保健酒急性毒性和亞急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

郭 艷，王 睿，蔣中仁

（四川省疾病預(yù)防控制中心，四川成都 610041）

保健酒在我國有深厚的文化傳統(tǒng)和群眾基礎(chǔ)，由中藥材泡制的保健酒尤其受到消費(fèi)者歡迎。某牌保健酒以傳統(tǒng)中藥材黃芪、大棗、枸杞子、茯苓、制何首烏、三七、熟地黃、黃精為主要原料，經(jīng)浸漬、滲漉后與白酒（60 %vol）配制，再經(jīng)陳化、冷藏、過濾等工藝制成。黃芪、制何首烏、三七、熟地黃屬于可用于保健食品的物品名單，大棗、枸杞子、茯苓、黃精屬于“既是食品又是藥品的物品名單”?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明，某品牌保健酒配方中原料含有豐富的有效成分，具有多種生物活性（見表1）[1-15]。黃芪、大棗、枸杞子、茯苓、三七、黃精等具有補(bǔ)中益氣之效；制何首烏也是補(bǔ)益藥材，同時(shí)也含有具有體外肝細(xì)胞毒性的沒食子酸和大黃素[16]。對此保健酒進(jìn)行急性毒性和亞急性毒性研究，為科學(xué)評價(jià)其食用安全性提供了試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

受試物：某公司研發(fā)生產(chǎn)的某品牌保健酒，其功效成分粗多糖含量15 mg/100 g，總皂苷含量10 mg/100 g，人體推薦量為100 mL/60 kg·BW，試驗(yàn)樣品為其23倍濃縮液，酒精度0%vol。用60%vol基酒和蒸餾水配制受試物溶液，冷藏保存。

表1 某品牌保健酒原料的主要有效成分和生物活性

動(dòng)物：由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的SPF 級KM 小鼠、SD 大鼠，生產(chǎn)許可證號SCXK（川）2013-19；由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院四川省人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供的飼料，生產(chǎn)許可證號SCXK（川）2015-01；四川省疾病預(yù)防控制中心屏障級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房，溫度20～25 ℃，相對濕度40%～70%，使用許可證號SYXK（川）2016-043。

儀器設(shè)備：奧林巴斯AU-400 全自動(dòng)生化分析儀、XT-2000i 型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、OLYMPUSBH-2 型顯微鏡、超凈工作臺、METTLER 電子天平、解剖器械。

1.2 試驗(yàn)方法[17]

1.2.1 大鼠、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

采用最大耐受劑量法，大鼠、小鼠分別隨機(jī)分成2 組，共4 組，每組同系同性10 只動(dòng)物。設(shè)15000 mg/kg·BW 1 個(gè)劑量組，1 次經(jīng)口灌胃，觀察1周內(nèi)動(dòng)物中毒表現(xiàn)和死亡情況，試驗(yàn)結(jié)束后稱體重，處死動(dòng)物作大體解剖。

1.2.1 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

設(shè)3個(gè)劑量組1.81 mL/kg·BW、3.62 mL/kg·BW、7.25 mL/kg·BW（分別相當(dāng)于人體推薦攝入量的25倍、50 倍、100 倍）、蒸餾水對照組、15 %vol 基酒對照組，采用灌胃法，首次染毒后觀察30 d。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS 17.0 for Windows 軟件統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù)，30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

給予受試物后，大鼠、小鼠未見異常，觀察期內(nèi)未見死亡（見表2），試驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物，大體解剖肉眼未見異常。實(shí)驗(yàn)保健酒對大、小鼠急性經(jīng)口MTD 值均大于15000 mg/kg·BW，按急性毒性分級屬無毒級。

2.2 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

試驗(yàn)期間動(dòng)物健康狀況良好，體重持續(xù)增長，每組大鼠每天經(jīng)口喂飼不同劑量的受試物后均未出現(xiàn)中毒表現(xiàn)，未見動(dòng)物死亡。

2.2.1 保健酒對大鼠體重的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的初始體重、1～4 周體重、第30 天體重與陰性對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；3 個(gè)劑量組雌、雄大鼠的初始體重、1～4 周體重、第30 天體重與15 %vol 基酒對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見表3）。

2.2.2 保健酒對大鼠每周進(jìn)食量的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的每周進(jìn)食量與陰性對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05）；3 個(gè)劑量組雌、雄大鼠的每周進(jìn)食量與15%vol 基酒對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05）（見表4）。

2.2.3 保健酒對大鼠食物利用率的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的每周食物利用率及總食物利用率與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）；3 個(gè)劑量組雌、雄大鼠的每周食物利用率以及總食物利用率與15%vol 基酒對照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05）（見表5）。

2.2.4 保健酒對大鼠血液學(xué)的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的血液學(xué)常規(guī)檢測結(jié)果與陰性對照組比較，除雌鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高顯著性差異外（P＜0.05），其余各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05）；3 個(gè)劑量組雌、雄大鼠的血液學(xué)常規(guī)檢測結(jié)果與15%vol 基酒對照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05）。以上所測值均在本室正常值范圍內(nèi)（見表6）。

2.2.5 保健酒對大鼠末期血生化的影響

15%vol 基酒對照組雌、雄大鼠的末期血生化指標(biāo)檢測結(jié)果與陰性對照組比較，除雌鼠的尿素氮和甘油三酯升高有顯著性差異外（P＜0.05，P＜0.01），其他指標(biāo)無顯著性差異（P＞0.05）；3 個(gè)劑量組雌、雄大鼠的末期血生化指標(biāo)檢測結(jié)果與15%vol基酒對照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05）。以上所測值均在本室正常值范圍內(nèi)（見表7）。

表2 某品牌保健酒對大鼠、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果(）

表2 某品牌保健酒對大鼠、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果(）

表3 某品牌保健酒對大鼠體重的影響()

表3 某品牌保健酒對大鼠體重的影響()

表4 某品牌保健酒對大鼠每周進(jìn)食量的影響()

表5 某品牌保健酒對大鼠食物利用率的影響()

表5 某品牌保健酒對大鼠食物利用率的影響()

表6 某品牌保健酒對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響()

表6 某品牌保健酒對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響()

注：△表示與陰性對照組比較P＜0.05。

表7 某品牌保健酒對大鼠末期生化檢驗(yàn)結(jié)果()

表7 某品牌保健酒對大鼠末期生化檢驗(yàn)結(jié)果()

注：與陰性對照組比較△P＜0.05，△△P＜0.01。

表8 某牌保健酒對大鼠臟體比的影響()

表8 某牌保健酒對大鼠臟體比的影響()

2.2.6 保健酒對大鼠臟體比的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的臟體比值與陰性對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05）。3 個(gè)劑量組雌、雄大鼠的臟體比值與15%vol 基酒對照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05）（見表8）。

2.2.7 病理學(xué)檢查

試驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，進(jìn)行大體解剖，肉眼未見異常改變。組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示：蒸餾水對照組有1 例動(dòng)物腎組織局灶性腎小管輕度擴(kuò)張；15%vol 基酒對照組有1 例動(dòng)物肝組織匯管區(qū)局灶性輕度炎細(xì)胞浸潤；受試物高劑量組有腎組織局灶性腎小管輕度擴(kuò)張；其余受檢組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常。以上所發(fā)現(xiàn)均為動(dòng)物自發(fā)病變，未見受試物高劑量組引起動(dòng)物中毒性損傷改變。

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，某品牌保健酒對大、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果MTD 值均＞15000 mg/kg·BW。30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)，可見動(dòng)物生長發(fā)育及活動(dòng)正常，未見動(dòng)物出現(xiàn)中毒癥狀及死亡。15%vol 基酒對照組的動(dòng)物體重、每周進(jìn)食量、每周食物利用率及總食物利用率、臟體比值、血液學(xué)常規(guī)檢測及末期血生化指標(biāo)檢驗(yàn)結(jié)果與蒸餾水對照組比較，雌鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、尿素氮和甘油三酯均升高有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.05，P＜0.01），其他各項(xiàng)指標(biāo)無顯著性差異（P＞0.05）。3 個(gè)劑量組雌、雄大鼠的每周體重、每周進(jìn)食量、每周食物利用率、總食物利用率、臟體比值、血液學(xué)指標(biāo)及末期血生化指標(biāo)檢測結(jié)果與15%vol 基酒對照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05）。以上所測值均在本室正常值范圍內(nèi)。組織病理學(xué)檢查結(jié)果，除動(dòng)物自發(fā)病變外，未見受試物高劑量組引起動(dòng)物中毒性損傷改變。由此可見，在本試驗(yàn)條件下，某品牌保健酒按急性毒性分級屬無毒級，且無亞急性攝入危害?？稍诖嘶A(chǔ)上針對長期飲用某品牌保健酒的安全性進(jìn)行進(jìn)一步研究，并開展功能學(xué)試驗(yàn)，將其開發(fā)成保健食品，以滿足消費(fèi)者需求。