劉 倩,王宗艷
陜西省人民醫(yī)院消化二科,陜西 西安 710068
胃癌為常見的消化道腫瘤之一,具有高發(fā)病率、高病死率,嚴重威脅人類的生命健康,胃癌發(fā)生與否受生活條件、飲食習慣、幽門螺桿菌(Hp)的影響[1]。我國胃癌發(fā)病率和病死率約占全球45.0%,而診治率低于10.0%,胃癌患者就診時大多已到中晚期,所以及早進行胃癌篩查、早診早治對于胃癌患者具有重要意義,而檢測胃癌生物標志物特別是血清標志物是改善胃癌患者預(yù)后的關(guān)鍵。微小核糖核酸(miRNA)是胃癌患者血清中存在的一種腫瘤標志物,能夠調(diào)控細胞生長、凋亡[2]。本研究選取在本院行手術(shù)治療且術(shù)前未進行過放療、化療的60例胃癌患者作為研究對象,探討其血清miRNA-647水平及臨床意義,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。
1.1一般資料 選取2018年6月至2019年8月在本院行手術(shù)治療且術(shù)前未進行過放療、化療的60例胃癌患者作為觀察組。納入標準:(1)癥狀及臨床診斷均符合胃癌診斷標準者;(2)臨床資料完整者;(3)患者及家屬簽署書面知情同意書。排除標準:(1)全身性疾病,包括嚴重肝、肺、心、腎功能不全者;(2)預(yù)計生存期不足3個月者;(3)嚴重精神疾病患者;(4)合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤患者。同期選取本院胃潰瘍患者60例作為胃潰瘍組,以及體檢健康者60例作為對照組。觀察組男39例,女21例;年齡34~78歲,平均(56.17±5.36)歲;Hp陽性34例,陰性26例;TNM分期:Ⅰ期11例,Ⅱ期22例,Ⅲ期20例,Ⅳ期7例;病灶直徑≥5 cm 37例,<5 cm 23例;分化程度:低分化27例,中分化22例,高分化11例。胃潰瘍組男30例,女30例;年齡32~74歲,平均(55.81±5.69)歲;Hp陽性32例,陰性28例。對照組男32例,女28例;年齡35~75歲,平均(56.09±5.18)歲;Hp陽性35例,陰性25例。3組患者性別、年齡等一般資料比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。
1.2方法 空腹抽取4 mL靜脈血,室溫下放置1 h,4 000 r/min離心10 min,取1.5 mL上清液轉(zhuǎn)至無RNA酶離心管,于-80 ℃冰箱中保存。血清miRNA提取采用長沙維爾公司試劑盒,根據(jù)說明書進行操作,再根據(jù)北京康為生物公司提供的試劑盒說明書進行miRNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),反應(yīng)條件:16 ℃ 30 min,42 ℃ 30 min,85 ℃ 5 min。采取TRIzol法提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,根據(jù)美國Thermo Forma公司相關(guān)試劑盒操作進行實時熒光定量PCR檢測,反應(yīng)條件:95 ℃ 10 min,95 ℃ 15 s,60 ℃ 1 min,共40次循環(huán)。miRNA-647上游引物為5′-GCTACACAGAGGCCATTGAA-3′,下游引物為5′-TCCCGGAGTTCATCTATGTG-3′;內(nèi)參GAPDH上游引物為5′-TGCGACTTCAACAGCAACTC-3′,下游引物為5′-CTTGCTCAGTGTCCTTGCTG-3′。根據(jù)2-ΔΔCt計算miRNA-647相對水平。觀察比較各組研究對象血清miRNA-647水平及其與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。
2.1兩組患者血清miRNA-647水平比較 觀察組血清miRNA-647相對水平(5.06±1.48)高于胃潰瘍組(1.85±0.73)和對照組(0.97±0.49),且胃潰瘍組高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
2.2血清miRNA-647水平與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 血清miRNA-647水平與胃癌患者年齡、性別、分化程度等無相關(guān)(P>0.05),與患者腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有相關(guān)(P<0.05)。見表1。
2.3血清miRNA-647、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原199(CA199)診斷胃癌的效能比較 ROC曲線分析顯示,血清miRNA-647診斷胃癌的曲線下面積(AUC)高于CEA、CA199。見表2。
表1 miRNA-647相對水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
表2 血清miRNA-647、CEA、CA199診斷胃癌的效能比較
胃癌早期癥狀不明顯,容易復發(fā)、轉(zhuǎn)移,預(yù)后差,胃鏡檢查可診斷胃癌但不適應(yīng)于早期胃癌篩查,而血清學標志物檢測作為新型、無創(chuàng)的檢測手段,對胃癌的診斷有重要意義[3]。
miRNA由19~25個核苷酸構(gòu)成,為非編碼小分子RNA,長度約為22個核苷酸,可折疊形成前體轉(zhuǎn)錄物再合成為成熟的miRNA。miRNA配對結(jié)合靶mRNA致使其降解、翻譯改變蛋白質(zhì),轉(zhuǎn)錄后水平負性調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄,在細胞生長、細胞分化、新陳代謝、增殖及凋亡等生物學進程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。血清miRNA與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展有關(guān),不同生物體、不同疾病類型、不同細胞生長周期,miRNA表達情況不同。在乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤中miRNA-647水平較同,而關(guān)于胃癌組織miRNA-647水平的研究較少,調(diào)控機制尚不明確。有研究表明,胃癌組織miRNA-223水平較癌旁組織明顯升高[4]。血清miRNA的來源有3種:凋亡細胞破損后釋放;外泌體、穿梭囊泡運輸,細胞膜包裹傳導;分泌中與RNA結(jié)合蛋白結(jié)合后釋放。miRNA可長期儲存于人體血清、血漿中,可適應(yīng)酸堿變化、溫度變化。不同惡性腫瘤特異性miRNA不同,起源的組織或器官可由低分化腫瘤組織的miRNA水平確定,miRNA是檢測惡性腫瘤的理想血清標志物[5]。
本研究結(jié)果顯示,觀察組血清miRNA-647水平顯著高于胃潰瘍組和對照組(P<0.05),說明miRNA-647水平在胃癌患者血清中較胃潰瘍患者和體檢健康者明顯升高。本研究結(jié)果還顯示,血清miRNA-647水平與胃癌患者年齡、性別、分化程度等無相關(guān)性(P>0.05),與患者腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有相關(guān)(P<0.05),這與徐娟等[6]、周欣亮等[7]研究結(jié)果一致。
綜上所述,血清miRNA-647水平與胃癌腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有關(guān),對胃癌有較好的診斷效能。