Duffy、Diego等4種血型系統(tǒng)基因頻率及多態(tài)性研究

易 玲，黃志翔，譚 濤，向雅香

湖南省岳陽市中心血站，湖南岳陽 414000

紅細(xì)胞血型系統(tǒng)在輸血技術(shù)學(xué)中具有重要意義，目前已發(fā)現(xiàn)人類紅細(xì)胞有36種血型系統(tǒng)，360種血型抗原[1]。紅細(xì)胞血型系統(tǒng)具有高度的遺傳多態(tài)性，不同民族和地區(qū)存在差異[2]。本研究采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-序列特異性引物法(PCR-SSP法)對Duffy、Dombrock、Diego、Kidd 4種紅細(xì)胞血型系統(tǒng)8個抗原基因進行分型，分析岳陽地區(qū)漢族人群血型抗原基因頻率和多態(tài)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機留取本血站2019年12月303份非血緣關(guān)系岳陽籍、漢族、ABO血型不限、RhD(+)固定獻血者5 mL EDTA抗凝全血標(biāo)本。年齡18～55歲，男131名，女172名。本研究經(jīng)無償獻血者知情同意。

1.2儀器與試劑 儀器：離心機(Eppendorf公司，德國)；凝膠成像儀(Bio-Rad公司，美國)；PCR儀(Life technologies公司，美國)。試劑:EX-DNA Kit(天津TIANLONG公司，批號:E0819040131);人類Kidd(Jka/Jkb)、Duffy(Fya/Fyb)、Diego(Dia/Dib)、Dombrock(Doa/Dob)血型系統(tǒng)抗原基因分型檢測試劑(天津吉諾泰普生物技術(shù)有限公司，批號:E20191009)。

1.3方法

1.3.1樣本DNA提取 按TIANLONG EX-DNA Kit試劑說明書提取全血基因組DNA。

1.3.2PCR擴增及電泳 按照按照試劑盒說明書進行PCR-SSP法擴增。Kidd(Jka/Jkb)、Duffy(Fya/Fyb)、Diego(Dia/Dib)、Dombrock(Doa/Dob)血型系統(tǒng)PCR循環(huán)參數(shù):96 ℃預(yù)變性2 min;96 ℃ 20 s,68 ℃ 60 s,5個循環(huán);96 ℃ 20 s,65 ℃ 45 s,72 ℃ 30 s,10 個循環(huán);96 ℃ 20 s,62 ℃ 45 s,72 ℃ 30 s,15個循環(huán);72 ℃延長 2 min,4 ℃保存。PCR產(chǎn)物采用2.5%瓊脂糖凝膠于電壓140～150 V條件下電泳10～15 min,采用自動凝膠圖像分析儀成像并記錄電泳結(jié)果。

1.3.3PCR-SSP法結(jié)果判定 每個PCR反應(yīng)都產(chǎn)生強弱不一的1 009 bp內(nèi)對照產(chǎn)物。根據(jù)有無PCR產(chǎn)物及產(chǎn)物長度按表1指定相應(yīng)血型基因。在相應(yīng)堿基對位置觀察有無特異性條帶，若出現(xiàn)特異性條帶判讀為陽性，未出現(xiàn)則判斷為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS24.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。按基因計數(shù)法計算基因頻率，計算觀察值和期望值，采用χ2檢驗分析基因分布是否符合Hardy-Weinberg平衡法則，按參考文獻[3]計算抗原不配合率。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1岳陽漢族人群紅細(xì)胞血型系統(tǒng)抗原基因型及基因頻率 Duffy、Dombrock、Diego和Kidd血型系統(tǒng)抗原基因頻率具有多態(tài)性，其血型系統(tǒng)對偶抗原不配合率分別為0.095 0、0.142 3、0.047 0和0.374 6。采用χ2檢驗比較基因型分布的觀察值和期望值，各血型系統(tǒng)的P>0.05，符合Hardy-Weinberg平衡法則。見表2。

表1 紅細(xì)胞血型分型試劑盒PCR引物及擴增產(chǎn)物長度

表2 岳陽漢族人群紅細(xì)胞血型系統(tǒng)抗原基因型和基因頻率

2.2岳陽漢族人群與其他地區(qū)、民族人群血型系統(tǒng)等位基因多態(tài)性比較 見表3～6。

表3 Duffy血型系統(tǒng)等位基因在中國不同地區(qū)、民族人群中的分布

續(xù)表3 Duffy血型系統(tǒng)等位基因在中國不同地區(qū)、民族人群中的分布

表4 Dombrock血型系統(tǒng)等位基因在中國不同地區(qū)、民族人群中的分布

續(xù)表4 Dombrock血型系統(tǒng)等位基因在中國不同地區(qū)、民族人群中的分布

表5 Digeo血型系統(tǒng)等位基因在中國不同地區(qū)、民族人群中的分布

表6 Kidd血型系統(tǒng)等位基因在中國不同地區(qū)、民族人群中的分布

3 討 論

紅細(xì)胞血型系統(tǒng)在臨床輸血中具有重要意義，也是人類的重要遺傳標(biāo)志，每個人的紅細(xì)胞選擇性表達其中一部分血型抗原。目前臨床輸血主要關(guān)注ABO、Rh血型系統(tǒng)，對Duffy、Diego、Dombrock、Kidd血型系統(tǒng)關(guān)注較少，即臨床輸血大多執(zhí)行的ABO、Rh血型系統(tǒng)相配合，其他血型系統(tǒng)相容性的原則，這對第1次輸血的患者影響不大，但對需多次輸血的患者則影響很大[16]。臨床對多次輸血的患者進行交叉配血和不規(guī)則抗體篩選時，常有交叉配血不合現(xiàn)象發(fā)生，發(fā)現(xiàn)有抗-Jkb、抗-Dia、抗-Dob、抗-Fya等不規(guī)則抗體[17-18]，甚至還有由抗-Fyb、抗-Jkb、抗-Ce聯(lián)合抗體引起的溶血性輸血反應(yīng)的個例報道[19]。這給輸血帶來極大麻煩，往往短時間內(nèi)難以找到合適的獻血者，危及患者的生命。因此，了解一個地區(qū)人群多種紅細(xì)胞血型系統(tǒng)基因頻率分布特點，對指導(dǎo)臨床科學(xué)合理用血，特別是需要反復(fù)輸血的患者的用血安全具有重要意義。

有研究發(fā)現(xiàn)，岳陽漢族人群的Duffy、Dombrock、Diego、Kidd血型系統(tǒng)抗原基因頻率具有多態(tài)性，Dombrock血型系統(tǒng)的Doa/Dob、Kidd血型系統(tǒng)的Jka/Jkb對偶抗原不配合率較高，分別為0.142 3、0.374 6，這些血型系統(tǒng)的個體因隨機輸血或妊娠，產(chǎn)生同種抗體的概率也較高，再次輸血時易引起溶血性輸血反應(yīng)或存在交叉配血難以找到相容性血液的風(fēng)險，再次妊娠時易發(fā)生新生兒溶血病[20]。

本研究結(jié)果顯示，岳陽漢族人群的Duffy、Dombrock、Diego、Kidd血型系統(tǒng)抗原基因頻率的多態(tài)性與我國其他地區(qū)漢族和少數(shù)民族相比，大部分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，僅岳陽漢族人群的Duffy血型系統(tǒng)與山西運城漢族人群差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Dombrock血型系統(tǒng)與西藏藏族、新疆哈薩克族差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與哈爾濱滿族差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Duffy血型系統(tǒng)與新疆哈薩克族差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與西藏藏族、哈爾濱滿族差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Diego、Kidd血型系統(tǒng)與新疆哈薩克族、西藏藏族、哈爾濱滿族差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。提示不同血型系統(tǒng)在我國的不同民族、不同地區(qū)人群中分布存在著共性和個性。

隨著輸血技術(shù)學(xué)的發(fā)展，如何使臨床精準(zhǔn)輸血、最大限度地避免免疫性輸血不良反應(yīng)，從而達到科學(xué)合理、效果更好是輸血技術(shù)研究的重要方向[21]。對固定獻血者檢測多種紅細(xì)胞血型系統(tǒng)、建立獻血者血型基因信息庫，對稀有血型患者選擇配合型血液輸注具有重要意義。

本研究初步建立了岳陽地區(qū)多種紅細(xì)胞血型系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫，充實了國家稀有血型獻血者數(shù)據(jù)庫，為臨床精準(zhǔn)輸血提供了保障。