聯(lián)合檢測PG、G-17和NEDD9在胃癌診斷中的價值

王慧 張思森 徐小艷 孟婧潔 門穎麗 衛(wèi)田田 楊金花

作者單位：450000 鄭州 鄭州人民醫(yī)院院士工作站

早期胃癌多數(shù)臨床癥狀并不明顯，胃鏡及組織病理學(xué)檢查是早期胃癌及慢性萎縮性胃炎診斷的主要手段，但具有一定侵入性［1-2］，且不適合常規(guī)篩查。近年來多種標志物被報道用于胃癌早期篩查［3］，如血清中胃蛋白酶原（pepsinogen，PG）和胃泌素-17（gastrin-17，G-17）能夠反映不同部位胃黏膜腺體的屏障結(jié)構(gòu)及功能狀態(tài)［4-5］；神經(jīng)前體細胞表達發(fā)育調(diào)控蛋白9（neural precursor cell expressed developmentally downregulated 9，NEDD9）作為骨架蛋白分子，也被報道與乳腺癌［6］、大腸癌［7］、肝癌［8］等多種腫瘤發(fā)病相關(guān)。本課題組前期研究［9-10］發(fā)現(xiàn)NEDD9蛋白水平在早期胃癌較正常人群明顯升高，提示NEDD9對早期胃癌診斷具有一定的價值。本研究在此基礎(chǔ)上進一步檢測胃癌患者血清中的PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9水平，并探討其單獨或聯(lián)合檢測診斷胃癌的效能，以期為臨床上提高胃癌早期診斷提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2018年1月至2018年12月在鄭州人民醫(yī)院就診的95例胃癌患者（胃癌組）和140例胃炎患者（胃炎組）的血清樣本。胃癌患者納入標準：⑴年齡18～70周歲；⑵經(jīng)胃鏡及術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診為胃癌；⑶采血前未進行任何抗腫瘤治療。排除標準：⑴肝、腎和心臟功能嚴重損害者；⑵曾接受胃部手術(shù)者（包括外科手術(shù)及內(nèi)鏡下手術(shù)）；⑶合并其他惡性腫瘤者。胃癌組中，腫瘤細胞僅限于黏膜內(nèi)的早期胃癌有41例，突破黏膜層的進展期胃癌54例，其中男性51例，平均年齡（64.6±9.6）歲；胃炎組經(jīng)胃鏡及術(shù)后病理組織學(xué)檢查見細胞間質(zhì)有炎性細胞浸潤，其中男性64例，平均年齡（56.8±13.0）歲。另選取同期于本院體檢且報告正常的健康體檢者100名作為正常對照，其中男性65名，平均年齡（53.4±8.9）歲。3組研究對象的年齡、性別等差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究經(jīng)鄭州人民醫(yī)院倫理委員會批準，研究對象知情同意。

1.2 血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17及NEDD9的檢測

所有患者均采集清晨空腹靜脈血，3 000 r/min離心15 min獲取血清，于-20℃保存待用。血清PG Ⅰ、PG Ⅱ和G-17的測定均采用芬蘭BIOHIT公司的熒光免疫層析試劑盒，吸取80 μL血清樣本滴至加樣孔中，15 min后上機檢測（HIT-91A熒光免疫分析儀）。血清NEDD9的檢測采用SAB公司的ELISA試劑盒：在反應(yīng)板上每孔加樣100 μL，密封，37℃孵育2 h。棄廢液，每孔加入100 μL一抗，密封，37℃孵育1 h。棄廢液，洗滌3次，甩干。每孔加入100 μL二抗，密封，37℃孵育1 h。棄廢液，洗滌5次，甩干后加入90 μL 底物液，密封，37℃避光孵育 15～30 min。加入50 μL終止液，450 nm條件下檢測。所有操作均按照試劑盒中的說明書嚴格執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9等計量指標采用均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗分析，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用Bonferroni檢驗。診斷試驗的評價采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析，通過 logistic回歸求得聯(lián)合檢測預(yù)測因子logit（P）=β0+β1x1+β2x2+β3x3+…+βixi，xi為各項獨立因子，ROC 曲線下面積（area under curve，AUC）比較采用Z檢驗。以雙側(cè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9在胃癌血清中的表達

胃癌組、胃炎組和正常對照組血清中PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9的表達水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），多重比較顯示 PG Ⅰ、G-17和 NEDD9在胃癌組和正常對照組中的表達水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；胃癌組PG Ⅱ表達水平與胃炎組、正常對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），但胃炎組與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9在胃癌組、胃炎組及正常對照組中的表達Tab.1 Comparison of PG Ⅰ,PG Ⅱ,G-17 and NEDD9 in the gastric cancer group,gastritis group and normal control group

2.2 PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9在早期胃癌和進展期胃癌患者血清中的表達

PG Ⅰ在早期胃癌中的表達高于進展期胃癌，PG Ⅱ表達低于進展期胃癌，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）；G-17和NEDD9在早期胃癌中的表達均低于進展期胃癌，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9在胃癌患者血清中表達水平Tab.2 Expression levels of PG Ⅰ,PG Ⅱ,G-17 and NEDD9 in the serum of gastric cancer patients

2.3 血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9診斷胃癌的效能

血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9診斷胃癌的AUC分別為 0.664、0.570、0.602 和0.749。采用 logistic回歸模型聯(lián)合PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9診斷胃癌，獲得聯(lián)合檢測因子=-2.359-0.018×PG Ⅰ+0.06×PG Ⅱ+0.047×G-17+1.289×NEDD9，AUC 為 0.827，均高于4 項指標單獨診斷胃癌的AUC（均P＜0.05）；對應(yīng)的靈敏度和特異度分別為80.0%和72.9%。見表3和圖1。

表3 PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9診斷胃癌的價值Tab.3 Diagnostic value of PG Ⅰ,PG Ⅱ,G-17 and NEDD9 in gastric cancer

圖1 PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9診斷胃癌的ROC曲線Fig.1 ROC curves of PG Ⅰ,PG Ⅱ,G-17 and NEDD9 in the diagnosis of gastric cancer

3 討論

PG Ⅰ和PG Ⅱ主要是由胃主細胞合成和分泌的兩個亞群，當胃黏膜上的腺體發(fā)生萎縮時，PG Ⅰ分泌水平減少；而發(fā)生腸上皮化生時，PG Ⅱ分泌水平明顯增加，因此PG可以反映胃黏膜的功能和形態(tài)［11-12］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)NEDD9在胃癌中呈高表達，可能在胃癌早期診斷中具有一定價值。因此，本研究選擇聯(lián)合檢測PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9，分析其對胃癌的診斷價值，以期為胃癌的臨床診斷提供新的方法。

本研究發(fā)現(xiàn)PG Ⅰ、G-17和NEDD9在胃癌組、胃炎組與正常對照組中差異表達，其中PG Ⅰ在胃癌血清中表達量降低，而G-17和NEDD9呈高表達，且胃癌組與正常對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示PG Ⅰ、G-17和NEDD9有可能作為診斷胃癌的有效指標。但是本研究發(fā)現(xiàn)PG Ⅱ在胃癌組及胃炎組中的表達水平相當，但均明顯高于正常對照組，且胃炎組與正常對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而胃癌組與正常對照組未顯示出統(tǒng)計學(xué)意義，與既往研究［12］結(jié)果不一致，考慮原因可能是個體差異或樣本量不足造成。此外，本研究進一步對早期和進展期胃癌患者進行分層分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)G-17和NEDD9在早期胃癌血清中的表達水平明顯低于進展期胃癌，提示G-17和NEDD9可能是胃癌早期篩查的潛在指標。

本研究通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，選擇單一指標診斷胃癌，如PG Ⅰ、G-17單項檢測的靈敏度和特異度相當，可見單一指標檢測難以提高診斷效能，而既往研究［3，13］也發(fā)現(xiàn)這一現(xiàn)象。因此，本研究聯(lián)合檢測4項指標，并建立logistic回歸模型進行聯(lián)合檢測分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測的靈敏度為80.0%、特異度為72.9%，AUC為0.827，均高于單一檢測指標的AUC。說明聯(lián)合檢測可以提高胃癌的診斷效能，可能是早期胃癌篩查的有效方案。

綜上所述，PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9在胃癌血清中差異表達，聯(lián)合檢測PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17和NEDD9可提高胃癌的診斷效能。但本研究存在地域限制、個體性差異、樣本量不足等局限性，實現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化仍需深入研究。