ABO血型正反定型不一致原因及對策分析

薛雷

（周口市中心醫(yī)院輸血科，河南 周口466000）

ABO血型是發(fā)現(xiàn)最早,對臨床輸血最有意義的血型系統(tǒng)。它的特征之一就是紅細(xì)胞上存在血型抗原和血清中存在血型抗體。正常情況下要求正反定型一致才能確定ABO血型。正確的ABO血型鑒定是確保臨床輸血安全的前提條件，ABO血型不合的輸血會發(fā)生嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng),危及患者的生命。在ABO血型鑒定過程中，常因年齡、亞型、某些惡性疾病、不規(guī)則抗體陽性、高效價冷凝集素、異常血漿蛋白等因素導(dǎo)致患者血型鑒定困難，為臨床安全輸血埋下隱患[1,2]。為了分析臨床常見ABO血型正反定型不一致的原因并找到各自適合的輸血對策,我們對科室近一年來送檢的住院患者ABO血型標(biāo)本進(jìn)行了分類研究,報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2017年6月-2018年10月,我科共收到住院患者血型鑒定20256例?；颊吣挲g6月-91歲,來源于全院各個科室。同一患者多次入院重復(fù)送檢的標(biāo)本只計入一次。所有標(biāo)本均為EDTA抗凝全血3ml。

1.2 儀器與試劑 抗A抗B、抗AB、抗H、抗A1血型定型試劑和人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒、不規(guī)則抗體篩查用紅細(xì)胞和普細(xì)胞均來自上海血液生物醫(yī)藥有限公司。ABO、RhD血型檢測卡來自于美國伯樂。伯樂IH-1000全自動血型分析儀、BASO2005-1離心機(jī)等。

1.3 血型鑒定方法 伯樂IH-1000全自動血型分析儀采用微柱凝膠法對所有送檢標(biāo)本進(jìn)行血型鑒定。ABO血型鑒定不一致者，重新抽取標(biāo)本進(jìn)行鹽水介質(zhì)試管法復(fù)檢,并參考疑難血型三步分析法[3]進(jìn)行處理。判斷ABO血型正反定型不一致標(biāo)準(zhǔn)：⑴正反定型結(jié)果不一致；⑵正反定型結(jié)果一致，與符合國家質(zhì)量要求的試劑反應(yīng)后，正定型為++或更弱的凝集（含出現(xiàn)混合外觀樣凝集），或者反定型為+或更弱的凝集[4]。

ABO血型正反定型試管法、ABO血型亞型確認(rèn)試驗、不規(guī)則抗體篩查及鑒定試驗、吸收放散試驗均按照輸血技術(shù)操作規(guī)程[5]和相應(yīng)試劑說明書進(jìn)行。如果仍有無法解釋的的正反型不一致標(biāo)本送周口市中心血站進(jìn)一步檢驗。

2 結(jié)果

2.1 ABO血型正反定型不一致分類 去除標(biāo)本乳糜，血液凝固等人為外在因素，采用鹽水介質(zhì)試管法復(fù)檢患者ABO血型正反定型仍不一致標(biāo)本78例。其中，正定型減弱或缺失4例，反定型減弱或缺失52例，反定型額外反應(yīng)9例，正定型反定型同時額外反應(yīng)13例。見表1。

2.2 ABO血型正反定型不一致原因分類及對策78例ABO正反定型不一致標(biāo)本中，生理因素引起55例，疾病因素引起10例，不規(guī)則抗體引起7例，非特異性抗體引起6例。表2。

表1 ABO血型正反定型不一致分類

表2 ABO血型正反定型不一致原因分類及對策

3 討論

全自動血型分析儀采用卡式法鑒定ABO血型，具有在靈敏度、自動化、工作效率等方面的優(yōu)勢,已經(jīng)成為各大醫(yī)院輸血科血型鑒定的常規(guī)方法。但該方法也有一定的局限性。由于微柱凝膠卡的微孔分子篩作用,標(biāo)本中的纖維蛋白、M蛋白、高效價冷凝集素、自身抗體等會引起抗原抗體反應(yīng)的假陽性。ABO亞型，血型抗原減弱和血型抗體效價較低的標(biāo)本，抗原抗體來不及“搭橋”就直接被離心到微柱底部，造成假陰性[6，7]。鹽水介質(zhì)試管法具有可增加離心時間，加大抗原抗體反應(yīng)量，可選擇抗原抗體反應(yīng)溫度等優(yōu)點,是一種經(jīng)典而不可替代的血型鑒定方法[8]。我們對ABO血型正反定型初篩不一致的標(biāo)本采用鹽水介質(zhì)試管法復(fù)檢。報告中由生理因素引起ABO正反定型不一致者55例，占70.5%。其中52例患者為1歲以下的嬰兒或70歲以上的老人，這與張妍等報道[9]相符。3例患者為亞型。ABO血型抗原在5-6周的胚胎紅細(xì)胞表面便可測得，至2-4歲可達(dá)成人水平。出生后3-6月開始合成抗A或（和）抗B，5-6歲達(dá)成人水平，隨著年齡的增長會逐漸減弱[10]。因此嬰兒和老人紅細(xì)胞抗原或抗體的減弱或缺失是正常的生理現(xiàn)象。我們對6個月以下嬰兒不做反定型,正定型用微柱凝膠卡和鹽水介質(zhì)試管法相互驗證。70歲以上老年人反定型表現(xiàn)較弱時采用鹽水介質(zhì)試管法加大血清量、在4℃條件下反應(yīng)和延長離心時間的方法。A和B亞型紅細(xì)胞與A和B紅細(xì)胞的主要區(qū)別表現(xiàn)在紅細(xì)胞膜上抗原決定簇的數(shù)量上,亞型的紅細(xì)胞膜上抗原決定簇數(shù)量比較少,血型鑒定時有時肉眼幾乎看不到凝集[11]。報告中共發(fā)現(xiàn)亞型3例。1例是正定型為O型，反定型為B型，進(jìn)一步血清學(xué)試驗確定為B亞型。2例是正定型為A型,反定型為O型，進(jìn)一步血清學(xué)試驗確定為A亞型。在亞型鑒定試驗中，可增加抗AB、抗H、抗A1抗體及A1、A2細(xì)胞和吸收放散試驗。仍不能鑒定者，可送有條件的上級實驗室進(jìn)行鑒定。

報告中由疾病因素引起ABO正反定型不一致者10例，占12.8%。血漿蛋白異常7例，抗原減弱或缺失3例。多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、霍奇金淋巴瘤等疾病患者血漿中會出現(xiàn)異常增生的單克隆免疫球蛋白或輕鏈、高濃度纖維蛋白原等使紅細(xì)胞呈緡錢狀凝集[12]。此類標(biāo)本我們用生理鹽水洗滌患者紅細(xì)胞3次，用鹽水介質(zhì)試管法做正定型。用O細(xì)胞吸收后并加入等量生理鹽水后的血漿做反定型。急性白血病、MDS及某些惡性腫瘤可影響紅細(xì)胞膜上血型抗原的合成,導(dǎo)致紅細(xì)胞膜上抗原量的不足，給血型鑒定帶來一定的困難[13]。報告中2例為急性白血病，1例為MDS,初檢ABO血型正反定型不一致。此類標(biāo)本我們增加抗AB、吸收放散試驗和血型物質(zhì)檢測并結(jié)合臨床資料,進(jìn)行血型鑒定。

高效價的特異性抗體可在鹽水介質(zhì)中凝集含相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞而引起ABO血型正反定型不一致[15]。報告中由不規(guī)則抗體陽性引起ABO血型正反定型不一致者7例,占9.0%。經(jīng)過篩查和譜細(xì)胞鑒定抗體的特異性，發(fā)現(xiàn)抗D 2例，抗E 1例，抗M 3例，抗P11例。在發(fā)現(xiàn)ABO正反定型不一致且患者血清與O型細(xì)胞發(fā)生凝集而自身對照試驗陰性時,應(yīng)該對患者進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩選及特異性鑒定。反定型試劑選用陽性不規(guī)則抗體相應(yīng)抗原表達(dá)為陰性的紅細(xì)胞,避免不規(guī)則抗體對ABO反定型的干擾。

非特異性抗體是指血漿中的冷抗體和自身抗體。報告中由非特異性抗體引起ABO血型正反定型不一致6例,占7.7%。其中冷抗體引起2例,自身抗體引起4例。正常人血清中存在少量冷凝集素，一般對ABO血型鑒定沒有影響,但在某些病理情況下患者體內(nèi)會存在高效價冷凝集素。此類抗體為IgM類，在室溫條件下可與紅細(xì)胞發(fā)生非特異性凝集。我們將患者紅細(xì)胞用37℃生理鹽水洗滌3次并在室溫（20℃以上）條件下進(jìn)行正定型，將患者血清用O型紅細(xì)胞在4℃下充分吸收，待吸收完全后與反定型細(xì)胞在37℃水浴下反應(yīng)，鑒定反定型。自身免疫性溶血病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿等患者血清中會存在自身抗體并致敏紅細(xì)胞，引起正定型和反定型的額外反應(yīng)。我們將患者紅細(xì)胞生理鹽水洗滌后做熱放散試驗，放散后的紅細(xì)胞用作正定型；將用生理鹽水洗滌后的患者紅細(xì)胞吸收血清，吸收后的血清用作反定型。

綜上所述，ABO血型鑒定是一項看似簡單，卻又影響因素繁多，與臨床聯(lián)系密切的工作。在遇到ABO正反定型不一致時,要求技術(shù)人員加強(qiáng)與臨床的溝通，結(jié)合病歷資料選取有針對性的試驗進(jìn)行分析與驗證，鑒定出準(zhǔn)確的ABO血型,為臨床安全、有效、及時地輸血提供有力的保證。