西門塔爾犢牛腹瀉病例的病原分離及鑒定

黃海波，莫 巖，張智剛

（1.大慶市興牧科技有限公司，黑龍江 大慶 163319；2.黑龍江省和平牧場有限公司農(nóng)業(yè)發(fā)展部，黑龍江 大慶 163851；3.肇東市動物疫病預防控制中心，黑龍江 肇東 151100）

腹瀉是近年來規(guī)?；鰻倥５某Ｒ娂膊。饕蓚魅静?、寄生蟲和中毒等引起，特別是在冬春季節(jié)變換，氣溫驟變時發(fā)病率升高。幼齡犢牛感染大腸桿菌的主要臨床癥狀是發(fā)生腹瀉，而成年牛主要以乳腺炎等局部感染為主，嚴重的會引發(fā)全身感染形成敗血癥導致死亡。大腸桿菌屬于腸桿菌科、埃希菌屬，是革蘭陰性無芽孢桿菌，菌體形狀呈橢圓形，周身有鞭毛存在，可運動，也有的有菌毛，大多數(shù)菌株無莢膜。過去大腸桿菌常被認為是人和動物體內(nèi)腸道的正常菌群，屬于非致病菌，但越來越多的研究證實一些血清型的大腸桿菌是存在致病性的。大腸桿菌在動物和人類出生后幾小時便可經(jīng)各種渠道進入機體進行大量増殖，伴隨人類和動物終生。研究表明致病性大腸桿菌是人畜共患性細菌，在給人類健康造成巨大威脅的同時，還給養(yǎng)殖業(yè)帶來很大的經(jīng)濟損失。

1 發(fā)病情況

2021年3月13日，接到大慶地區(qū)某養(yǎng)殖戶所送病料。養(yǎng)殖戶存欄20頭左右西門塔爾犢牛。犢牛出現(xiàn)持續(xù)性發(fā)病，出現(xiàn)腹痛、腹瀉、消瘦、毛粗亂無光并帶有精神沉郁等臨床癥狀，據(jù)畜主介紹近期剛引進的斷奶犢牛沒有進行相應的疫苗接種，并且養(yǎng)殖牛群密度較大，且飲用未經(jīng)消毒的自來水進行飼喂。牛群近10d發(fā)病，送檢病料前死亡7頭，發(fā)病養(yǎng)殖場附近無相似病例。發(fā)現(xiàn)疾病時，獸醫(yī)進行了相應治療。根據(jù)臨床診斷和流行病學調(diào)查，初步診斷為牛大腸桿菌感染。發(fā)病原因主要是飲用大腸桿菌污染的自來水。

2 臨床癥狀

患牛初期除出現(xiàn)食欲減退，長臥不起和排出少量稀便外無其他明顯癥狀。隨著病情的發(fā)展，出現(xiàn)嚴重腹瀉且腹痛不安，共濟失調(diào)、不斷努責排出黃白色稀樣便。體溫升高，脈搏虛弱、呼吸困難迅速進入昏迷狀態(tài)并虛脫死亡。

3 實驗室診斷

3.1細菌分離培養(yǎng) 無菌采取死亡犢牛的小腸，在超凈工作臺取腸內(nèi)容物及糞便進行平板劃線，接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)18～24h。觀察菌落的形態(tài)，挑取單個菌落劃線接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，純化后的菌落劃線接種與伊紅美藍和麥康凱鑒別培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)18～24h。將分離的菌株進行革蘭染色鏡檢，結果顯示為革蘭氏陰性桿菌；在伊紅美藍培養(yǎng)基上形成黑色并帶有金屬光澤的菌落；在麥康凱培養(yǎng)基上可見光滑粉紅色中等大小的菌落。

3.2 細菌16s rRNA的PCR鑒定選擇細菌16s rRNA通用引物，用純化培養(yǎng)的菌液提取DNA做模版，PCR擴增后將產(chǎn)物進行1%瓊脂糖凝膠電泳和照相。結果表明，擴增出大小約為1384 bp目的片段，與預期擴增片段相符。

3.3 藥敏試驗吸取100μL菌液放置于營養(yǎng)瓊脂上，隨后用滅菌過的L棒將菌液均勻的涂布，觀察營養(yǎng)平板的吸收情況，待菌液吸收完全后，在營養(yǎng)瓊脂平板中貼上新生霉素、大觀霉素、氯霉素、多粘菌素、氨曲南、多鏈霉素、環(huán)丙沙星、頭孢他啶、甲氧嘧啶、四環(huán)素、慶大霉素、林可霉素等藥敏片，37℃培養(yǎng)18～24h。結果顯示大部分藥物對該分離株都顯示出耐藥性，只有多鏈霉素和氨曲南中度敏感。

4 綜合防治措施

（1）對牛舍進行徹底清掃和消毒，死亡犢牛進行無害化處理。（2）加強飼養(yǎng)管理，注意環(huán)境衛(wèi)生和防止水質(zhì)污染，切斷病原傳播途徑，強化防疫衛(wèi)生意識。注意母牛的營養(yǎng)均衡，增強犢牛體質(zhì)。（3）通過藥敏實驗結果可知，從犢牛中分離出來的致病性大腸桿菌對多種抗生素產(chǎn)生耐藥。建議臨床用藥時，根據(jù)藥敏試驗結果和該養(yǎng)殖場的用藥歷史，選擇敏感藥物進行治療，最好選擇多種藥物聯(lián)合治療。

5 小結

該牛場犢牛腹瀉死亡,經(jīng)實驗室診斷為致病性大腸桿菌感染。由于奶牛飲用了被大腸桿菌污染的自來水,致使牛群體內(nèi)致病性大腸桿菌群滋生，腸道菌群紊亂，造成腹瀉，嚴重的脫水死亡。母牛應該在產(chǎn)前加強飼養(yǎng)管理，可以進行疫苗免疫；犢牛產(chǎn)后盡快哺喂初乳，保障犢牛的健康。