銀線草化學(xué)成分研究△

王傳琦，金新宇，韓悅，劉心雨，柳瑩，莊鵬宇*

1.華北理工大學(xué) 藥學(xué)院，河北 唐山 063200；2.唐山中心醫(yī)院，河北 唐山 063200

銀線草ChloranthusjaponicusSieb.又名燈籠花、分葉芹、假細(xì)辛，為金粟蘭科金粟蘭屬多年生草本植物。銀線草產(chǎn)于我國吉林、遼寧、河北、山東、山西、陜西、甘肅，亦分布于俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)、朝鮮、日本。其生于林下陰濕處，根狀莖可提取芳香油，全株供藥用，具有祛濕散寒、活血止痛、散瘀解毒等功效，用于治療風(fēng)寒咳嗽、跌打損傷、癰腫瘡癤、婦女經(jīng)閉等[1]。研究表明，銀線草主要含有倍半萜、倍半萜多聚體和單萜類化學(xué)成分[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，銀線草提取物具有抗菌、抗人免疫缺陷病毒(HIV)和抗炎等生物活性[3]。本研究對(duì)銀線草化學(xué)成分進(jìn)行分離與鑒定，從銀線草75%乙醇提取物的乙酸乙酯部位共分離得到9個(gè)化合物，分別鑒定為金合歡素(1，acacetin)、千層紙素A(2，6-methoxybaicalein)、7E-3，4-二氧甲基苯并[2-苯基-胸苷]{3，7E-3，4-dioxymethylenzimtsaure-[2-phenyle-thylamid]}、落葉松脂素(4，lariciresinol)、9α-羥基紫菀內(nèi)酯(5，9α-hydroxyasterolide)，銀線草醇B(6，shizukaol B)、金粟蘭素C(7，spicachlorantin C)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ(8，atractylenolide Ⅲ)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ(9，atractylenolide Ⅱ)。其中，化合物1～4為首次在金粟蘭屬中分離得到。

1 材料

1.1 試藥

銀線草的全草采自陜西省安康市寧陜縣，經(jīng)華北理工大學(xué)藥學(xué)院莊鵬宇副教授鑒定為ChloranthusjaponicusSieb.，樣品留樣保存于華北理工大學(xué)藥學(xué)院天然藥物研究室(標(biāo)本號(hào)：ID2016-1)。

硅藻土(煙臺(tái)化學(xué)研究所)；75%乙醇、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙腈(天津天力化學(xué)試劑公司)；純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)。

1.2 儀器

JASCO-V650型紫外分析儀(北京金先鋒光電科技有限公司)；1260型分析型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；6AT型半自動(dòng)制備型高效液相色譜儀(日本島津公司)；Avance ⅡHD 600型核磁共振儀(德國Bruker公司)；柱色譜硅膠400～500目、薄層色譜硅膠H(青島海洋化工有限公司)。

2 提取與分離

銀線草全草(4 kg)干燥粉碎，用75%乙醇水回流提取(8倍量溶劑，回流4 h，2次)，40 ℃減壓干燥得到48 g浸膏。浸膏用甲醇復(fù)溶吸附于等量的硅藻土上并完全干燥，依次用石油醚、乙酸乙酯進(jìn)行洗脫(4次)，分別得到石油醚洗脫部分720 g和乙酸乙酯洗脫部分700 g。取乙酸乙酯洗脫部分進(jìn)行硅膠柱色譜分離，洗脫劑為二氯甲烷-甲醇，梯度洗脫(100∶0→0∶100)，根據(jù)薄層色譜檢測結(jié)果進(jìn)行相似成分合并，得到Y(jié)EA～YEF 5個(gè)組分。YEA經(jīng)過凝膠柱色譜純化，甲醇-水(30∶70)洗脫，得到化合物1(12.5 mg)和2(6.1 mg)；YEB經(jīng)過硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯，10∶1)洗脫，得到化合物3(5.2 mg)和4(7.6 mg)；YEC經(jīng)過硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯，5∶1)洗脫，得到化合物5(20.6 mg)和6(40.8 mg)；YED經(jīng)過凝膠柱色譜(二氯甲烷-石油醚-甲醇，4∶4∶1)洗脫，得到化合物7(25.6 mg)?；衔?母液經(jīng)半自動(dòng)制備液相純化(乙腈-水，45∶55)得到化合物8(5.2 mg)和9(2.3 mg)。

3 結(jié)果

化合物1：黃色粉末，ESI-MSm/z285[M+H]+，提示分子式為C16H12O5；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.28(1H，s，H-3)，6.47(1H，s，H-6)，6.72(1H，s，H-8)，7.58(2H，d，J=7.3 Hz，H-2′，6′)，7.94(2H，d，J=7.3 Hz，H-13，15)，3.91(3H，s，OMe)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：157.8(C-2)，105.9(C-3)，182.5(C-4)，155.3(C-5)，131.3(C-6)，163.6(C-7)，98.9(C-8)，148.9(C-9)，105.3(C-10)，126.9(C-1′)，129.3(C-2′)，126.2(C-3′)，132.0(C-4′)，126.2(C-5′)，129.3(C-6′)，62.1(C-OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定化合物1為金合歡素[4]。

化合物2：黃色無定形粉末，ESI-MSm/z285[M+H]+，提示分子式為C16H12O5；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.72(1H，s，H-3)，6.48(1H，s，H-8)，7.96～7.92(2H，m，H-12，16)，7.59(3H，dq，J=8.7，6.8 Hz，H-13～15)，4.07(3H，s，OMe)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：163.6(C-2)，105.9(C-3)，182.5(C-4)，155.4(C-5)，98.9(C-6)，157.8(C-7)，126.2(C-8)，148.9(C-9)，105.3(C-10)，129.3(C-1′)，131.3(C-2′)，126.9(C-3′)，132.0(C-4′)，126.9(C-5′)，131.3(C-6′)，62.1(OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定化合物2為千層紙素A[5]。

化合物3：白色無定形粉末，ESI-MSm/z296[M+H]+，提示分子式為C18H17NO3；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.52(1H，d，J=15.4 Hz，H-1)，6.15(1H，d，J=15.4 Hz，H-2)，3.69～3.60(2H，m，H-4)，2.88(2H，t，J=6.8 Hz，H-5)，6.96(2H，d，J=8.7 Hz，H-2′)，6.78(1H，d，J=7.8 Hz，H-5′)，6.96(2H，d，J=8.7 Hz，H-6′)，7.28～7.19(4H，m，H-2″，3″，5″，6″)，7.32(1H，dd，J=8.3，6.9 Hz，H-4″)，5.63(1H，d，J=6.1 Hz，NH)，5.97(2H，d，J=1.3 Hz，OCH2O)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：140.9(C-1)，118.5(C-2)，166.1(C-3)，40.8(C-4)，35.7(C-5)，126.6(C-1′)，109.7(C-2′)，149.1(C-3′)，150.6(C-4′)，111.1(C-5′)，122.0(C-6′)，139.0(C-1″)，127.8(C-2″)，128.8(C-3″)，126.6(C-4″)，128.7(C-5″)，127.8(C-6″)，56.0(OMe)，55.9(OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定化合物3為7E-3，4-二氧甲基苯并[2-苯基-胸苷][6]。

化合物4：白色無定形粉末，ESI-MSm/z361[M+H]+，提示分子式為C20H24O6；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.57(1H，dd，J=13.7，10.7 Hz，H-7α)，2.94(1H，dd，J=13.7，5.2 Hz，H-7β)，2.81～2.70(1H，m，H-8)，3.78(2H，ddd，J=14.7，9.6，6.3 Hz，H-9α，9′α)，4.07(1H，dd，J=8.6，6.6 Hz，H-9β)，4.81(1H，d，J=6.6 Hz，H-7′)，2.43(1H，p，J=6.9 Hz，H-8′)，3.95～3.91(1H，m，H-9′β)，6.95～6.62(6H，m，H-Arom)，3.89(3H，s，3-OMe)，3.91(3H，s，3′-OMe)；132.3(C-1)，111.2(C-2)，146.5(C-3)，144.0(C-4)，114.4(C-5)，121.2(C-6)，134.8(C-1′)，108.3(C-2′)，146.6(C-3′)，145.1(C-4′)，114.2(C-5′)，118.8(C-6′)，33.4(C-7)，42.4(C-8)，72.9(C-9)，82.8(C-7′)，52.6(C-8′)，61.0(C-9′)，56.0(OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定化合物4為落葉松脂素[7]。

化合物5：白色無定形粉末，ESI-MSm/z249[M+H]+，提示分子式為C15H20O3；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.73(1H，ddq，J=12.9，4.9，2.3 Hz，H-1α)，1.35(1H，dp，J=13.5，2.0 Hz，H-1β)，1.99(1H，td，J=13.4，5.4 Hz，H-2α)，1.68～1.57(1H，m，H-2β)，2.45～2.39(1H，m，H-3α)，2.39～2.32(2H，m，H-2β，6β)，2.10(1H，td，J=13.6，4.5 Hz，H-5)，2.70(1H，dd，J=13.6，3.5 Hz，H-6α)，3.92(1H，d，J=3.6 Hz，H-8)，5.02(1H，dt，J=3.7，1.8 Hz，H-9)，3.51(3H，s，H-13)，0.93(3H，d，J=0.9 Hz，H-14)，4.91(1H，q，J= 1.5 Hz，H-15α)，4.63(1H，q，J=1.5 Hz，H-15β)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：41.0(C-1)，22.2(C-2)，36.2(C-3)，148.9(C-4)，42.2(C-5)，25.6(C-6)，159.1(C-7)，79.9(C-8)，75.4(C-9)，34.5(C-10)，121.9(C-11)，175.2(C-12)，8.3(C-13)，15.6(C-14)，107.4(C-15)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定化合物5為9α-羥基紫菀內(nèi)酯[8]。

化合物6：白色無定形粉末，ESI-MSm/z733[M+H]+，提示分子式為C40H44O13；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.10～2.05(1H，m，H-1)，1.02(1H，overlapped，H-2α)，0.35～0.30(1H，m，H-2β)，1.85～1.82(2H，m，H-3)，3.98(1H，d，J=3.7 Hz，H-6)，3.90(1H，s，H-9)，1.97(3H，s，H-13)，1.02(3H，s，H-14)，2.97～2.44(6H，m，H-15，6′，f，g)，1.63(1H，td，J=8.1，4.1 Hz，H-1′)，0.76(1H，td，J=8.8，5.8 Hz，H-2′α)，1.36(1H，dt，J=5.8，3.9 Hz，H-2′β)，1.42(1H，m，H-3′)，1.85～1.82(2H，m，H-5′)，1.90～1.88(1H，m，H-9′)，4.61～4.51(2H，m，H-13′α，15′α)，5.12～5.05(2H，m，H-13′β，e)，0.84(3H，s，H-14′)，3.66(1H，d，J=11.8 Hz，H-15′β)，6.64(1H，t，J=6.7 Hz，H-c)，4.69～4.62(1H，m，H-d)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：26.0(C-1)，16.0(C-2)，24.8(C-3)，142.5(C-4)，132.2(C-5)，41.1(C-6)，131.3(C-7)，200.7(C-8)，79.9(C-9)，51.0(C-10)，147.5(C-11)，170.2(C-12)，20.1(C-13)，15.3(C-14)，25.3(C-15)，25.6(C-1′)，11.7(C-2′)，27.8(C-3′)，77.1(C-4′)，61.2(C-5′)，23.4(C-6′)，174.5(C-7′)，93.2(C-8′)，55.5(C-9′)，44.9(C-10′)，123.4(C-11′)，171.7(C-12′)，54.3(C-13′)，26.0(C-14′)，72.0(C-15′)，167.0(C-a)，129.2(C-b)，135.5(C-c)，61.6(C-d)，171.5(C-e)，28.6(C-f)，29.2(C-g)，172.0(C-h)，13.0(Me-b)，52.4(OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定化合物6為銀線草醇B[9]。

化合物7：白色無定形粉末，ESI-MSm/z767[M+H]+，提示分子式為C40H46O15，1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.08～2.04(1H，m，H-1)，1.32～1.28(1H，m，H-2α)，0.98(1H，td，J=8.4，5.8 Hz，H-2β)，1.88～1.84(1H，m，H-3)，3.75(1H，overlapped，H-9)，1.83(3H，s，H-13)，1.06(3H，s，H-14)，3.08(1H，dd，J=14.2，7.1 Hz，H-15α)，1.65～1.58(1H，m，H-15β)，1.65～1.58(1H，m，H-1′)，1.26(1H，dt，J=5.7，4.1 Hz，H-2′α)，0.65(1H，td，J=9.0，5.6 Hz，H-2′β)，1.51～1.46(1H，m，H-3′)，1.65～1.58(1H，m，H-5′)，2.94～2.85(1H，m，H-6′α)，2.43～2.37(1H，m，H-6′β)，2.60～2.56(1H，m，H-9′)，5.27(1H，dd，J=12.2，1.2 Hz，H-13′α)，4.57(1H，d，J=12.2 Hz，H-13′β)，0.94(3H，s，H-14′)，4.40(1H，d，J=11.8 Hz，H-15′α)，3.89(1H，d，J=11.7 Hz，H-15′β)，6.59(1H，ddt，J=6.4，3.4，1.0 Hz，H-c)，5.16～5.08(1H，m，H-dα)，4.63(1H，ddd，J=14.4，7.2，1.1 Hz，H-dβ)，2.82～2.77(1H，m，H-fα)，2.67(1H，ddd，J=16.9，8.1，2.4 Hz，H-fβ)，2.94～2.85(1H，m，H-gα)，2.56～2.51(1H，m，H-gβ)，1.95(3H，s，Me-b)，3.75(3H，s，OMe)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：26.0(C-1)，8.2(C-2)，27.7(C-3)，90.5(C-4)，158.5(C-5)，126.7(C-6)，142.4(C-7)，199.0(C-8)，77.8(C-9)，50.1(C-10)，129.5(C-11)，169.5(C-12)，20.7(C-13)，15.1(C-14)，36.8(C-15)，27.3(C-1′)，10.1(C-2′)，28.6(C-3′)，77.1(C-4′)，56.9(C-5′)，23.6(C-6′)，172.7(C-7′)，87.2(C-8′)，52.5(C-9′)，45.4(C-10′)，124.7(C-11′)，171.8(C-12′)，54.0(C-13′)，23.8(C-14′)，73.3(C-15′)，166.7(C-a)，129.5(C-b)，135.6(C-c)，61.4(C-d)，171.5(C-e)，29.1(C-f)，28.7(C-g)，172.0(C-h)，12.8(Me-b)，52.5(OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定化合物7為金粟蘭素C[10]。

化合物8：白色無定形粉末，ESI-MSm/z249[M+H]+，提示分子式為C15H20O3，1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.25(1H，td，J=12.7，5.7 Hz，H-1α)，1.70～1.53(3H，m，H-1β，6β，9α)，1.97(1H，td，J=12.7，7.0 Hz，H-2β)，2.37(1H，ddt，J=15.1，4.2，1.8 Hz，H-3α)，2.43(1H，tq，J=13.0，1.5 Hz，H-3β)，2.62(1H，dd，J=13.2，3.2，H-6α)，2.26(1H，d，J=13.7 Hz，H-9β)，1.89～1.80(4H，m，H-5，13)，1.03(3H，s，H-14)，4.60(1H，q，J=1.5 Hz，H-15α)，4.87(1H，q，J=1.5 Hz，H-15β)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：51.3(C-1)，22.3(C-2)，36.7(C-3)，148.5(C-4)，51.3(C-5)，24.6(C-6)，160.8(C-7)，103.4(C-8)，41.3(C-9)，36.1(C-10)，122.3(C-11)，171.9(C-12)，8.2(C-13)，16.6(C-14)，106.9(C-15)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定化合物8為白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ[11]。

化合物9：白色無定形粉末，ESI-MSm/z233[M+H]+，提示分子式為C15H20O2，1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.34(1H，td，J=13.3，12.9，5.2 Hz，H-1α)，1.72～1.56(3H，m，H-1β，2)，2.04～1.96(1H，m，H-3α)，2.40(1H，ddt，J=13.2，4.2，2.0 Hz，H-3β)，1.89～1.85(1H，m，H-5)，2.75(1H，dd，J=13.9，3.7 Hz，H-6α)，2.36～2.29(2H，m，H-6β，9β)，4.87～4.81(1H，m，H-8)，1.19～1.12(1H，m，H-9α)，1.84(3H，t，J=1.7 Hz，H-13)，0.92(3H，s，H-14)，4.62(1H，q，J=1.5 Hz，H-15α)，4.89(1H，q，J=1.6 Hz，H-15β)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：41.1(C-1)，22.4(C-2)，36.3(C-3)，149.3(C-4)，41.5(C-5)，25.7(C-6)，162.0(C-7)，78.0(C-8)，47.6(C-9)，37.0(C-10)，119.5(C-11)，174.2(C-12)，8.3(C-13)，16.5(C-14)，106.9(C-15)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定化合物9為白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ[12]。

4 討論

本研究在銀線草75%乙醇提取物的乙酸乙酯溶性部位中分離得到9個(gè)化合物，其中化合物1～4為首次在金粟蘭屬中分離得到，豐富了金粟蘭屬的化學(xué)成分，為其藥理活性研究提供參考。