小管的尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1，拉布立酶作為外源性尿酸氧化酶，均可以促進(jìn)尿酸的排泄并降低尿酸[2,4]。

虎尾輪含有木犀草素、白樺脂醇、水飛薊賓等多種化合物[7，13]，Pauff等[14]研究表明木犀草素可以競爭性抑制黃嘌呤氧化酶活性，木犀草素結(jié)合黃嘌呤氧化酶的活性位點(diǎn)，很可能使其苯并吡喃基團(tuán)的苯二酚抑制鉬輔助因子，從而抑制黃嘌呤氧化酶。同時(shí)，木犀草素還可以降低尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1[15]，抑制尿酸在腎小管中的重吸收，從而促進(jìn)尿酸排泄。Yong 等[16]研究發(fā)現(xiàn)，白樺脂醇對(duì)黃嘌呤氧化酶的半抑制濃度比別嘌醇更低，Pauff等[14]研究驗(yàn)證了水飛薊賓對(duì)黃嘌呤氧化酶的混合型抑制作用。因此我們推測虎尾輪降低血清尿酸的濃度是通過其含有的多種化合物的共同作用，減少尿酸的生成，并增加尿酸的排泄。本研究樣本量較小并且治療組樣本個(gè)體差異較大。將在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中增加樣本量和虎尾輪劑量組，進(jìn)一步的探討虎尾輪有效成分的分離提純以及降低尿酸水平的確切機(jī)制。

本研究通過黃嘌呤聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)建立了高尿酸血癥大鼠模型，首次驗(yàn)證了虎尾輪具有降低血清尿酸水平的作用，為后續(xù)研究提供了基礎(chǔ)，提示虎尾輪對(duì)高尿酸血癥以及痛風(fēng)的治療可能具有顯著的潛在價(jià)值。