利用菜粉蝶顆粒體病毒與Bt復合劑防治菜粉蝶研究

段彥麗，李志強，張翌楠 ，韓振芹

（北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院，北京 102442）

在十字花科蔬菜生產(chǎn)中，常發(fā)生菜粉蝶(Pieris rapaeLinne)的危害。 菜粉蝶1年發(fā)生多代，南方一般1年發(fā)生8代，華北發(fā)生3.6～7代[1]。菜粉蝶，屬鱗翅目，粉蝶科，其幼蟲俗稱菜青蟲，主要取食蔬菜葉片造成孔洞或缺刻，嚴重時吃光葉片僅留葉脈，甚至造成幼苗死亡，導致蔬菜產(chǎn)量下降；菜青蟲排出的黑色糞便，污染葉片，還引發(fā)蔬菜軟腐病，降低蔬菜品質(zhì)。目前，常用化學農(nóng)藥防治該害蟲，會造成害蟲抗藥性、次要害蟲再猖獗、農(nóng)藥殘留的“3R”問題，不僅造成環(huán)境污染，還影響食品安全，而用生物制劑防治該害蟲較少。因此，蔬菜害蟲防治迫切需要利用與環(huán)境友好的生物防治手段。近年來，在北京郊區(qū)隨著設(shè)施農(nóng)業(yè)的發(fā)展和蔬菜種植規(guī)模的不斷擴大，為菜粉蝶的發(fā)生和危害創(chuàng)造了有利的條件。但是，農(nóng)戶常用化學農(nóng)藥來控制該害蟲，會帶來蔬菜農(nóng)藥的殘留、害蟲抗藥性、環(huán)境污染等副作用[2]。據(jù)報道，應(yīng)用蘇云金桿菌、昆蟲病毒等生物制劑防治蔬菜害蟲取得了較好的防治效果。尤其是利用菜粉蝶顆粒體病毒(PrGV)與蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis，Bt)共同防治蔬菜害蟲，具有獨特的防治效果。利用PrGV防治害蟲具有特異性強、在害蟲種群中形成流行病，Bt防治害蟲具有速效性等特點，將二者復配進行防治，結(jié)合二者的優(yōu)點，可以提高防治的速效性和持續(xù)性[3-4]。但上述報道室內(nèi)試驗較多，田間應(yīng)用效果較少。本文應(yīng)用PrGV、Bt進行復配，在室內(nèi)和田間進行了藥效防治試驗，為綠色和有機蔬菜生產(chǎn)中菜粉蝶防治提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試材料

試蟲：菜粉蝶成蟲采自未噴灑任何農(nóng)藥的白菜地，在室內(nèi)養(yǎng)蟲網(wǎng)放置洗凈的新鮮白菜葉待其產(chǎn)卵，待幼蟲孵化，挑選齡期相同的幼蟲作為試蟲。

1.1.2 供試藥劑

(1) 8 000 IU/mg 蘇云金桿菌(Bt) 可濕性粉劑(湖北康欣藥業(yè)有限公司)，單劑噴灑濃度為200倍稀釋液。

(2)菜粉蝶顆粒體病毒(PrGV)懸浮液 107PIB/mL(武漢楚強生物科技有限公司)。

(3)復合劑B-GV(簡稱復合劑)：北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院生物制劑室配制，有效成分(PrGV+Bt)含量為 104PIB/ul + 800 IU/ul。

1.2 試驗方法

試驗方法參照段彥麗所做試驗采用的方法[5]。

1.2.1 蔬菜害蟲種類和危害情況調(diào)查

在大興、房山地區(qū)的蔬菜基地，調(diào)查白菜、菜花、菜心、芥藍生長期害蟲發(fā)生情況。每個基地選定地塊，采用5點調(diào)查法，每點5株，每塊地共調(diào)查25株，每天上午9:00定點調(diào)查，記錄害蟲種類和數(shù)量。

1.2.2 菜粉蝶發(fā)生規(guī)律和防治時期觀察

采用田間調(diào)查、室內(nèi)觀察相結(jié)合的方法。

田間調(diào)查：在調(diào)查點隨機5點取樣，每個調(diào)查點選取30株白菜掛牌，調(diào)查卵量和幼蟲發(fā)生情況，每隔1～3 d調(diào)查數(shù)量并記錄，特別注意成蟲的時間以及卵孵化高峰時間。

室內(nèi)觀察：田間采集幼蟲，在溫度24℃±1℃、RH 30%～40%、光︰暗為10 h∶14 h的光照培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)，觀察其發(fā)育歷期。

成蟲期觀察蛹羽化后，于室內(nèi)室溫下，養(yǎng)蟲網(wǎng)飼養(yǎng)，配制1%的蔗糖水供成蟲補充營養(yǎng)，每天觀察成蟲活動，記錄產(chǎn)卵量、壽命等。

幼蟲期觀察卵孵化后，每天觀察幼蟲的生長情況，記錄化蛹時間。

1.2.3 復合劑對不同齡期菜青蟲室內(nèi)試驗

試驗設(shè)計：藥劑為復合劑300倍稀釋，其有效成分（PrGV+Bt）含量為：33.3 PIB/ul + 2.67 IU/ul；對照藥劑Bt濃度為2.67 IU/ul 。試蟲為2～4齡幼蟲。

試驗設(shè)4個處理，每個蟲齡為1個處理。飼毒方法為浸葉法。將白菜葉片浸入配好的藥液中30 s后取出，晾干放在培養(yǎng)皿中飼喂試蟲，每個處理放30頭，每皿放試蟲10頭，重復3次，室溫 （24℃±1℃），分別于用藥1 d、2 d、3 d、4 d后觀察記錄存活狀態(tài)；以藥劑Bt飼毒4齡幼蟲，浸清水葉片飼喂4齡幼蟲為對照，計算校正蟲口減退率。

1.2.4 不同濃度復合劑對菜粉蝶幼蟲田間試驗

試驗區(qū)在北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院科技園 。

共設(shè)4個處理，每個處理設(shè)3個重復。復合劑 A、B、C處理，其噴灑劑量分別為450 、900 、1 350 ml·hm-2；D 處理為 Bt（8 000 IU/mg）可濕性粉劑，噴灑濃度為20 000 IU/ml；以噴灑Bt為對照。

試驗田塊為露地，多年種植白菜，面積為300 m2。田間設(shè)4個隨機排列試驗小區(qū)，試驗小區(qū)為30 m2，每小區(qū)為1個濃度處理，小區(qū)間相距0.5 m，每小區(qū)在白菜5～6葉期開始試驗，用殺蟲網(wǎng)隔離。

菜青蟲防治試驗：用各處理藥劑噴灑白菜，藥劑噴灑白菜正反面。然后將2～3齡菜青蟲6頭，接到標記好的白菜葉片上，如此接種10株。于施藥后1 d、3 d、5 d、7 d觀察記錄菜青蟲存活狀況，計算校正蟲口減退率。

1.2.5 復合劑不同時間噴施對菜粉蝶的防治試驗

分別選擇上午9:00和下午4:00在田間噴藥，復合劑300倍液，每個時間設(shè)1個處理，每個處理放60頭3齡菜粉蝶。每個處理分3個小區(qū)，每小區(qū)隨機取樣選取10棵白菜，小區(qū)間設(shè)保護行，寬度為0.5 m。用工農(nóng)-16型噴霧器進行全株噴霧，尤其注意葉背面的噴施，以噴濕葉片為度。分別于噴藥后1 d、5 d、7 d、12 d觀察記錄死蟲數(shù)量。

1.3 試驗統(tǒng)計方法

用spss統(tǒng)計進行方差分析。計算蟲口減退率和防效，計算公式如下：

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)生規(guī)律和防治時期

2.1.1 北京地區(qū)蔬菜害蟲種類和危害情況調(diào)查調(diào)查情況具體見表1。

表1 北京郊區(qū)蔬菜常見害蟲對寄主的危害

從表1可以看出，大興和房山地區(qū)害蟲發(fā)生種類和危害情況不同。在十字花科蔬菜上發(fā)生的常見害蟲有菜粉蝶Pieris rapaeL.、小菜蛾P(guān)lutella xylostellaL.、桃蚜Myzus persicae(Sulzer)、甜菜夜蛾Spodoptera exigua( Hübner)、溫室白粉虱Trialeurodes vaporariorum(Westwood)、美洲斑潛蠅Liriomyza sativaeBlanchard、黃曲條跳甲Phyllotreta striolataFabricius等7種。菜粉蝶主要發(fā)生在白菜和芥藍上，百株蟲數(shù)分別為30頭和10頭。發(fā)生嚴重的主要為小型的刺吸性口器害蟲，如桃蚜、白粉虱、斑潛蠅等。食葉類害蟲不僅造成產(chǎn)量損失，還會影響蔬菜的品質(zhì)。

2.1.2 發(fā)生規(guī)律及防治時間

通過調(diào)查室內(nèi)飼養(yǎng)菜青蟲發(fā)現(xiàn)，菜粉蝶在北京地區(qū)每年春秋兩季發(fā)生嚴重。菜粉蝶在北京地區(qū)1年發(fā)生4～5代，發(fā)生1代約39 d，其中，卵期約7 d，幼蟲期約5齡、約15 d，蛹期約10 d，成蟲期7 d。在菜粉蝶發(fā)生卵盛期開始，應(yīng)用微生物制劑防治低齡幼蟲危害。

2.2 復合劑對不同齡期菜青蟲防治試驗

防治效果具體見表2。

表2 復合劑對不同齡期菜粉蝶的室內(nèi)防治效果

從表2可知，復合劑對2、3齡菜粉蝶用藥4 d后的防效均達100.0% ，顯著高于Bt單劑處理；復合劑對4齡幼蟲的防效，高于單劑Bt處理；復合劑對不同齡期幼蟲防效存在顯著差異。

2.3 不同濃度復合劑對菜粉蝶幼蟲田間試驗

防治效果具體見表3。

表3 復合劑對菜粉蝶的田間防治效果

表3統(tǒng)計分析表明，用藥后3 d、5 d、7 d校正蟲口減退率，隨著復合劑濃度增加而增大；兩個較高濃度處理，用藥3 d后校正蟲口減退率分別為60.0%、80.0%，用藥7 d后分別為 75.0%、95.0%，顯著高于復合劑最低濃度處理30.0%、53.3%；用藥3 d、5 d、7 d后，Bt處理校正蟲口減退率分別為71.7 %、80.0%、83.3%，均低于復合劑最高濃度處理，但二者沒有顯著差異，表現(xiàn)出復合劑高濃度處理對菜粉蝶特效性和持續(xù)性優(yōu)于單劑Bt處理；用藥7 d后2個復合劑高濃度處理與Bt處理的校正蟲口減退率均在75.0%以上。

2.4 復合劑不同時間噴施對菜粉蝶的防治效果

防治效果具體見表4。

從表4可以看出，復合劑在下午4:00噴藥7 d、12 d后的蟲口減退率（79.3%、65.7% ），顯著高于上午9:00噴藥后的蟲口減退率（52.3%、33% ），表明下午4:00噴藥對菜粉蝶的防效具有顯著的持效性。

3 結(jié)論與討論

據(jù)報道，昆蟲病原微生物混合應(yīng)用對病原的毒力影響比較復雜，有些病原微生物對Bt有增效作用；不同病原微生物對不同昆蟲NPV的毒力的作用不同[6-11]。Bell等[12]對Bt- NPV的混合感染做了詳細的研究，不同劑量病原同時感染幼蟲，對幼蟲毒力表現(xiàn)出增效和拮抗；當Bt濃度為1×103～5×103IU/ml，NPV 濃度為 104～105PIB/ml時，主要表現(xiàn)為相加作用。本試驗結(jié)果表明，Bt處理的濃度為20 IU/ml時，校正蟲口減退率分別為71.7%、80.0%、83.3%，均低于復合劑1 350 ml/hm2高濃度處理，但二者沒有顯著差異，初步說明顆粒體病毒對Bt有相加的作用，這與上述的研究結(jié)果趨于一致，但這一結(jié)論有待于進一步驗證。

不同組織特異性的病毒不會入侵同一個細胞并在其中增殖。不同昆蟲病原微生物的作用機理不同，Bt主要通過δ-內(nèi)毒素殺蟲，作用于昆蟲的中腸基底膜細胞，昆蟲病毒在昆蟲的細胞核中增殖。復配劑中病原的濃度不同，其對病原的毒力也不同[13-17]。本研究的復配劑中，復合劑（PrGV+Bt）對菜粉蝶的防治試驗，室內(nèi)的防治效果優(yōu)于田間，高濃度復合劑表現(xiàn)出較高的防效，有關(guān)這樣的報道較少，其機理有待于進一步試驗研究。

微生物制劑對昆蟲的毒力，隨著蟲齡的增大防效減弱。在田間試驗要掌握在昆蟲3齡前防治，利用復合劑在蔬菜生產(chǎn)中預防食葉害蟲，保障有機蔬菜的生產(chǎn)，具有重要的應(yīng)用價值。