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    新疆部分地區(qū)馬皰疹病毒1型感染的血清學(xué)調(diào)查

    2021-03-30 09:20:32高雁怩加爾肯車傳忠王旭蕾冉多良劉建華
    畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2021年3期
    關(guān)鍵詞:伊犁州馬場(chǎng)皰疹病毒

    胡 月,高雁怩,加爾肯,車傳忠,王旭蕾,姜 平,冉多良*,劉建華

    (1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,烏魯木齊 830052;2. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,南京 210095)

    馬皰疹病毒1型(equine herpesvirus-1, EHV-1)和4型(equine herpesvirus-4, EHV-4)是馬鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)的病原體,這兩種病毒均能引起馬屬動(dòng)物呼吸系統(tǒng)疾病[1]。然而,EHV-1除了可以引起馬匹呼吸系統(tǒng)疾病以外,還能導(dǎo)致孕馬流產(chǎn)和新生馬駒死亡及神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如馬皰疹病毒髓腦病(equine herpesvirus myeloencephalopathy,EHM),且其所致疾病的病發(fā)率和死亡率均較EHV-4高[2-3]。由于EHV-1是一種引起馬匹不同臨床綜合征的病原體,給馬產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,2012年5月,世界衛(wèi)生組織將EHV-1引起的疾病稱為馬皰疹病毒-1型感染(infection with equine herpesvirus-1)[4],2020年7月,我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部、海關(guān)總署將該病列為二類動(dòng)物傳染病[5]。

    然而,長期以來,我國的流行病學(xué)的研究重心一直放在馬鼻肺炎病的調(diào)查與防控上,忽略了區(qū)分EHV-1與EHV-4感染[6-8]。2013—2017年,針對(duì)新疆地區(qū)的馬鼻肺炎的流行病學(xué)調(diào)查顯示各地區(qū)平均陽性率為15.16%~28.85%[9-13]。ER在新疆廣泛流行,但卻沒有針對(duì)EHV-1開展的流行病學(xué)調(diào)查,對(duì)EHV-1的防控工作帶來阻礙。為掌握新疆地區(qū)EHV-1的流行現(xiàn)狀,本研究于2019—2020年研究采集新疆不同地區(qū)代表性馬場(chǎng)的1 657份馬血清樣品,利用已建立的針對(duì)EHV-1 gG蛋白抗體的間接ELISA檢測(cè)方法[14],進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查,并分析其流行特點(diǎn)和感染因素,為新疆馬皰疹病毒1型感染的有效防控提供數(shù)據(jù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 樣本

    2019年6月—2020年7月,由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院和部分地區(qū)獸醫(yī)站從新疆烏魯木齊、伊犁州、昌吉州和巴州的16處規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)采集純血馬、混血馬、哈薩克馬、伊犁馬、焉耆馬、普氏野馬共1 657份血液樣本,分批離心制備血清,于-80 ℃保存后集中檢測(cè)。

    1.2 試劑及儀器

    TMB顯色液和DAB試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司;ELISA酶標(biāo)板購自康為世紀(jì)公司;兔抗馬IgG-HRP購自Abcam公司;其他常規(guī)試劑均為國產(chǎn)分析純。酶標(biāo)分析儀(Elx800)購自Bio-tek公司。

    1.3 菌種、質(zhì)粒及抗體

    表達(dá)EHV-1 gG蛋白的陽性質(zhì)粒pGEX-4T-1-gG,感受態(tài)表達(dá)菌E.coliBL21(DE3),EHV-1感染馬陽性血清、陰性血清均由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院傳染病實(shí)驗(yàn)室保存。

    1.4 檢測(cè)方法

    將含有pGEX-4T-1-gG的陽性菌大量誘導(dǎo)表達(dá)后,用GSTrapTM HP kits純化EHV-1 gG蛋白,并測(cè)定蛋白濃度。按照實(shí)驗(yàn)室已建立的間接ELISA方法進(jìn)行樣品檢測(cè),反應(yīng)條件:抗原蛋白包被濃度為0.5 μg·mL-1;4 ℃過夜;50 g·L-1脫脂奶粉封閉,37 ℃ 2 h;待檢血清1∶800稀釋,37 ℃ 1 h; 二抗1∶1 000稀釋,37 ℃ 30 min;加TMB顯色液,37 ℃ 5 min;加1 mol·L-1H2SO4終止。每個(gè)樣品同時(shí)設(shè)置3個(gè)平行對(duì)照,設(shè)陰陽對(duì)照。結(jié)果判定,樣品OD450 nm值>0.307可判為陽性,OD450 nm值≤0.307可判為陰性。

    1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

    運(yùn)用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,對(duì)不同品種、性別及年齡的馬匹EHV-1感染陽性率采用卡方檢測(cè)。

    2 結(jié) 果

    2.1 不同地區(qū)馬血清馬皰疹病毒1型感染抗體檢測(cè)

    來自16處規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)的1 657份血液樣本含有544份陽性樣品,平均陽性率為32.28%。烏魯木齊7處規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)平均陽性率為39.34%(297/755);伊犁州7處規(guī)?;瘓?chǎng)平均陽性率為22.56%(155/687);昌吉州1處規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)陽性率為90.52%(86/95);巴州1處規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)陽性率為5.00%(6/120)(表1)。其中,昌吉州某養(yǎng)殖場(chǎng)陽性率最高,烏魯木齊次之,與伊犁州和巴州相比差異顯著(P<0.05)。烏魯木齊養(yǎng)殖場(chǎng)感染EHV-1存在城郊差異,縣郊養(yǎng)殖場(chǎng)(烏魯木齊縣、達(dá)坂城區(qū))44.05%(270/613)與烏魯木齊市區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)(高新區(qū)、國有馬場(chǎng))19.01%(27/142)抗體陽性率差異顯著(P<0.05)。伊犁州的不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)的養(yǎng)殖場(chǎng)感染EHV-1存在差異,昭蘇縣阿克達(dá)拉鎮(zhèn)陽性率最高,達(dá)48.28%(28/58),尼勒克縣陽性率最低,僅為0.9%(2/222)。表明EHV-1感染在新疆馬群中存在地區(qū)差異。

    表1 馬血清來源及其EHV-1抗體檢測(cè)結(jié)果

    2.2 不同品種馬血清EHV-1抗體檢測(cè)

    純血馬、混血馬、哈薩克馬、伊犁馬、焉耆馬、普氏野馬的EHV-1抗體陽性率分別為20.34%、32.93%、44.92%、19.35%、5.00%、90.52%。其中,普氏野馬血清的EHV-1抗體陽性率最高,顯著高于其他品種的馬(P<0.05)。焉耆馬血清的EHV-1抗體陽性率最低,顯著低于其他品種的馬(P<0.05)(圖1)。本土品種(哈薩克馬、伊犁馬、焉耆馬)平均抗體陽性率為31.70%(305/962),與引進(jìn)品種(純血馬、混血馬)25.50%(153/600)差異顯著(P<0.05);普氏野馬90.52%(86/95)與家馬29.32%(458/1562)的抗體陽性率差異顯著(表2)。通過血清學(xué)檢測(cè)初步表明不同品種馬匹EHV-1抗體陽性率差異顯著。

    圖1 不同品種馬血清馬皰疹病毒1型抗體檢測(cè)結(jié)果Fig.1 The detection result of horse EHV-1 antibody in different breeds

    2.3 不同性別、年齡馬血清EHV-1抗體檢測(cè)

    統(tǒng)計(jì)(表2)表明,母馬感染EHV-1的抗體陽性率為38.84%(414/1 066)顯著高于公馬22.00%(130/591)(P<0.05),馬匹感染EHV-1存在性別差異。16處規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)的馬匹年齡為0~15歲,可分為幼年(0≤Age≤1)、青年(1

    3 討 論

    此次EHV-1抗體陽性率檢測(cè)結(jié)果表明,2019—2020年新疆部分規(guī)?;R場(chǎng)EHV-1的平均陽性率為32.28%。新疆烏魯木齊、伊犁州、昌吉州、巴州規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)普遍存在EHV-1感染,且不同地區(qū)、品種、性別及年齡的馬EHV-1感染率差異顯著(P<0.05)。其中,昌吉州某馬場(chǎng)飼養(yǎng)的普氏野馬發(fā)病率高達(dá)90.52%,該地區(qū)某養(yǎng)殖區(qū)于2019年5月 暴發(fā)馬皰疹病毒1型感染,圈養(yǎng)95匹野馬,其中,86匹野馬體溫升高至39.5~41.5 ℃,出現(xiàn)急性呼吸系統(tǒng)疾病, 6~7匹孕馬流產(chǎn)。2匹野馬死亡。86匹患馬經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)均為EHV-1抗體陽性,并經(jīng)病毒分離鑒定確診為EHV-1感染。普氏野馬為國家一級(jí)保護(hù)動(dòng)物,該物種具有6 000萬年演化史,是研究家馬起源和性狀改良的不可或缺的材料[15]。此次,新疆昌吉州暴發(fā)該病為我國普氏野馬的繁育與保護(hù)帶來了嚴(yán)重危害,制約著該物種的健康發(fā)展和保存。制定合理的免疫程序,有效控制EHV-1在新疆的流行,對(duì)該珍貴物種的保存具有重大意義[16]。

    表2 不同屬性馬匹感染EHV-1血清抗體檢測(cè)結(jié)果

    對(duì)烏魯木齊的調(diào)查結(jié)果顯示,縣郊養(yǎng)殖場(chǎng)抗體陽性率(44.05%)顯著高于市區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)(19.01%)。這與飼養(yǎng)環(huán)境及管理水平相關(guān),縣郊養(yǎng)殖場(chǎng)主要飼養(yǎng)哈薩克馬,還包括混血馬和伊犁馬,多用于景區(qū)參觀,而市區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)僅飼養(yǎng)純血馬,用于賽馬和馬術(shù)活動(dòng)。由于引進(jìn)馬匹的經(jīng)濟(jì)成本較高,養(yǎng)殖場(chǎng)更注重飼養(yǎng)環(huán)境和消毒防疫工作,因而市區(qū)馬場(chǎng)的飼養(yǎng)管理水平較縣郊馬場(chǎng)高[17]。此外,市區(qū)馬場(chǎng)間隔較遠(yuǎn),而縣郊馬場(chǎng)較為密集,不利于疫情防控[18]。提示當(dāng)?shù)貞?yīng)提高縣郊馬場(chǎng)的管理水平,降低飼養(yǎng)密度并做好疫苗接種工作。此次伊犁州7處規(guī)?;R場(chǎng)平均陽性率為22.56%,低于2017年袁貝等[13]對(duì)伊犁州10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的調(diào)查結(jié)果(28.85%)。其中,伊犁州新源縣和尼勒克縣陽性率為5.96%(18/302),低于2016年杜潤慈等[12]對(duì)兩縣的馬鼻肺炎抗體檢測(cè)結(jié)果(15.16%)。這可能與該地區(qū)EHV-4流行有關(guān),本研究采用的EHV-1 gG蛋白抗體的間接ELISA檢測(cè)方法可以有效區(qū)分EHV-1和EHV-4感染,因此,可以準(zhǔn)確了解EHV-1感染情況。巴州焉耆縣集中飼養(yǎng)的本地品種焉耆馬EHV-1感染抗體陽性率僅為5%。焉耆馬以群牧為主,因其具有持久耐勞的特性多用于馬術(shù)比賽,當(dāng)?shù)卣仓匾暱茖W(xué)飼養(yǎng)和防疫程序,積極開展焉耆馬養(yǎng)殖技術(shù)培訓(xùn)班,有效控制疫病傳播[19]。

    統(tǒng)計(jì)表明,母馬EHV-1抗體陽性率(38.84%)顯著高于公馬(22.00%),且養(yǎng)殖場(chǎng)的母馬存欄量高于公馬,應(yīng)當(dāng)對(duì)母馬加強(qiáng)免疫預(yù)防該病。1歲以下馬匹EHV-1抗體陽性率最高,其原因是5~6月齡馬駒獲得的母源抗體逐漸減少而自身免疫力較弱,與其他年齡階段馬匹相比更易于感染EHV-1[20-21]。研究表明,4~7月齡未斷奶馬駒及時(shí)進(jìn)行疫苗接種可有效預(yù)防EHV-1感染,因而養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)重視對(duì)幼駒的預(yù)防接種工作[21]。

    本研究通過對(duì)新疆部分地區(qū)規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)馬匹的血清抗體檢測(cè),初步了解當(dāng)前新疆地區(qū)EHV-1感染的流行情況,為該病的防控提供數(shù)據(jù)支持。分析結(jié)果提示,科學(xué)的飼養(yǎng)管理和嚴(yán)格的防疫工作可有效控制EHV-1在馬群中的傳播,養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)根據(jù)不同品種的馬匹特性,給予其良好的生長環(huán)境;制定完善的免疫程序;對(duì)患馬應(yīng)及時(shí)隔離與治療;加強(qiáng)跨區(qū)運(yùn)輸馬匹EHV-1感染的監(jiān)測(cè)工作。

    4 結(jié) 論

    通過對(duì)新疆烏魯木齊、伊犁州、昌吉州、巴州規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行馬皰疹病毒1型抗體檢測(cè),發(fā)現(xiàn)新疆地區(qū)普遍存在EHV-1感染,且不同地區(qū)、品種、性別及年齡的馬匹EHV-1感染率差異顯著(P<0.05),可為新疆地區(qū)EHV-1感染的研究和防控工作提供調(diào)查數(shù)據(jù)。

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