猴面包樹(shù)的離體快繁條件篩選

劉揚(yáng) 李宏楊 陳銀華 劉國(guó)民 陳冠銘

摘要：該文以猴面包樹(shù)（Adansonia digitata）種子為外植體，首先篩選合適的種子預(yù)處理及消毒方法，然后經(jīng)過(guò)啟動(dòng)培養(yǎng)獲得無(wú)菌外植體后在增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)，將叢生芽切成單株進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)，最終建立猴面包樹(shù)離體快繁技術(shù)體系。結(jié)果表明：75%酒精浸泡3 min+0.1%升汞消毒15 min消毒效果較佳，污染率為21.7%，發(fā)芽效果較好;用95%的濃硫酸預(yù)處理12 h接種到WPM啟動(dòng)培養(yǎng)基上萌發(fā)率為46.0%;猴面包樹(shù)種子經(jīng)過(guò)預(yù)處理和消毒后接種到WPM啟動(dòng)培養(yǎng)基上遮光處理48 h，發(fā)芽率可達(dá)74.0%;將經(jīng)過(guò)啟動(dòng)培養(yǎng)后的外植體切成2～3 cm帶有一個(gè)節(jié)的幼嫩莖段接種在增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)，篩選出最佳增殖培養(yǎng)基為WPM+2.0 mg·L1 ZT+ 0.2 mg·L1 IBA，繼代周期60 d，增殖系數(shù)最高為3.1/60 d;將叢生芽切成單株，接種到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，篩選出最佳生根培養(yǎng)基為WPM+5.0 mg·L1 IBA，生根誘導(dǎo)60 d，生根率達(dá)61.3%，平均根數(shù)為1.9條，平均根長(zhǎng)8.9 cm。將生根苗在蔭棚煉苗后，移栽至混合基質(zhì)（椰糠∶菜園土∶珍珠巖=1∶1∶1）中，成活率60.0%。初步建立了猴面包樹(shù)離體快繁技術(shù)體系，為猴面包樹(shù)的快速繁殖和種質(zhì)資源保存提供理論和技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞： 猴面包樹(shù)， 種子萌發(fā)， 離體培養(yǎng)， 快速繁殖

中圖分類(lèi)號(hào)：Q813.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：10003142（2021）02029209

Abstract：The purpose of this paper was to establish the tissue culture regeneration system by using the seeds of Adansonia digitata. After treated with a suitable pretreatment and seeds sterilizing method， the initial medium was inoculated to obtain a sterile material. After initiation culture， the multiple shoot were induced in the enrichment medium， and then cut into individual plants for rooting induction， and finally established a tissue culture and rapid propagation system. The results were as follows： The optimal disinfection treatment combination of explants was 75% alcohol treatment for 3 min + 0.1% HgCl2 treatment for 15 min， the contamination rate of explants was 21.7%; The germination rate was 46.0% after pretreatment with 95% concentrated sulfuric acid for 12 h; The A. digitata seeds were pretreated and sterilized and inoculated onto WPM startup medium for 48 h， and the germination rate was 74.0%; After the initial culture， axillary buds of the explants were cut into 2-3 cm with a section of young stems and inoculated into the enrichment medium and cultured for 60 d for multiple shoots induction， finally， the best valueadded medium was selected as WPM+2.0 mg·L1 ZT+ 0.2 mg·L1 IBA， and the subculture cycle was 60 d with the increment coefficient as high as 3.1; The best rooting medium was WPM + 5.0 mg·L1 IBA， and rooting was induced for 60 d with a rooting rate of 61.3%， the average number of roots was 1.9 and the average root length was 8.9 cm.Adding the right amount of IBA can improve the foam root phenomenon and improve the transplant survival rate. After seedling adaptation， the tissue culture seedlings of A. digitata were transplanted to mixed matrix with coconut∶vegetable garden soil∶perlite （volume ratio 1∶1∶1）， and the survival rate reached above 60.0%. This paper preliminarily established the in vitro rapid propagation technology system of A. digitata， and can provide theoretical and technical supports for the rapid propagation of A. digitata and the preservation of germplasm resources.

Key words： Adansonia digitata， seed germination， in vitro culture， rapid propagation

猴面包樹(shù)（Adansonia digitata）系木棉科（Bombacaceae）猴面包樹(shù)屬（Adansonia）大型喬木類(lèi)植物，又叫波巴布樹(shù)、猢猻木或酸瓠樹(shù)，其主干短、分枝多，原產(chǎn)非洲熱帶干旱地區(qū)，英文名為baobab（魏靜等2011）。猴面包樹(shù)主要分布于南非、博茨瓦納、坦桑尼亞和馬達(dá)加斯加等位于熱帶或亞熱帶非洲的國(guó)家，喜溫?zé)?，旱季能忍受溫?40 ℃ 以上的高溫天氣，也能忍耐0 ℃ 的極端低溫。猴面包樹(shù)是非洲人生活中的一寶，具有較高的食用價(jià)值、藥用價(jià)值和工業(yè)加工價(jià)值（Komane et al.，2016）。猴面包樹(shù)作為園林美化樹(shù)種在中國(guó)云南、廣東、福建、海南、臺(tái)灣、廣西等地有少量試種，其葉片中含有豐富的維生素和鈣質(zhì)，當(dāng)?shù)剞r(nóng)民把它當(dāng)做一種木本蔬菜食用;其果肉富含糖分，可烤食、煮粥、釀酒和制作飲料;其根、嫩枝、果實(shí)、種子和花也都可以食用，口感甚佳，風(fēng)味獨(dú)特（Rahul et al.，2015）;其果實(shí)、葉片和樹(shù)皮可入藥，具有消炎、退熱和治療瘧疾的功效（Nwokocha & Williams， 2016;Tembo et al.，2017）。另外，猴面包樹(shù)樹(shù)形奇特，具有較高的觀賞價(jià)值，是非常值得開(kāi)發(fā)利用的熱帶木本植物（劉揚(yáng)等，2018）。隨著人們生活水平的提高，以猴面包樹(shù)為材料加工的健康食品逐漸進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，其豐富的營(yíng)養(yǎng)和良好的保健功效越來(lái)越受到人們的重視（孫連立等，2018）。

猴面包樹(shù)在國(guó)內(nèi)的資源有限，嚴(yán)重制約了猴面包樹(shù)的研究、開(kāi)發(fā)和利用。而且，猴面包樹(shù)的種殼堅(jiān)硬厚實(shí)，種子發(fā)芽率低于10%（劉揚(yáng)等，2018），種苗繁育困難。隨著猴面包樹(shù)價(jià)值的不斷開(kāi)發(fā)，猴面包樹(shù)種苗問(wèn)題亟待解決。目前為止國(guó)內(nèi)還未見(jiàn)有關(guān)猴面包樹(shù)的植物組培快繁技術(shù)的研究報(bào)道，國(guó)外雖然不多，但都獲得了一定的結(jié)果，為后續(xù)的研究提供了良好的科學(xué)參考，如N′Doye et al.（2012）曾對(duì)猴面包樹(shù)進(jìn)行組織培養(yǎng)研究，發(fā)現(xiàn)以MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加 0.5 mg·L1 BAP 適合增殖;之后，Rolli et al.（2016）提出添加適量的IBA能有效提高猴面包樹(shù)組培苗生根率，但增殖系數(shù)和生根率都有待優(yōu)化。為了加快其推廣進(jìn)程，快速大量獲得種苗，本研究以猴面包樹(shù)當(dāng)年生種子作為外植體，通過(guò)篩選種子預(yù)處理及消毒后接種在啟動(dòng)培養(yǎng)基上獲得無(wú)菌材料，然后對(duì)其種苗快繁的全過(guò)程進(jìn)行系統(tǒng)研究，進(jìn)一步完善猴面包樹(shù)組織快繁技術(shù)體系，從而為猴面包樹(shù)在我國(guó)熱帶地區(qū)大面積推廣種植奠定技術(shù)基礎(chǔ)，并為猴面包樹(shù)后續(xù)的深度研究提供便利。

1材料與方法

1.1 材料

供試材料為當(dāng)年生猴面包樹(shù)（Adansonia digitata ）種子，由?？谑懈橇帜玖挤N試驗(yàn)場(chǎng)引進(jìn)，原產(chǎn)于非洲。采集時(shí)間為2017年11月。

1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

試驗(yàn)所用培養(yǎng)基為從青島日水生物技術(shù)有限公司購(gòu)買(mǎi)的WPM基本培養(yǎng)基，pH 5.2±0.1（25 ℃）;培養(yǎng)條件為光照時(shí)間12 h·d1（催芽試驗(yàn)遮光處理除外）、光照強(qiáng)度1 600 lx、培養(yǎng)溫度（26 ± 2） ℃。

1.3 方法

1.3.1 種子預(yù)處理由于猴面包樹(shù)種子在不做處理的情況下極難發(fā)芽，因此采用酸蝕法對(duì)猴面包樹(shù)種子進(jìn)行預(yù)處理。2017年進(jìn)行酸蝕預(yù)處理：用95% 的濃硫酸處理猴面包樹(shù)種子，處理時(shí)間分別為0、5、10、30 min ，每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50粒種子。將濃硫酸處理過(guò)的猴面包樹(shù)種子洗干凈酸蝕物質(zhì)后，先參照1.3.2外植體消毒方法對(duì)種子進(jìn)行消毒處理，然后接種到WPM培養(yǎng)基上（未添加任何激素），置于培養(yǎng)溫度（26± 2）℃，光照強(qiáng)度1 600 lx、光照時(shí)間每天12 h的培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)。30 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)為以胚根沖破種皮視為種子已萌發(fā)，長(zhǎng)出真葉為成活。

基于預(yù)處理的數(shù)據(jù)不是很理想，2018年1月對(duì)酸蝕處理方法進(jìn)行改進(jìn)，分別用95%的濃硫酸浸泡6、12、24 h，每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50粒種子，之后的消毒、接種和培養(yǎng)方法與前述相同。

1.3.2 外植體消毒首先隨機(jī)選取猴面包樹(shù)種子用洗潔精沖洗3遍，每次搖晃5 min，用流水沖洗30 min;然后于無(wú)菌操作臺(tái)上用75% 酒精浸泡來(lái)回?fù)u晃，使消毒均勻;最后使用無(wú)菌水沖洗3次后加入0.1%升汞溶液用玻璃棒來(lái)回?cái)嚢韬蟮沟粝疽?，用無(wú)菌水清洗 5次。試驗(yàn)設(shè)置9個(gè)處理（表1），每個(gè)處理接種30瓶，重復(fù)3次，接種14 d后統(tǒng)計(jì)污染率（因猴面包樹(shù)種子發(fā)芽率極低存活率不作為統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)）。

1.3.3 遮光處理對(duì)猴面包樹(shù)種子萌發(fā)的影響將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的猴面包樹(shù)種子消毒后接種到WPM空白培養(yǎng)基上，然后分別遮光培養(yǎng)24、48、72 h后，轉(zhuǎn)移到光照強(qiáng)度為2 000 lx左右的培養(yǎng)室，每天光照12 h進(jìn)行培養(yǎng)。以接種后不作任何遮光處理放在光照強(qiáng)度為2 000 lx左右的培養(yǎng)室每天光照12 h進(jìn)行培養(yǎng)，作為對(duì)照，30 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)。每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30粒種子。

1.3.4 細(xì)胞分裂素種類(lèi)及濃度對(duì)猴面包樹(shù)增殖的影響以WPM+0.2 mg·L1IBA為基本培養(yǎng)基，分別加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg·L1 6BA或1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg·L1 ZT，以不加6BA或ZT為對(duì)照。以種子萌發(fā)形成大小基本一致的猴面包樹(shù)無(wú)菌幼苗為材料，切除葉片后，切成2～3 cm帶有一個(gè)節(jié)的幼嫩莖段接種在上述培養(yǎng)基上，設(shè)計(jì)13個(gè)處理，每個(gè)處理20瓶，每瓶接種3株，3次重復(fù)。接種后60 d統(tǒng)計(jì)增殖系數(shù)（植物組培增殖系數(shù)=獲得的總芽數(shù)/接種的未污染莖桿數(shù)）、側(cè)芽誘導(dǎo)率[側(cè)芽誘導(dǎo)率（%）=分化出芽的莖桿數(shù)/接種的未污染莖桿數(shù)×100）]及生長(zhǎng)狀況。

1.3.5 生長(zhǎng)素種類(lèi)及濃度對(duì)猴面包樹(shù)生根的影響以大小、長(zhǎng)度和生長(zhǎng)狀況相對(duì)一致的增殖獲得的側(cè)芽為材料，接種在WPM基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，添加不同濃度IBA（1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg·L1 ）、NAA（2.0、3.0、4.0、5.0 mg·L1 ）或IAA（2.0、3.0、4.0、5.0 mg·L1 ）的生根培養(yǎng)基中，對(duì)照組不添加任何生長(zhǎng)素。每個(gè)處理20瓶，每瓶接種3棵，重復(fù)3次，60 d后統(tǒng)計(jì)并計(jì)算生根率[生根率（%）=生根的組培苗數(shù)/接種苗數(shù)×100]、平均生根條數(shù)及平均根長(zhǎng)。

1.3.6 煉苗及移栽經(jīng)過(guò)生根壯苗培養(yǎng)60 d 左右，猴面包樹(shù)組培苗長(zhǎng)出1～2條根、根長(zhǎng)8 cm以上時(shí)，將生根瓶苗移至育苗大棚放置，5 d 左右打開(kāi)培養(yǎng)瓶的瓶蓋再放置2 d，取出生根苗洗凈根部培養(yǎng)基，用1 000倍多菌靈溶液浸泡20 min 后栽種于經(jīng)過(guò)800倍多菌靈溶液消毒過(guò)的基質(zhì)（椰糠∶菜園土∶珍珠巖=1∶1∶1）中，進(jìn)行日常水肥管理，60 d后觀察成活率及生長(zhǎng)狀況。

1.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)利用Excel 和SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析。

2結(jié)果與分析

2.1 猴面包樹(shù)種子消毒

方差分析與多重比較分析結(jié)果（表1）表明，猴面包樹(shù)種子污染率在處理4、5、6、9間無(wú)明顯差異但污染率明顯低于其他處理;但從種子發(fā)芽狀況來(lái)看，處理4、5較好。綜合污染率和發(fā)芽率，最佳處理方案為處理4（75% 酒精3 min+0.1% 升汞15 min），此時(shí)種子污染率較低（21.7%），發(fā)芽率較高（圖1：A，猴面包樹(shù)種子發(fā)芽前會(huì)變透變紅）。

2.2 預(yù)處理對(duì)猴面包樹(shù)種子萌發(fā)的影響

由表2可知，不做任何預(yù)處理的猴面包樹(shù)種子發(fā)芽率極低。預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用95%濃硫酸浸泡5、10、30 min萌發(fā)率和發(fā)芽勢(shì)與對(duì)照沒(méi)有差異。后續(xù)試驗(yàn)加長(zhǎng)濃硫酸的處理時(shí)間，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著處理時(shí)間的增長(zhǎng)，猴面包樹(shù)種子的萌發(fā)率和發(fā)芽勢(shì)逐漸增大，當(dāng)用95%的濃硫酸處理24 h時(shí)，種子的萌發(fā)率、發(fā)芽勢(shì)達(dá)到最大，分別為49.3%、31.3%;其次為處理12 h的種子，萌發(fā)率和發(fā)芽勢(shì)分別為46.0%、27.3%。通過(guò)方差分析發(fā)現(xiàn)，處理12和24 h的萌發(fā)率差異不顯著，但明顯優(yōu)于其他處理。另外，用95% 濃硫酸處理12 h時(shí)成活率為97.7%，24 h時(shí)成活率只有55.3%。通過(guò)生長(zhǎng)狀況觀察發(fā)現(xiàn)酸蝕12 h的種子發(fā)芽形成的植株健康，根系發(fā)達(dá)。而酸蝕處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（24 h）會(huì)出現(xiàn)明顯酸害，導(dǎo)致種子種胚破損嚴(yán)重，發(fā)芽后多數(shù)畸形，不生根或者生根慢，植株發(fā)育不完全，后期大量種苗畸形死亡（圖1：A，左）。綜上所述，95%濃硫酸處理12 h對(duì)猴面包樹(shù)種子組培育苗效果最好。

2.3 遮光處理對(duì)猴面包樹(shù)種胚無(wú)菌萌發(fā)的影響

由表3可知，遮光處理可以明顯提高無(wú)菌條件下的猴面包樹(shù)種子萌發(fā)率和發(fā)芽勢(shì)，對(duì)成活率沒(méi)有明顯影響。通過(guò)方差分析可知，遮光處理48、72 h的萌發(fā)率和發(fā)芽勢(shì)差異不顯著但明顯優(yōu)于其他處理，其中，遮光48 h發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)分別為74.0%、42.7%，遮光72 h發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)分別為72.0%、44.0%。從生長(zhǎng)狀況來(lái)看，遮光48 h發(fā)芽后子葉濃綠、肥厚，生長(zhǎng)健壯（圖1：A ，中），根系發(fā)育完善;如果遮光時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，植株生長(zhǎng)不均勻，部分葉片發(fā)黃，葉片蜷縮，恢復(fù)慢，影響后期發(fā)育和養(yǎng)分吸收，時(shí)間過(guò)久，植株矮小瘦弱。綜上所述，對(duì)猴面包樹(shù)種胚發(fā)芽時(shí)的最佳遮光時(shí)間是48 h。

2.4 細(xì)胞分裂素種類(lèi)及濃度對(duì)猴面包樹(shù)增殖的影響

由表4可知，以WPM為基本培養(yǎng)基，不添加任何細(xì)胞分裂素，沒(méi)有側(cè)芽發(fā)生，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)莖桿上部變褐死亡。培養(yǎng)基中添加1.0～6.0 mg·L1 的ZT，隨著ZT濃度的增加，增殖系數(shù)和側(cè)芽誘導(dǎo)率呈先增加后下降的趨勢(shì)。當(dāng)ZT濃度為為2.0 mg·L1時(shí)，增殖系數(shù)達(dá)到最大，為3.1，側(cè)芽誘導(dǎo)率為98.3%，生長(zhǎng)狀況較佳（圖1：C）;當(dāng)ZT 濃度大于2.0 mg·L1 時(shí)，增殖系數(shù)和側(cè)芽誘導(dǎo)率都逐步下降，莖桿下基部產(chǎn)生大量愈傷，莖桿上部容易死亡，愈傷褐化嚴(yán)重。培養(yǎng)基添加1.0～6.0 mg·L1 的6BA，對(duì)猴面包樹(shù)的側(cè)芽誘導(dǎo)和增殖效果均不佳，僅當(dāng)6BA濃度為2.0～3.0 mg·L1 時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生了少量側(cè)芽，增殖效果與不添加任何細(xì)胞分裂素相比無(wú)明顯差異。因此，2.0 mg·L1 ZT 對(duì)側(cè)芽誘導(dǎo)最佳，增殖倍數(shù)明顯提高。

2.5 生長(zhǎng)素種類(lèi)及濃度對(duì)猴面包樹(shù)生根的影響

以WPM 為基本培養(yǎng)基，添加IBA、NAA或IAA對(duì)猴面包樹(shù)進(jìn)行生根培養(yǎng)，由表5可知，隨著生長(zhǎng)素濃度的增加生根率、平均根數(shù)及根長(zhǎng)都呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)。其中，IBA 5.0 mg·L1 時(shí)，猴面包樹(shù)生根率（61.3%）、平均根數(shù)（1.9條）及平均根長(zhǎng)（8.9 cm）均最高，明顯高于其他處理，且植株翠綠健壯（圖1：B）。添加NAA或IAA的培養(yǎng)基，其生根率、平均生根條數(shù)、平均根長(zhǎng)均不如添加IBA的培養(yǎng)基，當(dāng)NAA濃度為3.0～5.0 mg·L1 時(shí)，根系粗大、大量泡沫化、易折斷、葉片發(fā)黃脫落;IAA濃度為4.0～5.0 mg·L1 時(shí)，出現(xiàn)黃葉落葉現(xiàn)象，根系泛白泡沫化。泡沫根現(xiàn)象影響后期移栽成活率（圖1：D）。添加適量的IBA則可降低泡沫根，猴面包樹(shù)根細(xì)長(zhǎng)，不易折斷（圖1：F）。對(duì)照組無(wú)生根現(xiàn)象，并隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。因此，適合猴面包樹(shù)組培苗生根的培養(yǎng)基為WPM+ 5.0 mg·L1 IBA。

2.6 猴面包樹(shù)組培苗的移栽

猴面包樹(shù)煉苗移栽30 d后統(tǒng)計(jì)成活率，移栽成活率在60.0%以上。移栽60 d左右形成新的根系，葉片翠綠（圖1：E）。

3討論與結(jié)論

猴面包樹(shù)原產(chǎn)非洲，中國(guó)僅少量引種，取材困難， 以猴面包樹(shù)種子作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)具有不受時(shí)間地點(diǎn)限制、容易保存等優(yōu)點(diǎn)（黃帆等2018）。猴面包樹(shù)種子種皮堅(jiān)硬、發(fā)芽率低（Jensen et al.， 2011），必須經(jīng)過(guò)預(yù)處理才能大量獲得有活性的無(wú)菌材料。因此，為了篩選出適宜的種子，預(yù)處理方法和消毒方法，是建立猴面包樹(shù)無(wú)菌體系首要解決的問(wèn)題。在同類(lèi)研究中：陳學(xué)福和李爽（2017）用濃硫酸酸蝕40 min對(duì)洋槐種子發(fā)芽效果最佳;張寧和劉震（2015）用濃硫酸對(duì)荊條種子處理10 min，可有效破除種子硬殼，提高種子發(fā)芽率;楊曉玲（2013）用95%的濃硫酸處理猴面包樹(shù)帶果肉的種子6～12 h，播種20 d后發(fā)芽率可達(dá)86%～90%; Dovie （2003）將去掉果肉的猴面包樹(shù)

種子用濃硫酸處理15 min，其發(fā)芽率分別達(dá) 98%和 86%。本研究以去掉果肉的猴面包樹(shù)當(dāng)年生種子作為外植體，采用95%的濃硫酸處理猴面包樹(shù)種子12 h，清洗干凈后用75%酒精處理3 min，0.1%升汞溶15 min進(jìn)行消毒，接種到WPM培養(yǎng)基中，遮光處理48 h啟動(dòng)培養(yǎng)，發(fā)芽率為74.0%。本試驗(yàn)中沒(méi)有經(jīng)過(guò)遮光處理的發(fā)芽率只有46%，遠(yuǎn)低于楊曉玲（2013）和Dovie （2003）所報(bào)道的結(jié)果，可能與猴面包樹(shù)的品種、產(chǎn)地環(huán)境、種子的發(fā)育情況和采摘時(shí)間不同所致（Singh et al.， 2010），相關(guān)結(jié)果有待于進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

李艷等（2009）曾報(bào)道遮光30%跳舞草種子的發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率最高，其發(fā)芽天數(shù)最短。我們研究發(fā)現(xiàn)猴面包樹(shù)種子發(fā)芽時(shí)進(jìn)行適當(dāng)遮光處理，發(fā)芽率從44.0%增加到74.0%，增幅明顯，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷，猴面包樹(shù)可能是嫌光性種子，生產(chǎn)實(shí)踐中播種時(shí)可適當(dāng)深播，促進(jìn)其發(fā)芽。這為猴面包樹(shù)種子發(fā)芽機(jī)理研究和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供了一定的參考價(jià)值和探索方向。

在增殖過(guò)程中，6BA和IBA的組合是較常見(jiàn)的組合。程廣有等（2004）在木棉的組織培養(yǎng)和快速繁殖中添加2.0 mg·L16BA及0.1 mg·L1 IBA進(jìn)行繼代增殖，增殖系數(shù)能達(dá)到3.0～5.0。N′Doye et al. （2012）以MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加 0.5 mg·L1BAP對(duì)猴面包樹(shù)進(jìn)行增殖培養(yǎng)，增殖倍數(shù)為2.31，平均增殖芽數(shù)為1.25。本研究在猴面包樹(shù)繼代增殖培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，以WPM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6BA和IBA對(duì)側(cè)芽誘導(dǎo)基本沒(méi)有效果;而添加ZT和IBA對(duì)側(cè)芽誘導(dǎo)效果較好，當(dāng)ZT濃度為2.0 mg·L1 時(shí)，增殖系數(shù)達(dá)到最大（3.1），側(cè)芽誘導(dǎo)率為98.3%，但I(xiàn)BA與ZT的合理濃度還有待進(jìn)一步試驗(yàn)，猴面包樹(shù)增殖系數(shù)還有提高的空間。

猴面包樹(shù)組培苗生根比較困難，容易產(chǎn)生泡沫根。Singh et al. （2010）提出生長(zhǎng)素的存在是猴面包樹(shù)生根的必要條件，添加5 mg·L1NAA猴面包樹(shù)生根率達(dá)75%。Rolli et al. （2016）提出添加

A. 猴面包樹(shù)種子發(fā)芽（左為發(fā)育不完全情況，中間為正常發(fā)育，右為未發(fā)芽時(shí)情況）; B. 猴面包樹(shù)在生根壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)60 d后，根系形成; C. 腋芽在增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)60 d后形成的的芽叢; D. 猴面包樹(shù)泡沫根; E. 猴面包樹(shù)煉苗移栽60 d后生長(zhǎng)情況; F. 猴面包樹(shù)正常根系。

A. Germination of A. digitata seed （incomplete development in left， normal development in the middle， and no germination in right）; B. Root formation after culturing the A. digitata on rooting medium for 60 d; C. Axillary bud formed after 60 d of culture on proliferation medium; D. Foamed roots of A. digitata; E. Growth status after 60 d transplanting of A. digitata; F. Normal roots of A. digitata.

適量的IBA能有效提高猴面包樹(shù)組培苗生根率，最大生根率為45%。本研究發(fā)現(xiàn)，添加較高濃度的NAA和IAA，猴面包樹(shù)根系均粗大，大量泡沫化易折斷，且生根率遠(yuǎn)低于Singh et al. （2010）的試驗(yàn)結(jié)果;而添加IBA的則無(wú)明顯泡沫根現(xiàn)象，當(dāng)IBA濃度為5.0 mg·L1 時(shí)，生根率為61.3%，平均根數(shù)為1.9條，平均根長(zhǎng)為8.9 cm，生根率則遠(yuǎn)優(yōu)于Rolli et al. （2016）的結(jié)果，這種差異可能由基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分和實(shí)驗(yàn)的材料不同引起的。

在猴面包樹(shù)組培生根苗煉苗移栽方面，目前還未見(jiàn)有相應(yīng)的文獻(xiàn)報(bào)道，我們?cè)谝圃缘倪^(guò)程中發(fā)現(xiàn)，組培苗的根系如果泡沫化易斷則很難成活，即使成活，恢復(fù)也非常慢，長(zhǎng)勢(shì)弱。移栽成活率跟組培苗質(zhì)量和管理方式息息相關(guān)。本研究移栽30 d最終成活率為60.0%，離產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)要求還有較大距離。如何解決泡沫根問(wèn)題，完善猴面包樹(shù)組織快繁技術(shù)體系，從而提高移栽成活率也有待進(jìn)一步探究。本研究通過(guò)2 a多的大量反復(fù)試驗(yàn)初步建立了猴面包樹(shù)組織快繁技術(shù)體系獲得了長(zhǎng)勢(shì)較好的無(wú)菌苗，并成功移栽至大田，為猴面包樹(shù)的快速繁殖及工廠化育苗提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。

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（責(zé)任編輯周翠鳴）