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    超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜法測定茶葉中黃酮醇糖苷種類及含量

    2021-03-25 13:50:00董方張群峰阮建云
    江蘇農(nóng)業(yè)學報 2021年1期
    關鍵詞:超高效液相色譜茶葉優(yōu)化

    董方 張群峰 阮建云

    摘要: 基于超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜(UPLC-QqQ-MS/MS)聯(lián)用技術對茶葉中黃酮醇糖苷(FGs)種類及含量進行測定并對提取方式和檢測條件進行優(yōu)化。用75%(體積分數(shù))甲醇水溶液提取目標化合物,再用Waters Acquity HSS T3色譜柱(粒徑為1.8 μm,長度×內(nèi)徑為100.0 mm×2.1 mm)分離目標化合物,以含有0.1%(體積分數(shù))甲酸的乙腈溶液為流動相進行梯度洗脫,采用電噴霧正離子源(ESI+)與質譜多反應監(jiān)測(MRM)方法對成品茶中15種FGs進行定量測定。結果表明,在0.1~20.0 μg/ml的質量濃度范圍內(nèi)FGs的基質標準曲線的線性關系良好,其檢測限(LOD)為0.08~0.23 μg/L,定量限(LOQ)為0.25~0.76 μg/L,相對標準偏差(RSD)為1.30%~2.80%,出峰時間為3.60~7.40 min。與現(xiàn)有最優(yōu)檢測技術相比,超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜法具有分析速度快、靈敏度高、穩(wěn)定性好等特點,可為提高茶葉品質成分的檢測效率提供參考。

    關鍵詞: 茶葉;黃酮醇糖苷;超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜法;質譜多反應監(jiān)測;優(yōu)化

    中圖分類號: O658;TS272 文獻標識碼: A 文章編號: 1000-4440(2021)01-0204-09

    Determination of flavonol glycosides in teas by ultra-high performance liquid chromatography combined with triple four-bar tandem mass spectrometry

    DONG Fang1,2, ZHANG Qun-feng2, RUAN Jian-yun 2

    (1.Institute of Horticulture, Jiangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanchang 330200, China;2.Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008, China)

    Abstract: The extraction methods and detection conditions of flavonol glycosides (FGs) in teas were optimized based on ultra-high performance liquid chromatography combined with triple four-bar tandem mass spectrometry (UPLC-QqQ-MS/MS) technology, and the varieties and contents were determined. The target compounds were extracted with 75% (volume fraction) methanol aqueous solution, separated on Waters Acquity HSS T3 column (particle size was 1.8 μm, length × inner diameter was 100.0 mm × 2.1 mm), and gradient elution was carried out using acetonitrile solution containing 0.1% (volume fraction) formic acid as moving phase. Positive electrospray ionization (ESI+) and mass spectrometry multiple reaction monitoring (MRM) methods were used to quantitatively determine 15 flavonol glycosides in made teas. The results indicated that the matrix standard curve of FGs showed a good linearity in the concentration range of 0.1-20.0 μg/ml, the limit of detection (LOD) was 0.08-0.23 μg/L, the limit of quantity (LOQ) was 0.25-0.76 μg/L, the relative standard deviation (RSD) was 1.30%-2.80%, and the peak out time was 3.60-7.40 min. Compared with the existing optimal detection technology, UPLC-QqQ-MS/MS method has fast analysis speed, high sensitivity and good stability, which can provide reference for improving the detection efficiency of tea quality components.

    Key words: tea;flavonol glycosides;ultra-high performance liquid chromatography combined with triple four-bar tandem mass spectrometry;mass spectrometry multiple reaction monitoring;optimization

    黃酮醇糖苷(Flavonols glycosides,F(xiàn)Gs)是茶葉中除兒茶素外較為重要的多酚類物質之一,大都由黃酮醇苷元(楊梅素、槲皮素、山柰酚等)或黃酮苷元(芹菜素等)與糖分子(葡萄糖、半乳糖、蕓香糖等)結合形成O-糖苷[1-2]。已有研究發(fā)現(xiàn),F(xiàn)Gs不僅對茶葉中的苦澀味及茶湯的光澤度、亮度具有重要作用[3-6],而且具有類黃酮物質的生理學共性,在生物體中發(fā)揮著抗氧化、清除活性氧自由基及抵御紫外線、抗菌抑菌等作用[7-8]。

    國內(nèi)外有很多FGs檢測方法的報道,目前常用的檢測方法主要包括紫外分光光度法(UV spectrophotometer)、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質譜檢測法(LC-MS)、超高效液相色譜法(UPLC)、毛細管電泳法(CE)及電化學檢測法(ED)等[9]。超高效液相色譜是一種基于HPLC系統(tǒng)開發(fā)的色譜技術,它充分利用了小粒度色譜柱、超高壓液相色譜泵的優(yōu)勢,能夠更靈敏、更快速地實現(xiàn)分離檢測,目前已在茶(Camellia sinensis L.)、洋蔥(Allium cepa L.)和銀杏(Ginkgo biloba L.)等多種植物的FGs檢測中得到應用[10-12]。Kim等[13]采用UPLC-PDA(超高效液相色譜-二極管陣列)建立了針對蕎麥、紅茶、野生歐芹FGs類化合物的檢測方法,共有12種FGs得到了較好的分離,但是其含量的線性范圍較大,為0.88~14.00 mg/kg;Jiang等[14]首次采用UPLC檢測到綠茶、烏龍茶和紅茶中18種FGs類化合物,但是分離時間較長,為30~60 min;劉陽等[2]研究了FGs在綠茶中的浸出特性,并基于常規(guī)HPLC檢測方法,分離并定量了11種與茶湯滋味相關性最高的黃酮苷類物質,但也存在分離時間長、定量準確度低的問題。UPLC與MS/MS的聯(lián)用,已經(jīng)成為植物化學組分研究的新趨勢,為茶葉中化合物的痕量分析提供了定量保證。本研究基于多種FGs標準品,在已有研究結果的基礎上,采用超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜法(UPLC-QqQ-MS/MS),并結合紫外光譜、質譜參數(shù)和色譜保留規(guī)律,測定茶葉中FGs種類和含量,以期實現(xiàn)快速分離和準確鑒定茶葉中的FGs。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    綠茶成品茶(西湖龍井)產(chǎn)自浙江省杭州市西湖區(qū)中國農(nóng)業(yè)科學院茶葉研究所示范園(120°5′21.39″E,30°10′57.19″N),原料品種為龍井43,選用清明前1芽1葉,由杭州龍冠實業(yè)公司提供;紅茶成品茶(滇紅金針)產(chǎn)自云南省農(nóng)業(yè)科學院茶葉研究所科研試驗基地(100°25′55.19″E,21°59′25.76″N),原料品種為云南勐海大葉種,選用清明前1芽1葉,由勐??h云茶科技有限公司提供。

    甲醇(質譜級)、乙腈(質譜級),產(chǎn)自德國Merck公司;甲酸(色譜級)、楊梅素-3-半乳糖苷(M-3-Ga)標準品、楊梅素-3-葡萄糖苷(M-3-G)標準品、槲皮素-3-半乳糖苷(Q-3-Ga)標準品、槲皮素-3-葡萄糖苷(Q-3-G)標準品、槲皮素-3-半乳糖-鼠李糖苷(Q-3-GaRh)標準品、槲皮素-3-葡萄糖-鼠李糖苷(Q-3-GRh)標準品、山柰酚-3-半乳糖苷(K-3-Ga)標準品、山柰酚-3-葡萄糖苷(K-3-G)標準品、山柰酚-3-半乳糖-鼠李糖苷(K-3-GaRh)標準品、山柰酚-3-葡萄糖-鼠李糖苷(K-3-GRh)標準品,所有標準樣品純度≥98%,均產(chǎn)自美國Sigma公司;試驗用水為Milli-Q超純水。

    1.2 儀器與設備

    艾卡A11基本型分析研磨機,產(chǎn)自德國IKA公司;BT125D型電子分析天平,產(chǎn)自德國Sartorius公司;Thermo Heraeus Fresco 17微量冷凍離心機,產(chǎn)自美國賽默飛世爾科技公司;KQ-500E型超聲波清洗機,產(chǎn)自昆山超聲波儀器公司;超高效液相色譜-三重四極桿-串聯(lián)質譜聯(lián)用儀(ACQUITY UPLC-QqQ-MS/MS H-Class),配有ACQUITY UPLC二極管陣列(PDA)檢測器、Acquity HSS T3色譜柱(粒徑為1.8 μm,柱長×內(nèi)徑為 100.0 mm×2.1 mm),產(chǎn)自美國Waters公司。

    1.3 試驗方法

    1.3.1 標準溶液的制備 準確稱取M-3-Ga標準品、M-3-G標準品、Q-3-Ga標準品、Q-3-G標準品、Q-3-GaRh標準品、Q-3-GRh標準品、K-3-Ga標準品、K-3-G標準品、K-3-GaRh標準品、K-3-GRh標準品,分別加入75%(體積分數(shù))甲醇溶液振蕩超聲處理(振蕩頻率為3 000 r/min,超聲功率為40 kHz,超聲時間為10 min),配制成質量濃度為1.0 mg/ml的母液。用75%(體積分數(shù))甲醇溶液稀釋上述標準品的母液,配制成質量濃度分別為0.1 μg/ml、1.0 μg/ml、2.0 μg/ml、10.0 μg/ml、20.0 μg/ml的標準工作溶液。

    1.3.2 供試樣品的前處理 供試樣品的前處理方法參照Zhang等[15-16]的方法。取適量成品綠茶、成品紅茶,用研磨機磨碎后精確稱取50 mg磨碎的成品綠茶、成品紅茶樣品,分別溶解于1 ml 75%(體積分數(shù))甲醇溶液中,用最大頻率(40 kHz)連續(xù)超聲處理10 min,之后再于12 000 r/min離心10 min,取500 μl上清液,加入500 μl 75%(體積分數(shù))甲醇溶液稀釋,然后過0.22 μm聚四氯乙烯(PTFE)濾膜,用于上機分析,每種茶設3個重復。

    1.3.3 儀器分析條件 色譜條件:采用Waters Acquity HSS T3色譜柱(粒徑為1.8 μm,柱長×內(nèi)徑為100.0 mm×2.1 mm,產(chǎn)自Waters公司,產(chǎn)地為美國Milford)進行分離。洗脫條件參照Zhang等[15,17]的方法,流動相A為0.1%(體積分數(shù))甲酸,流動相B為乙腈(混有體積分數(shù)為0.1%的甲酸),洗脫程序:0 min,5%乙腈;0.1~3.0 min,5%~20%乙腈;3.1~4.3 min,20%乙腈;4.4~9.0 min,20%~45%乙腈;9.1~11.0 min,45%~100%乙腈;11.1~13.0 min,100%乙腈;13.1~15.0 min,回到5%乙腈的初始條件。所有試驗的柱溫均設置為40 ℃,樣品溫度設置為6 ℃,流速為0.4 ml/min,進樣量為2 μl,紫外(UV)檢測波長為370 nm。

    質譜條件:采用Waters Xevo TQ質譜儀(Waters公司,產(chǎn)地為Milford, MA, USA),使用電噴霧電離源(ESI)正離子模式,毛細管電壓設為3.5 kV,源溫度設為150 ℃,脫溶劑溫度設為500 ℃,錐孔氣體流速設為50 L/h,脫溶劑氣體流速設為800 L/h。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    采用Mass Lynx 4.0軟件對MS檢測[含多反應監(jiān)測(MRM)]與紫外檢測器(PDA)檢測獲得的原始圖譜進行質譜峰或紫外光譜峰的提取和積分。標準曲線的繪制、FGs含量的換算采用Excel 2010。

    2 結果與分析

    2.1 茶葉中黃酮醇糖苷的定性檢測

    本研究在相同色譜條件、相同質譜條件下對不同茶葉中的黃酮醇糖苷(FGs)進行UPLC分析和MRM分析,結果表明,不同組分的FGs化合物在3.60~7.40 min全部洗脫分離,對應的UPLC色譜圖見圖1,根據(jù)最大波長吸光度,利用FGs標準品,結合二級質譜碎片,并與參考文獻[10]、[14]、[17]、[18]比對,鑒定出茶葉中15種FGs,相關定性參數(shù)見表1。

    由圖1還可以看出,楊梅素-3-葡萄糖-鼠李糖苷(M-3-GRh)、槲皮素-3-半乳糖-鼠李糖-葡萄糖苷(Q-3-GaRhG)、槲皮素-3-葡萄糖-鼠李糖-葡萄糖苷(Q-3-GRhG)、山柰酚-3-半乳糖-鼠李糖-葡萄糖苷(K-3-GaRhG)和山柰酚-3-葡萄糖-鼠李糖-葡萄糖苷(K-3-GRhG)分別對應1號峰、4號峰、5號峰、10號峰和11號峰,根據(jù)它們的相對分子質量、色譜保留的一般規(guī)律、二級質譜碎片和相關報道[10,14,17-18]進行綜合鑒定;其余FGs根據(jù)標準品進行驗證,M-3-Ga、M-3-G、Q-3-GaRh、Q-3-GRh、Q-3-Ga、Q-3-G、K-3-GaRh、K-3-GRh、K-3-Ga和K-3-G分別對應2、3、6、7、8、9、12、13、14和15號峰。根據(jù)色譜保留的一般規(guī)律,在反相色譜柱洗脫的過程中,按出峰時間排序依次為楊梅素糖苷(3個羥基)、槲皮素糖苷(2個羥基)、山柰酚糖苷(1個羥基),10號峰對應的K-3-GaRhG不符合這一規(guī)律;對于相同苷元,按出峰時間排序依次為三糖糖苷、二糖糖苷、單糖糖苷,而對于不同苷元的FGs,出峰順序為半乳糖苷類化合物、葡萄糖苷類化合物。由二級質譜碎片信息可知,楊梅素糖苷、槲皮素糖苷和山柰酚糖苷的主要碎片離子質荷比分別為319、303和287。

    2.2 黃酮醇糖苷標準品的質譜分析和色譜分析

    為了優(yōu)化FGs的定量方法,選取Q-3-GRh、M-3-Ga、Q-3-G、K-3-G、K-3-GaRh標準品,采用多反應監(jiān)測(MRM)和紫外檢測器(PDA)檢測方法分別建立FGs標準品峰面積與對應質量濃度梯度的標準曲線,綜合比較2種檢測方法的靈敏性和穩(wěn)定性。

    由表2可以看出,在2種檢測方法下,5種FGs標準品的峰面積與對應質量濃度梯度的標準曲線在0.1~20.0 μg/ml質量濃度范圍內(nèi)均具有較好的線性關系(R2>0.99)。從檢測限和定量限來看,利用MRM方法的檢測限(LOD)為0.08~0.23 μg/L,定量限(LOQ)為0.25~0.76 μg/L;而PDA方法,LOD為1.00~1.58 μg/L,LOQ為3.33~5.25 μg/L,整體上高于前者1~2個數(shù)量級。由此可見,MRM方法的檢測靈敏度更高。

    將提取的同一茶葉樣品在2種檢測方法下各重復檢測6次,結果發(fā)現(xiàn),色譜峰的保留時間波動均小于0.1 min,并且標準品峰面積的相對標準偏差(RSD)約為0.5%,說明MRM方法與PDA方法檢測的精密度良好。

    準確稱取6份質量為50 mg的綠茶樣品,按照方法1.3.2進行樣品前處理,然后每份樣品均采用MRM和PDA 2種方法檢測。如表3所示,MRM方法的5種FGs的RSD為1.30%~2.80%,PDA方法的5種FGs的RSD為2.70%~4.70%,說明MRM方法的重復性較PDA方法好。

    2.3 茶葉中黃酮醇糖苷的定量檢測

    由于質譜具有高靈敏度、方法穩(wěn)定等特點,加上茶葉中的FGs具有良好的色譜分離性能,因此本研究根據(jù)現(xiàn)有標準品,選擇MRM模式,利用二級質譜準確定量綠茶、紅茶中的FGs,優(yōu)化后的FGs質譜參數(shù)見表4,其中母離子均采用加氫離子峰[M+H]+,子離子則為黃酮醇苷元離子。

    針對未購置標準品的FGs進行相對定量,具體參照王智聰?shù)萚10]的公式進行計算。選取決定系數(shù)較高的標準曲線(以M-3-Ga為標準品),用外標法準確定量成茶中的M-3-Ga含量,成茶中其他FGs的含量則根據(jù)M-3-Ga質譜峰面積及含量確定。由于無法準確得到無標準品FGs的質譜響應差異,因此假定FGs與M-3-Ga質譜響應一致,具體公式如下:

    Cj=AjMjCiDV/mAiMi

    式中:Cj、Ci分別表示成茶茶湯中待測FGs含量、M-3-Ga含量;Aj、Ai分別表示待定量FGs化合物的峰面積、M-3-Ga的峰面積;Mj、Mi分別表示待定量FGs化合物的相對分子質量、M-3-Ga的相對分子質量;D表示進樣前稀釋倍數(shù);V表示提取液體積;m表示樣品質量。

    如表5所示,不同F(xiàn)Gs組分含量在綠茶和紅茶間存在一定差異。綠茶中總黃酮醇糖苷含量為5 492.40 mg/kg,而紅茶中總黃酮醇糖苷含量為5 910.19 mg/kg,高于綠茶中總黃酮醇糖苷含量。在綠茶中,K-3-GRhG、Q-3-GRhG的含量較高,分別為1 078.03 mg/kg、881.08 mg/kg,而含量較低的是Q-3-GaRh、K-3-GaRh、K-3-G,分別為14.69 mg/kg、14.80 mg/kg、35.19 mg/kg;在紅茶中,K-3-GRhG含量最高,達2 027.34 mg/kg,而Q-3-GaRh、K-3-GaRh、K-3-G的含量較低,分別為47.91 mg/kg、42.92 mg/kg、22.59 mg/kg。從不同苷元類型的黃酮醇糖苷含量來看,綠茶中楊梅素糖苷(M-3-GRh、M-3-Ga、M-3-G)總含量為940.18 mg/kg,顯著高于紅茶中楊梅素糖苷總含量(673.64 mg/kg);槲皮素糖苷(Q-3-GaRhG、Q-3-GRhG、Q-3-GaRh、Q-3-GRh、Q-3-Ga、Q-3-G)總含量在綠茶中最高,為2 434.29 mg/kg,顯著高于紅茶中槲皮素糖苷總含量(2 061.34 mg/kg);而山柰酚糖苷(K-3-GaRhG、K-3-GRhG、K-3-GaRh、K-3-GRh、K-3-Ga、K-3-G)總含量在紅茶中占絕對優(yōu)勢,為3 175.21 mg/kg,顯著高于綠茶中的山柰酚糖苷總含量(2 117.93 mg/kg)。

    本研究利用質譜MRM檢測法,基于10種標準品對茶葉FGs檢測的質譜條件進行了優(yōu)化,在成品茶(綠茶、紅茶)中鑒定出15種FGs,包括3種楊梅素糖苷、6種槲皮素糖苷和6種山柰酚糖苷。此外,本研究對已有標準品的FGs進行了絕對定量,其余5種基于王智聰?shù)萚10]的方法進行相對定量分析。與現(xiàn)有主流方法[3, 10](表6)相比,優(yōu)化后的質譜條件使FGs化合物的檢測時間縮短了30%,并且組分的分離度更強。Wu等[3]利用負離子檢測模式比較了UPLC-QqQ-MS/MS與HPLC-MS的差異,結果表明,UPLC-QqQ-MS/MS法的檢測靈敏度高于HPLC-MS法。而本研究采用正離子模式,進一步證實了在相同儀器設備條件下由二級質譜(MRM檢測方法)建立的FGs檢測方法的檢出限整體上低于PDA方法1~2個數(shù)量級,靈敏度更高。與Wu等[3]的方法相比,用正離子模式MRM方法檢測的FGs質譜峰響應強度更高,能夠有效降低樣品機制效應(即干擾組分對目標組分電離的影響)對分析的干擾程度,有利于低質量濃度FGs的定量分析。

    3 討論

    3.1 MRM檢測方法的優(yōu)勢

    本研究選取5種黃酮醇糖苷標準品(Q-3-GRh、M-3-Ga、Q-3-G、K-3-G、K-3-GaRh),分別同時采用MRM檢測方法和PDA檢測方法,基于方法的靈敏度和穩(wěn)定性指標分析比較了二者對于茶葉中FGs的定性、定量效果。結果顯示,在MRM方法下,成茶中15種FGs被定量測定,并且FGs的基質標準曲線在0.1~20.0 μg/ml質量濃度范圍內(nèi)線性關系良好,其定量限為0.25~0.76 μg/L,檢測限為0.08~0.23 μg/L,以上參數(shù)均優(yōu)于PDA檢測方法。同時,本研究利用目標化合物的二級質譜碎片進行定量,可以選擇性地檢測被定量化合物,使同分異構體(如M-3-Ga/M-3-G、Q-3-GaRh/Q-3-GRh)得到較好分離。此外,根據(jù)精密度試驗和重復性試驗的相對標準偏差,MRM檢測方法的穩(wěn)定性優(yōu)于PDA檢測方法。由此可見,基于二級質譜MRM模式建立的茶葉中FGs的MRM檢測方法靈敏度和分離度高、穩(wěn)定性好。然而,當不需要較高的靈敏度和特異的分離度時,PDA檢測方法可以作為MRM檢測的1種快速且經(jīng)濟的替代方法,茶葉中主要FGs化合物的色譜峰根據(jù)其保留時間能夠輕松地得到鑒定,并通過積分進行定量分析[21]。

    3.2 MS(MRM)檢測條件的優(yōu)化

    樣品前處理對于樣品鑒定和結果的準確性有至關重要的影響[22]。溶劑法是黃酮類化合物常用的提取方法,利用熱水法和有機溶劑法均能提取黃酮醇苷類物質。陳叢瑾等[23]研究發(fā)現(xiàn),黃酮苷類物質易溶于水以及甲醇、乙醇等強極性溶劑,高濃度的醇易于提取苷元,而用60%(體積分數(shù))乙醇或甲醇能有效提取含苷類的黃酮類化合物。盡管沸水也能夠提高黃酮苷類物質提取率,但易將蛋白質、糖類等化合物溶于水中,從而降低了黃酮醇苷的浸出率。因此,本研究以75%(體積分數(shù))甲醇作為提取劑,結果顯示,色譜峰分離效果優(yōu)于其他試驗結果[2-3,13,20-21]。超高效液相色譜(UPLC)的出峰時間通常由物質本身的性質、固定相(色譜柱填料、柱長短、粒徑)、流動相、柱溫和流速等因素共同決定。本研究采用T3色譜柱,與Kim等[13-14]采用的C18色譜柱相比,T3色譜柱對極性較強的FGs類化合物的保留效果好。Kim等[13]選用含有1.0%(體積分數(shù))甲酸的15%(體積分數(shù))乙腈作為流動相進行等度洗脫,本研究使用含有0.1%(體積分數(shù))甲酸的99.9%(體積分數(shù))乙腈作為流動相,進行梯度洗脫,并且在分離時間、峰型方面的優(yōu)勢明顯,能夠保證短時間內(nèi)將樣品中的強保留組分洗脫。此外,在本研究中柱溫設為40 ℃,流速設為0.4 ml/min,相較于Kim等[13-14]的方法,在溫度、流速上均提高了50%,由此說明,在相同儀器條件下,適當提高柱溫、流速有利于縮短FGs的分離時間,提高分離度。

    3.3 黃酮醇糖苷在成茶中的積累與分布

    不同茶樹品種、產(chǎn)地的生長環(huán)境和加工工藝造成了茶葉品質成分的差異。有研究發(fā)現(xiàn),UV-B輻射的增強、溫度的升高均能夠提升植物體的FGs含量[24-25]。本研究發(fā)現(xiàn),與浙江茶區(qū)相比,云南茶區(qū)緯度低、海拔高,紫外線強度相對較高,加上較高的環(huán)境溫度會誘導茶樹體內(nèi)的碳代謝,從而促進多酚類物質(FGs、兒茶素等)的積累;相反,在浙江茶區(qū),緯度高,海拔低,春季溫度相對較低,有利于加速茶樹體內(nèi)的氮代謝,促進茶樹體內(nèi)氨基酸的合成,而茶樹類黃酮物質的合成相對受到抑制[26-27]。FGs對于茶湯的苦味、澀味具有增強作用,一般認為酚氨比值低的茶鮮爽味高,適制綠茶,而酚氨比值高的茶苦味和澀味較高,適合加工成紅茶[18]。由此可見,云南茶區(qū)的茶葉更有利于加工成紅茶、黑茶等發(fā)酵茶,而浙江茶區(qū)的環(huán)境條件為綠茶的加工提供了品質保證。

    從品種的適制性來看,不同葉型茶樹品種的適制性也有差異。研究發(fā)現(xiàn),與小葉種茶樹相比,大葉種茶樹的多酚類物質含量高10%以上,因此更適合加工成紅茶,而小葉種茶樹的氨基酸含量高,適合制成綠茶[28]。戴偉東等[18]對FGs與茶樹品種適制性的研究發(fā)現(xiàn),黃酮醇半乳糖苷化代謝旺盛的茶樹品種適制綠茶,而黃酮醇葡萄糖苷化代謝旺盛的茶樹品種適制紅茶。FGs組分中的K-3-G/K-3-Ga組分被認為與茶湯澀味高度相關,其含量的積累變化規(guī)律對茶葉的適制性起到了指示作用。而在本研究中,成品紅茶中的K-3-G含量及其葡萄糖苷化程度(K-3-G與K-3-Ga的比值)均小于綠茶成品茶,推測茶葉在發(fā)酵過程中可能降低了K-3-G含量,從而使紅茶的澀味降低。

    陳宗懋等[29]的統(tǒng)計結果顯示,紅茶中的總FGs含量要高于綠茶,這與本研究結果一致。但Peterson等[30]的研究結果與之相反,即在綠茶、烏龍茶中,總FGs含量則高于紅茶。Jiang等[14]通過UPLC方法,在3類成品茶中共檢測到18種FGs,發(fā)現(xiàn)綠茶中的山柰酚糖苷組分含量最高,而紅茶中的槲皮素糖苷含量占絕對優(yōu)勢。本研究結果則與之相反,即在綠茶中以槲皮素糖苷為主,而在紅茶中則以山柰酚糖苷為主。由此可見,茶葉中的FGs含量可能受多種因素影響而呈動態(tài)變化,對不同茶類FGs的積累與分布規(guī)律仍需深入研究。

    參考文獻:

    [1] MATSUBARA Y, KUMAMOTO H, IIZUKA Y, et al. Studies on physiologically active substances in citrus peel. Part Ⅱ. Structure and hypotensive effect of flavonoid glycosides in Citrus unshiu peelings[J]. Agricultural and Biological Chemistry, 1985, 49: 909-914.

    [2] 劉 陽,陳根生,許勇泉,等. 沖泡過程中西湖龍井茶黃酮苷類浸出特性及滋味貢獻分析[J].茶葉科學,2015, 35(3): 217-224.

    [3] WU Y H, JIANG X L, ZHANG S X, et al. Quantification of flavonol glycosides in Camellia sinensis by MRM mode of UPLC-QqQ-MS/MS[J]. Journal of Chromatography B, 2016, 1017: 10-17.

    [4] 林 杰,段玲靚,吳春燕,等. 茶葉中的黃酮醇類物質及對感官品質的影響[J].茶葉,2010, 36(1): 14-18.

    [5] 戴前穎,夏 濤,高麗萍,等. 綠茶湯呈色物質研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)大學學報,2011, 38(6): 887-891.

    [6] 朱 博,夏 濤,高麗萍,等. 綠茶茶湯中黃酮醇及其苷類的測定方法以及對茶湯色度的影響[J].食品與發(fā)酵工業(yè), 2009,35(2):146-150.

    [7] WANG S Y, BOWMAN L, DING M. Methyl jasmonate enhances antioxidant activity and flavonoid content in blackberries (Rubus sp.) and promotes antiproliferation of human cancer cells[J]. Food Chemistry, 2008, 107(3): 1261-1269.

    [8] FERREYRA M L F, RIUS S P, CASATI P. Flavonoids:biosynthesis, biological functions, and biotechnological applications[J].Frontiers in Plant Science,2012, 3: 1-10.

    [9] 方 芳,王鳳忠. 植物黃酮醇的檢測方法研究進展[J].食品工業(yè)科技, 2018, 39(11): 327-332.

    [10]王智聰,沙躍兵,余笑波,等. 超高效液相色譜-二極管陣列檢測-串聯(lián)質譜法測定茶葉中15種黃酮醇糖苷類化合物[J].色譜, 2015, 33(9): 974-980.

    [11]張維冰,王智聰,張凌怡. 超高效液相色譜-光電二極管陣列檢測-串聯(lián)四級桿質譜法測定紅洋蔥中黃酮醇及其糖苷類化合物[J].分析化學,2014, 42(3): 415-422.

    [12]ZHAO Y Y, GUO H Z, CHEN Y G, et al. Simultaneous quantification of flavonol glycosides, terpene lactones, polyphenols and carboxylic acids in Ginkgo biloba leaf extract by UPLC-QTOF-MSE based metabolomic approach[J]. Journal of Pharmaceutical Sciences, 2017, 26(11): 789-804.

    [13]KIM J C, SHIM Y S. Method validation of analytical method for 12 flavonol glycosides in foods using ultra high-performance liquid chromatography coupled with photodiode array detection[J]. Food Acience and Biotechnology, 2016, 25(3): 659-664.

    [14]JIANG H Y, ENGELHARDT U H, THRNE C, et al. Determination of flavonol glycosides in green tea, oolong tea and black tea by UHPLC compared to HPLC[J]. Food Chemistry, 2015, 183: 30-35.

    [15]ZHANG Q F, SHI Y Z, MA L F, et al. Metabolomic analysis using ultra-performance liquid chromatography-quadrupole-time of flight mass spectrometry (UPLC-Q-TOF MS) uncovers the effects of light intensity and temperature under shading treatments on the metabolites in tea[J]. PLoS One, 2014, 9(11): e112572.

    [16]DE VOS R C, MOCO S, LOMMEN A, et al. Untargeted large-scale plant metabolomics using liquid chromatography coupled to mass spectrometry[J]. Nature Protocols, 2007, 2(4): 778-791.

    [17]VRHOVSEK U, MASUERO D, GASPEROTTI M, et al. A versatile targeted metabolomics method for the rapid quantification of multiple classes of phenolics in fruits and beverages[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012, 60(36): 8831-8840.

    [18]戴偉東,解東超,呂美玲,等. 黃酮醇糖苷與茶樹品種適制性關系[J].食品科學, 2017, 38(16): 104-109.

    [19]吳春燕,須海榮, HRITIER J,等.不同茶樹品種中黃酮苷含量的測定[J].茶葉科學, 2012, 32(2): 122-128.

    [20]RIO D D, STEWART A J, MULLEN W, et al. HPLC-MSn analysis of phenolic compounds and purine alkaloids in green and black tea[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2004, 52(10): 2807-2815.

    [21]BENVENUTI M E, OCONNOR A. Melamine, ammeline and cyanuric acid analysis by UPLC/MS/MS and UPLC/PDA[EB/OL].[2020-01-02]. http://www.waters.com/wa-ters/library.htm.

    [22]王旭堂,刁志祥,張培楊,等. 超高液相色譜熒光檢測法測定鵪鶉蛋和鴿蛋中甲砜霉素殘留量[J].江蘇農(nóng)業(yè)學報, 2020, 36(1): 206-211.

    [23]陳叢瑾,黃克瀛,李德良,等. 植物中黃酮類化合物的提取方法研究概況[J].生物質化學工程, 2007,41(3):42-46.

    [24]梁 濱, 周 青. UV-B輻射對植物類黃酮影響的研究進展[J].中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學報, 2007, 15(3): 191-194.

    [25]駱耀平. 茶樹栽培學[M]. 5版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社, 2015: 88-100.

    [26]宋楚君,范方媛,龔淑英,等. 不同產(chǎn)地紅茶的滋味特征及主要貢獻物質[J].中國農(nóng)業(yè)科學, 2020, 53(2): 383-394.

    [27]郭世昌,常有禮,胡 非,等. 緯度和海拔高度對云南地面紫外線強度影響的數(shù)值試驗[J].云南地理環(huán)境研究,2004,16(1):9-13.

    [28]江昌俊. 茶樹育種學[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社, 2005: 93-95.

    [29]陳宗懋,甄永蘇. 茶葉的保健功能[M].北京:科學出版社, 2014: 35-56.

    [30]PETERSON J, DWYER J, BHAGWAT S, et al. Major flavonoids in dry tea[J]. Journal of Food Composition and Analysis, 2005, 18(6): 487-501.

    (責任編輯:徐 艷)

    收稿日期:2020-05-14

    基金項目:國家重點研發(fā)計劃項目(2016YFD0200900);國家茶產(chǎn)業(yè)技術體系建設專項(CARS-19)

    作者簡介:董 方(1992-),男,陜西西鄉(xiāng)人,碩士研究生,研究方向為茶樹栽培生理與生態(tài)。(E-mail)18305811752@163.com

    通訊作者:張群峰,(E-mail)hill@tricaas.com

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