高效液相色譜在食品藥品檢測(cè)中的應(yīng)用

（甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威 733006）

1 高效液相色譜的原理和特點(diǎn)

高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）是一種以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ)，使用高壓輸液泵將指定的流動(dòng)相泵入色譜柱中以進(jìn)行分離和測(cè)定。注入的待測(cè)樣品通過流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分析，分離出的各組依次進(jìn)入檢測(cè)器，由記錄儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。高效液相色譜儀由五大系統(tǒng)構(gòu)成。高壓輸液系統(tǒng)主要包括貯液器、脫氣處理裝置和高壓輸液泵，其目的是為分離系統(tǒng)提供穩(wěn)定的能將混合物組分離的高壓液體。進(jìn)樣系統(tǒng)由進(jìn)樣口、注射器和進(jìn)樣閥（或自動(dòng)進(jìn)樣置）組成。其作用是有效地將分析試樣送入色譜柱上，簡(jiǎn)而言之，其功能是取樣和進(jìn)樣。分離系統(tǒng)包括預(yù)柱（保護(hù)柱）、分析柱（色譜柱）和柱溫箱。色譜柱是分離系統(tǒng)的重要組成部分，要求分離度高、柱容量大、分析速度快。通用的分析色譜柱一般為10～30 cm長(zhǎng)，增加柱長(zhǎng)有利于組分的分離，但同時(shí)增加了柱壓。檢測(cè)系統(tǒng)由獨(dú)立的檢測(cè)器及附屬部件構(gòu)成，其功能是將物理或化學(xué)特性轉(zhuǎn)變?yōu)榭商幚淼碾娦盘?hào)，控制和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，記錄、處理色譜分析的數(shù)據(jù)。

高效液相色譜技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)精度高以及節(jié)約時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)，在眾多檢測(cè)方法中脫穎而出。

2 高效液相色譜在食品藥品檢測(cè)中的應(yīng)用

2.1 高效液相色譜在食品檢測(cè)中的應(yīng)用

HPLC可廣泛地應(yīng)用于食品中各營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定，如氨基酸、糖類、維生素、礦物質(zhì)等。人體必需氨基酸有八種，傳統(tǒng)的檢測(cè)技術(shù)在其測(cè)定方面具有一定的局限性，無(wú)法保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。但HPLC對(duì)氨基酸的檢測(cè)效率遠(yuǎn)高于經(jīng)典的液相色譜技術(shù)，能確證其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。除此之外，還被用于檢測(cè)食品中添加劑的含量及抗生素的殘留等。如在肉制品中防腐劑苯甲酸和山梨酸的測(cè)定，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.28-2016中采用乙酸鋅-亞鐵氰化鉀來(lái)沉淀樣品中的蛋白質(zhì)，但易產(chǎn)生大量絮狀沉淀，且提取后所得溶液中雜質(zhì)成分較多，定量結(jié)果往往偏高。研究表明，苯甲酸、山梨酸分別在0.1～60μg/ml濃度下線性良好(R2=1.000)，其平均回收率分別為95.7%、92.8%，并且該方法具有良好的重復(fù)性、穩(wěn)定性和精密度[1]。由于價(jià)格低廉，四環(huán)素類抗生素被廣泛用于預(yù)防多種疾病和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，進(jìn)而提高畜禽的生產(chǎn)效率。但家禽和牲畜中四環(huán)素類抗生素的殘留會(huì)間接或直接進(jìn)入人體，從而大大增加了人體的耐藥性，并對(duì)公眾健康構(gòu)成威脅。而四環(huán)素類抗生素最常用的化學(xué)檢測(cè)方法是高效液相色譜法。王余磊等人[2]建立了同時(shí)測(cè)定雞肉中3種四環(huán)素類藥物殘留（土霉素、四環(huán)素、金霉素）的方法，并優(yōu)化了高效液相色譜條件。近年來(lái)，該分離技術(shù)在保健食品中的應(yīng)用開始流行。缺乏葉黃素是夜盲癥的主要原因。玉米、胡蘿卜、蛋黃和一些藻類含有較多的葉黃素。采用HPLC測(cè)定保健食品中葉黃素的含量，既可有效地提取出葉黃素，又可快速準(zhǔn)確地測(cè)定其含量，回收率達(dá)到96.57%～98.67%[3]。高效液相色譜技術(shù)的廣泛研究使用，使得當(dāng)前的食品安全檢測(cè)水平飛速發(fā)展。

2.2 高效液相色譜在藥品檢測(cè)中的應(yīng)用

藥品不同于一般產(chǎn)品，藥品質(zhì)量直接關(guān)系到人民的健康和生命安全，為了在各個(gè)環(huán)節(jié)全面控制藥物的質(zhì)量，保障用藥的安全和有效，藥品分析檢驗(yàn)就顯得尤為重要。其中，藥物的含量測(cè)定是藥品分析檢驗(yàn)的核心。目前，該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于阿司匹林腸溶片、對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸普魯卡因、頭孢拉定、維生素類及巴比妥類藥物的含量測(cè)定。以阿司匹林腸溶片為例，經(jīng)典的兩步滴定法操作簡(jiǎn)便，但由于本身的輔料比例較大，且滴定法易引起滴定終點(diǎn)的誤差，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果高于理論含量。而高效液相色譜法可以避免輔料對(duì)阿司匹林腸溶片劑測(cè)定結(jié)果的干擾，獲得準(zhǔn)確的結(jié)果[4]。對(duì)于巴比妥類藥物而言，滴定法、銀量法等化學(xué)方法適用范圍較窄，測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確，而HPLC能有效地解決上述問題[5]。除此之外，HPLC在藥物雜質(zhì)的檢查中也常常使用。雜質(zhì)作為藥物質(zhì)量管理控制的重要指標(biāo)之一，影響藥品的安全性和有效性?，F(xiàn)如今，隨著藥物研究的不斷深入發(fā)展，雜質(zhì)的分析技術(shù)及研究方法正發(fā)生巨大變化。劉素艷[6]等人采用一種新的高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定頭孢拉定原料藥中的六種雜質(zhì)，為制劑研究奠定了理論基礎(chǔ)。由于中藥其成分復(fù)雜，往往難以檢驗(yàn)，傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法局限性大，無(wú)法可靠保障其檢驗(yàn)結(jié)果。采用HPLC可以更好地解決這一問題，降低分離難度的同時(shí)有效測(cè)定中藥中有效成分。例如，丹參滴丸中黃芩苷和隱丹參酮的測(cè)定具有高精確度和分離度，這改善了傳統(tǒng)定性檢測(cè)方法的不足[7]。因此，實(shí)現(xiàn)中藥有效成分定量控制，提升質(zhì)量檢驗(yàn)效率和質(zhì)量的同時(shí)，促進(jìn)了中藥質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展。

3 結(jié)束語(yǔ)

總之，高效液相色譜技術(shù)作為一種高效的分離與分析手段，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、環(huán)保、生命科學(xué)、石油化工等領(lǐng)域。高效液相色譜技術(shù)不僅在技術(shù)操作上高效快捷，而且在儀器自動(dòng)化方面具有巨大優(yōu)勢(shì)，全面提高了食品和藥品的整體檢測(cè)水平。