云南白藥活性肽牙膏成分有效性研究及牙膏臨床驗(yàn)證

張秋霞 劉 萍 寧科功 伍 鵬 蔡 英 李勁峰 李黎仙 陳 邈 孔祥燁 高 鷹

(云南白藥集團(tuán)股份有限公司,云南 昆明 650217)

引言

云南白藥散劑創(chuàng)始于1902年，主要功能為化瘀止血，活血止痛，解毒消腫。用于跌打損傷，瘀血腫痛，吐血，咳血，便血，瘡瘍腫毒及軟組織挫傷，潰瘍病出血，以及皮扶感染性疾病。迄今為止在眾多的臨床研究中顯示，對(duì)于多種出血性疾病都有明顯的療效，可以加速止血、縮短病程。其機(jī)理主要是縮短出血時(shí)間和凝血時(shí)間，云南白藥能使凝血酶原時(shí)間縮短，增加凝血酶原含量[1]，并能誘導(dǎo)血小板的聚集和釋放[2]。對(duì)于創(chuàng)傷出血、消化道出血、呼吸道出血、出血性腦病，婦科、小兒科、五官科出血性疾病都有很好的治療效果；同時(shí)云南白藥通過(guò)抑制組胺和PG炎癥物質(zhì)的釋放，有效減弱炎性介質(zhì)所引起的腫脹和毛細(xì)血管滲透性；改善微循環(huán)，促進(jìn)組織生長(zhǎng)因子增殖[3]，使炎癥組織得到良好修復(fù)。

美洲大蠊(Periplanetaamericana)提取物主要化學(xué)成分為肽類、多種氨基酸、核苷類、信息素類、多元醇、蛋白質(zhì)、糖類、生物堿類、有機(jī)酸 以及脂肪酸等化合物[4,5]。在臨床主要應(yīng)用于消化科、口腔科、外科、耳鼻喉科等創(chuàng)面修復(fù)的治療中。功能為促進(jìn)組織修復(fù)，調(diào)節(jié)免疫功能等[6-8]，外用特別對(duì)燒傷、燙傷、壓瘡等修復(fù)效果顯著。

利用云南白藥提取物和美洲大蠊提取物組合成更有效的活性組合物，并用于牙膏產(chǎn)品中使其發(fā)揮良好的保護(hù)口腔組織、減少口腔問(wèn)題的作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1主要試藥

云南白藥活性肽組合物(云南白藥美洲大蠊組合物BYPA)由云南白藥集團(tuán)股份有限公司提供。氯化鈉，二甲苯，丙酮，甲醛，苯酚，冰醋酸，水合氯醛，乙醇，30%過(guò)氧化氫為常規(guī)分析純?cè)噭Ｒ牢乃妓{(lán)：深藍(lán)色粉末，規(guī)格5g/瓶，批號(hào)M3474，MP Biomedicals，LLC，法國(guó)。白砂糖：耿馬三山牌白砂糖。亞甲藍(lán)：北京化工廠，批號(hào)860522。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICR小鼠，SPF級(jí)，26～30g，雄性，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(川)2013-24，購(gòu)自成都達(dá)碩生物科技有限公司。

KM小鼠，SPF級(jí)，26～30g，雄性，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(川)2013-24，購(gòu)自成都達(dá)碩生物科技有限公司。

SD大鼠，SPF級(jí)，200～220g，雄性，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(川)2013-24，購(gòu)自成都達(dá)碩生物科技有限公司。

Hartley豚鼠：健康一級(jí)，雄性，200～300g，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(川)2013-14，購(gòu)自四川省動(dòng)物管理委員會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)。

日本大耳白兔：健康一級(jí)，雄性，2.0～3.0kg，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(川)2013-14，購(gòu)自四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)。

1.3動(dòng)物飼養(yǎng)

動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng)于四川大學(xué)華西藥學(xué)院動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施使用許可證號(hào)：SYXK(川)2013-113號(hào)。飼養(yǎng)條件：籠養(yǎng)，小鼠、大鼠、豚鼠5只/籠；家兔2只/籠。自然照明，自由覓食及攝水。室溫23±1℃；濕度50%～60%。動(dòng)物飼料購(gòu)自四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飲水為高壓滅菌蒸餾水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1組合物對(duì)二甲苯所致ICR小鼠耳殼急性炎癥反應(yīng)的影響

雄性SPF級(jí)ICR小鼠，禁食12小時(shí)后稱重，挑選體重26～30g合格動(dòng)物，按體重隨機(jī)分組，隨機(jī)均分為3組：空白正常組、模型組、受試品組，每組10只。除正常組小鼠右耳給予50μl/只生理鹽水外，其余各組小鼠右耳在給予50μl/只二甲苯刺激后，分別于15分鐘、30分鐘、45分鐘耳廓局部給予不同受試品溶液70μl/只，溶媒對(duì)照組給予等體積生理鹽水，60分鐘時(shí)頸椎脫臼處死動(dòng)物，沿耳廓基線剪下兩耳，盲法用打孔器(直徑7mm)分別在相同部位打下圓耳片、1/萬(wàn)電子天秤稱重。以左右兩耳片重量之差作為耳腫脹度。

腫脹抑制率=(模型組腫脹度-給藥組腫脹度)/ 模型組腫脹度×100%

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS19.0軟件One-Way ANOVA分析進(jìn)行組間差異的顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 受試品對(duì)二甲苯所致ICR小鼠耳殼急性炎癥的影響

由表1可見(jiàn)，在本實(shí)驗(yàn)條件下，二甲苯作用1小時(shí)后，肉眼可見(jiàn)模型組小鼠左耳紅腫、增厚明顯；在二甲苯作用1小時(shí)期間，間隔三次給藥后，與模型組(給予生理鹽水)比較，受試品組對(duì)二甲苯所致小鼠耳殼炎性腫脹有56.8%的抑制作用，腫脹度與模型對(duì)照組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。

2.2組合物對(duì)小鼠斷尾出血的止血作用比較研究

取SPF級(jí)雄性ICR種小鼠，挑選體重22～25g合格動(dòng)物，按體重隨機(jī)分組，隨機(jī)均分為2組：空白對(duì)照組、受試品組，每組10～12只。以尾部浸泡接觸法給藥，將小鼠固定于小鼠筒中，尾尖部2cm浸泡于400μl的受試品溶液或生理鹽水中，給藥時(shí)間30分鐘，間隔4小時(shí)后，重復(fù)給藥1次。末次給藥30分鐘后，以利剪在小鼠距尾尖1.5cm處剪斷，待血液自然流出時(shí)開(kāi)始計(jì)錄出血時(shí)間，每隔10s用事先已稱重的棉球吸取血滴，直至出血自然停止(棉球吸時(shí)無(wú)血)，1/萬(wàn)天平上稱量帶血棉球重量。按下式計(jì)算各組動(dòng)物出血量：

出血量=帶血棉球重量-初始棉球重量 (毫克)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS19軟件One-Way ANOVA分析進(jìn)行組間差異的顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 受試品對(duì)清醒小鼠斷尾出血的影響

由表2可見(jiàn)，與空白溶媒對(duì)照組比較，受試品對(duì)清醒小鼠斷尾出血時(shí)間有明顯縮短(P<0.05)，受試品對(duì)清醒小鼠斷尾出血量均值有減少的傾向。

2.3組合物對(duì)豚鼠口腔潰瘍的治療作用比較研究[9-11]

取健康雄性豚鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后挑選體重200～300g合格動(dòng)物，用乙醚將豚鼠麻醉后，用內(nèi)徑0.6cm、長(zhǎng)3cm的塑料管垂直固定于豚鼠口腔粘膜表面，在管內(nèi)放入充分浸潤(rùn)了40%冰醋酸的棉簽，60秒后將棉簽和塑料管取出，并迅速用水沖洗創(chuàng)面1分鐘。于造模24小時(shí)后，測(cè)量動(dòng)物口腔潰瘍面積，并按隨機(jī)分為空白溶媒組、受試品組。用醫(yī)用棉簽分別浸潤(rùn)受試樣品后、充分涂抹每只動(dòng)物口腔潰瘍局部、并保持藥棉與潰瘍面接觸60秒，每天上下午各給藥1次， 連續(xù)給藥直至每只動(dòng)物口腔潰瘍完全愈合?？瞻兹苊浇M同法給予生理鹽水。實(shí)驗(yàn)中前5天期間，每天盲法測(cè)量動(dòng)物口腔潰瘍面積，按下式計(jì)算給藥后潰瘍面積變化百分率：

潰瘍面積變化百分率=Sx/ S0×100%

其中，S0為給藥前潰瘍面積(mm2)，Sx為給藥后各天潰瘍的面積(mm2)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS19.0軟件One-Way ANOVA分析進(jìn)行組間差異的顯著性檢驗(yàn)。

本實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)：40%冰醋酸可致豚鼠口腔面頰側(cè)粘膜急性炎癥反應(yīng)，在粘膜局部可見(jiàn)明顯的紅腫、黃白色假膜、繼而粘膜壞死、脫落，形成潰瘍面?？谇粷?cè)炷：?，每?次局部給予不同受試品，每日觀察動(dòng)物口腔潰瘍面積的變化情況，并記錄每只豚鼠口腔潰瘍的愈合時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3受試品對(duì)豚鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍的治療作用

由表3可見(jiàn)，藥后1～4天期間，受試品組口腔潰瘍面積與同期溶媒對(duì)照組比較有相應(yīng)減小，第4天減小明顯(P<0.01)；同時(shí)受試品組口腔潰瘍完全愈合時(shí)間也明顯小于溶媒對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)果表明受試品對(duì)豚鼠口腔腔潰瘍具有明顯的治療作用。

2.4組合物對(duì)家兔口腔潰瘍的治療作用比較研究[12]

取健康雄性家兔，適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后挑選體重2～3kg合格動(dòng)物，用乙醚將其麻醉后，用內(nèi)徑為0.7cm，長(zhǎng)為3cm的塑料管垂直固定于家兔口腔粘膜表面，在管內(nèi)放入充分浸潤(rùn)了90%苯酚溶液的棉簽，于造模后24小時(shí)，測(cè)量動(dòng)物口腔潰瘍面積并隨機(jī)分為空白溶媒組、受試品組。用醫(yī)用棉簽分別浸潤(rùn)受試樣品后、充分涂抹每只動(dòng)物口腔潰瘍局部、并保持藥棉與潰瘍面接觸60秒，每天上下午各給藥1次，連續(xù)給藥直至每只動(dòng)物口腔潰瘍完全愈合?？瞻兹苊浇M同法給予生理鹽水。實(shí)驗(yàn)中前5天期間，每天盲法測(cè)量動(dòng)物口腔潰瘍面積、觀察潰瘍感染程度并參照表4標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分。

表4 口腔潰瘍表面感染情況評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

按下式計(jì)算給藥后潰瘍面積變化百分率：

潰瘍面積變化百分率=Sx/S0×100%

其中， S0為給藥前潰瘍面積(mm2)，Sx為給藥后各天潰瘍的面積(mm2)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS19軟件One-Way ANOVA分析進(jìn)行組間差異的顯著性檢驗(yàn)。

在本實(shí)驗(yàn)中，苯酚所致家兔口腔潰瘍模型中，潰瘍周圍充血嚴(yán)重、潰瘍表面可見(jiàn)明顯感染情況?？谇粷?cè)炷：螅咳?次局部給予不同受試品，每日觀察動(dòng)物口腔潰瘍面積及感染程度的變化情況，并記錄每只家兔口腔潰瘍的愈合時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 受試品對(duì)日本大耳白兔口腔潰瘍的治療作用

由表5可見(jiàn)，藥后1～4天期間，受試品組口腔潰瘍面積與同期溶媒對(duì)照組比較均有明顯的減小(P<0.05或P<0.01)。給藥前，溶媒對(duì)照組與給藥組的口腔潰瘍感染程度評(píng)分均為最高值4.0，組間沒(méi)有差異(P >0.05)；局部給藥治療4天后，受試品組的口腔潰瘍感染程度有非常顯著改善(P<0.01)。此外，由表5可見(jiàn)，與溶媒對(duì)照組比較，受試品組的口腔潰瘍愈合時(shí)間有明顯縮短(P<0.01)，受試品組與溶媒對(duì)照組比較有顯著差異。本結(jié)果表明受試品對(duì)家兔口腔潰瘍具有明顯的治療作用。

2.5組合物對(duì)大鼠牙周炎治療效果的研究[13-17]

2.5.1大鼠牙周炎模型制作

22只大鼠，腹腔注射10%水合氯醛麻醉、固定于鼠板上，用正畸鋼絲纏繞在M2磨牙頸部并盡量使其陷入牙周袋，術(shù)后飼養(yǎng)，造模動(dòng)物自由飲用10%高糖水(稱取白砂糖若干，按計(jì)量用超純水溶解即得)，使其形成牙周炎。 空白對(duì)照組，不造模自由飲用純水。造模組在確認(rèn)大鼠已形成牙周炎后，按規(guī)定進(jìn)行給藥。

2.5.2模型確認(rèn)及給藥方法

造模4周后，經(jīng)牙周炎臨床指標(biāo)檢測(cè)，確認(rèn)牙周的探診深度大于1mm的動(dòng)物為模型建立成功動(dòng)物，挑選18只模型動(dòng)物，麻醉后取出鋼絲、SD雄性大鼠SPF級(jí)，8周齡，體重210±10g，隨機(jī)分2組，加上最初選入的空白對(duì)照組，共計(jì)3組：受試品組每日上、下午牙齦局部涂抹給藥(給藥劑量同上述實(shí)驗(yàn)受試品組)，空白對(duì)照與模型對(duì)照組動(dòng)物同法給予純水。連續(xù)給藥5周。給藥前、給藥2周和5周時(shí)，水合氯醛麻醉大鼠后，由牙醫(yī)檢測(cè)大鼠牙周臨床指標(biāo)，包括動(dòng)物牙周的探診深度( probing depth，PD)、齦溝出血指數(shù)( sulcus bleeding index，SBI)、牙齦指數(shù)(gingival index，GI)、菌斑指數(shù)( plaqueindex, PLI)。

2.5.3探診深度( probing depth，PD)

探診深度是重要的牙周臨床指標(biāo)，使用牙周探針測(cè)定牙周袋的深度，齦緣至齦溝底的距離即探診深度。

檢查方法：用牙周探針與牙長(zhǎng)軸平行檢查大鼠牙周袋深度，探察麻醉大鼠的左上頜M2磨牙近中、腭、遠(yuǎn)中三個(gè)位點(diǎn)的深度，取其平均數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 受試品對(duì)大鼠牙周探診深度的影響

2.5.4齦溝出血指數(shù) ( sulcus bleeding index，SBI)

在患有牙齦炎時(shí)牙齦一般有紅腫、出血現(xiàn)象發(fā)生，齦溝出血是牙齦炎活動(dòng)期的表現(xiàn)，根據(jù)齦溝出血情況對(duì)牙齦進(jìn)行評(píng)價(jià)，能反應(yīng)牙齦炎的活動(dòng)狀況，齦溝出血情況用齦溝出血指數(shù)表示。

檢查方法：用牙周探針輕輕探至齦緣下方并滑動(dòng)，觀察牙齦出血程度，按下述評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分。檢查時(shí)探察大鼠的左上 M2近中、腭、遠(yuǎn)中3個(gè)位點(diǎn)，取均數(shù)。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0=用牙周探針輕探不出血，牙齦外觀健康無(wú)紅腫；1=用牙周探針輕探不出血，牙齦略紅腫，有輕度炎癥；2=用牙周探針輕探牙齦呈點(diǎn)狀出血，牙齦外觀有顏色改變和水腫；3=用牙周探針輕探牙齦出血沿齦緣擴(kuò)展，牙齦有明顯腫脹；4=用牙周探針輕探牙齦出血溢出齦緣，呈重度炎癥，牙齦有明顯腫脹；5=自動(dòng)出血，牙齦有顏色改變和明顯腫脹，有時(shí)有潰瘍。結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 受試品對(duì)大鼠齦溝出血指數(shù)的影響

2.5.5牙齦指數(shù)(gingival index，GI)

牙齦指數(shù)是觀察牙齦狀況，檢查牙齦顏色和質(zhì)的改變以及出血傾向的評(píng)定指數(shù)。

檢查方法：使用鈍頭牙周探針，檢查左上頜M2磨牙周圍牙齦的近中唇(頰)乳頭、正中唇(頰)緣、遠(yuǎn)中唇(頰)乳頭和舌側(cè)齦緣，分別按下述評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分并取其平均數(shù)。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0=牙齦健康，無(wú)紅腫、出血；1=有輕度炎癥，探針輕探不出血。牙齦有顏色改變和輕度水腫；2=有中度炎癥，探針輕探出血，牙齦紅腫；3=有重度炎癥，有自動(dòng)出血傾向，牙齦明顯紅腫或有潰瘍。結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 對(duì)大鼠牙齦指數(shù)的影響

2.5.6菌斑指數(shù) ( plaqueindex , PLI)[18]

根據(jù)牙菌斑的情況衡量牙周病的治療和預(yù)防效果，根據(jù)菌斑的厚度作為記分依據(jù)。操作方法：先用棉球蘸純水輕擦拭大鼠牙齒以清潔口腔，再用棉球蘸取堿性品紅染色劑擦拭左上頜M2磨牙，染色后再用干燥棉球吸干牙面多余染液。染色完成后使用牙科探針在大鼠的左上頜M2磨牙齦溝內(nèi)、齦緣及鄰近牙面輕輕劃過(guò)檢查是否能刮出菌斑。依照此法對(duì)左上頜M2磨牙，做近中、遠(yuǎn)中、頰和舌四個(gè)面的檢查并按照下述評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分，取其平均值。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0=齦緣及鄰近牙面無(wú)菌斑;1=肉眼視診齦緣及鄰近牙面無(wú)菌斑,探針尖劃過(guò)時(shí)可刮出菌斑;2=齦緣及鄰近牙面有中等量的菌斑;3=齦溝內(nèi)和齦緣及鄰近牙面有大量菌斑。結(jié)果見(jiàn)表9。

表9 對(duì)大鼠菌斑指數(shù)的影響

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，受試品對(duì)牙周炎大鼠，牙周探診深度、牙齦出血指數(shù)、牙齦指數(shù)、牙菌斑指數(shù)均有良好的改善效果，各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著性差異(P<0.05或P<0.01，)說(shuō)明該組合物對(duì)大鼠牙周炎的緩解和治療是有效的。

依據(jù)中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T326.1-2010要求，對(duì)云南白藥活性肽牙膏進(jìn)行了臨床觀察試驗(yàn)，本試驗(yàn)參加人數(shù)共計(jì)73人，其中5人因沒(méi)能參加定期的檢查，退出試驗(yàn)觀察，68人參加完成整個(gè)臨床試驗(yàn)。其中年齡分布為18～70歲，30～55歲人員占比為85%。

3 臨床試驗(yàn)觀察方案[19]

3.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用盲法、隨機(jī)、對(duì)照觀察的臨床研究方法。試驗(yàn)樣品分別為云南白藥活性肽牙膏、不含云南白藥提取物和美洲大蠊提取物相同基質(zhì)的牙膏(空白對(duì)照牙膏)。

3.2試驗(yàn)期限

3.2.1在試驗(yàn)前醫(yī)生需先對(duì)受試者進(jìn)行口腔狀況檢查，篩選出符合試驗(yàn)要求的患者進(jìn)入試驗(yàn)。

3.2.2試驗(yàn)用產(chǎn)品使用期限為3個(gè)月。

3.2.3每名受試對(duì)象共需接受3次口腔檢查，第1次為篩選受試者并進(jìn)行刷牙方法指導(dǎo)，對(duì)受試者各項(xiàng)觀察指標(biāo)進(jìn)行記錄并進(jìn)行隨機(jī)分組，開(kāi)始使用牙膏進(jìn)入試驗(yàn)觀察；產(chǎn)品按要求使用一個(gè)月后進(jìn)行第2次檢查并對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行記錄；第3次檢查為使用牙膏3個(gè)月后并對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行記錄。

3.2.4每次復(fù)查后發(fā)給受試對(duì)象2-3支優(yōu)質(zhì)軟毛牙刷和足量的試驗(yàn)樣品牙膏；要求受試對(duì)象每天至少用該牙膏刷牙2次，每次一分鐘以上，并用所發(fā)牙刷刷牙。要求所有受試者必須進(jìn)行巴氏刷牙法的指導(dǎo)。

3.3試驗(yàn)對(duì)象

受試者為符合納入及排除標(biāo)準(zhǔn)的患有牙齦炎或慢性牙周炎(輕度及中度)的成年男性和女性，一般情況試驗(yàn)人群每組數(shù)量應(yīng)不少于30人。

3.4納入標(biāo)準(zhǔn)

牙齦炎或慢性牙周炎輕度及中度患者。

全身健康狀況良好、無(wú)重要的全身系統(tǒng)性疾病、有20顆以上可檢測(cè)的牙齒。

年齡在18～70周歲。

如果為女性，不得處于妊娠期和哺乳期內(nèi)。

受試者應(yīng)具有適當(dāng)程度的菌斑或牙齦炎。

沒(méi)有同時(shí)參加其他類似試驗(yàn)研究。

簽署知情同意書(shū)，能按要求完成臨床試驗(yàn)。

3.5排除標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)試驗(yàn)產(chǎn)品成份有過(guò)敏史。

現(xiàn)在服用對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有影響的藥物。

在參加研究之前一個(gè)月使用抗生素。

口腔內(nèi)有開(kāi)放性齲齒或口腔粘膜病變。

患嚴(yán)重的牙周炎。

3.6檢查內(nèi)容

3.6.1檢查指標(biāo)：①牙齦指數(shù)(GI),②齦溝出血指數(shù)(BI),③菌斑指數(shù)(PLI),社區(qū)牙周指數(shù)(CPI)。

3.6.2檢查器械 檢查器械使用WHO推薦的CPI探針，探針尖端為一小球，直徑為0.5mm，在距頂端3.5～5.5mm處為黑色涂布區(qū)域，距頂端8.5mm和11.5mm處有兩條環(huán)帶。

3.6.3檢查方法

確定指數(shù)牙正常情況下，將口腔中分為6個(gè)區(qū)段，10顆指數(shù)牙，分別是上下頜8個(gè)磨牙加右上左下各一個(gè)中切牙，即17、16、11、26、27、37、36、31、46、47。

3.6.4牙齦指數(shù)(GI)

使用鈍頭牙周探針，對(duì)目標(biāo)牙齦進(jìn)行檢查，分別按下述評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分并取其平均數(shù)。

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0=牙齦健康，無(wú)紅腫、出血；1=有輕度炎癥，牙齦顏色輕度改變，輕度水腫，探針輕探不出血；2=有中度炎癥，牙齦紅腫，探針輕探出血；3=有重度炎癥，明顯發(fā)紅，水腫，潰瘍，有自動(dòng)出血傾向。

3.6.5齦溝出血指數(shù)(BI)

對(duì)目標(biāo)牙齒的頰、舌面進(jìn)行菌斑的評(píng)價(jià)計(jì)分，用牙周探針輕輕探至齦緣下方并滑動(dòng)，觀察牙齦出血程度，按下述評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分。

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0=齦緣和齦乳頭外觀健康，用牙周探針輕探齦溝不出血；1=有輕度炎癥，牙齦略紅腫，用牙周探針輕探不出血；2=牙齦呈輕度炎癥，牙齦外觀有顏色改變和水腫，用牙周探針輕探牙齦呈點(diǎn)狀出血；3=牙齦呈中度炎癥，牙齦有顏色改變，輕度水腫，用牙周探針輕探牙齦出血沿齦緣擴(kuò)展；4=牙齦呈重度炎癥，不但有顏色改變，且有明顯腫脹，用牙周探針輕探牙齦出血溢出齦緣；5=牙齦有顏色改變，明顯腫脹，有時(shí)有潰瘍，探診后出血或自動(dòng)出血。

3.6.6菌斑指數(shù)(PLI)

受試者使用菌斑指示劑后，對(duì)目標(biāo)牙齒的頰、舌面進(jìn)行菌斑的評(píng)價(jià)計(jì)分，所有牙面菌斑記分的總和除以受檢牙面數(shù)，得出該個(gè)體牙齒的菌斑分值，再將10顆指標(biāo)牙菌斑指數(shù)相加，除以牙齒數(shù)，即為每一受試者菌斑指數(shù)的均值。采用 Quigley-Hein 改良Turesky菌斑指數(shù)評(píng)價(jià)齦上菌斑。典型病例進(jìn)行拍照留樣。

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0=無(wú)菌斑 ；1=牙頸部邊緣存在散在的菌斑 ；2=牙頸邊緣可見(jiàn)連續(xù)的薄菌斑帶(達(dá)1mm 寬)；3=牙頸部菌斑帶大于1mm 但少于牙面的1/3；4=菌斑覆蓋牙面的1/3～2/3；5=菌斑覆蓋牙面2/3以上。 計(jì)算每一受試者菌斑指數(shù)的均值。典型病例進(jìn)行拍照留樣。

3.6.7社區(qū)牙周指數(shù)(CPI)

以探診為主，結(jié)合視診。檢查時(shí)以執(zhí)筆式握持CPI探針，無(wú)名指為支點(diǎn)，將探針輕緩地插入齦溝或牙周袋內(nèi)，探針與牙長(zhǎng)軸平行，緊貼牙根。沿牙齒頰(唇)、舌(腭)面齦溝從遠(yuǎn)中向近中移動(dòng)，作上下短距離的提插式移動(dòng)，以感覺(jué)齦下結(jié)石。同時(shí)查看牙齦出血狀況，并根據(jù)探針上的刻度觀察牙周袋深度，CPI探針使用時(shí)所用的力不超過(guò)20g。

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0=牙齦健康；1=牙齦炎，探診后出血；2=牙石，探診可見(jiàn)牙石，但探針黑色部分暴露在齦袋外；3=早期牙周病，齦緣覆蓋部分探針黑色部分，齦袋深度在4～5mm；4=晚期牙周病，探針黑色部分被齦緣完全覆蓋，牙周袋深度大于6mm；X=除外區(qū)段(少于兩顆功能牙)；5=無(wú)法檢查。

3.7臨床試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)組和對(duì)照組分別統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)基線、1個(gè)月及3個(gè)月檢查的①牙齦指數(shù)(GI),②齦溝出血指數(shù)(BI),③菌斑指數(shù)(PLI),社區(qū)牙周指數(shù)(CPI)。并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，雙側(cè)t檢驗(yàn)，顯著性水準(zhǔn)a=0.05，p<0.05，結(jié)果顯示連續(xù)使用產(chǎn)品三個(gè)月指標(biāo)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。

臨床試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表10。

表10 臨床試驗(yàn)結(jié)果

3.8臨床試驗(yàn)觀察結(jié)論

試驗(yàn)觀察結(jié)果分析表明：① 使用牙膏1個(gè)月后，云南白藥活性肽牙膏和空白對(duì)照牙膏，各項(xiàng)指標(biāo)均有一定好轉(zhuǎn)，其中云南白藥活性肽牙膏在牙齦指數(shù)(GI)，齦溝出血指數(shù)(BI)， 牙周社區(qū)指數(shù)(CPI)與試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)對(duì)比有非常顯著性差異P≤0.001，菌斑指數(shù)(PLI)也有顯著性差異P≤0.01；空白對(duì)照牙膏在牙齦指數(shù)(GI)，牙周社區(qū)指數(shù)(CPI)與試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)對(duì)比有顯著性差異P≤0.01，齦溝出血指數(shù)(BI)有顯著性差異P≤0.05；但云南白藥活性肽牙膏和空白對(duì)照牙膏相比，組間沒(méi)有顯著性差異。二者之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

② 使用牙膏3個(gè)月后，云南白藥活性肽牙膏在牙齦指數(shù)(GI)，齦溝出血指(BI)方面與空白對(duì)照牙膏相比較有非常顯著性差異P≤0.01，牙周社區(qū)指數(shù)(CPI)也有顯著性差異P≤0.05，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

其中牙齦指數(shù)(GI)減少百分比：(空白牙膏組-云南白藥活性肽牙膏組)/空白牙膏組=(1.04-0.80)/1.04≈23%，滿足標(biāo)準(zhǔn)WS/T326.1-2010(對(duì)照-試驗(yàn))/對(duì)照≥12%的要求。

齦溝出血指數(shù)(BI)減少百分比：(空白牙膏組-云南白藥活性肽牙膏組)/空白牙膏組=(1.07-0.81)/1.07≈24.3%，滿足標(biāo)準(zhǔn)WS/T326.1-2010(對(duì)照-試驗(yàn))/對(duì)照≥12%的要求。

牙周社區(qū)指數(shù)(CPI)減少百分比：(空白牙膏組-云南白藥活性肽牙膏組)/空白牙膏組=(1.46-1.20)/1.46≈17.7%，滿足標(biāo)準(zhǔn)WS/T326.1-2010(對(duì)照-試驗(yàn))/對(duì)照≥12%的要求。

云南白藥活性肽牙膏在牙齦指數(shù)(GI)，齦溝出血指數(shù)(BI)，菌斑指數(shù)(PLI)，牙周社區(qū)指數(shù)(CPI)與試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)對(duì)比有非常顯著性差異P≤0.001；空白對(duì)照牙膏在牙齦指數(shù)(GI)，齦溝出血指數(shù)(BI)，菌斑指數(shù)(PLI)方面，與試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)對(duì)比有非常顯著性差異P≤0.001；牙周社區(qū)指數(shù)(CPI)與試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)對(duì)比有顯著性差異P≤0.01。

本臨床試驗(yàn)觀察結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明：云南白藥活性肽牙膏，通過(guò)3個(gè)月的連續(xù)使用，對(duì)牙齦炎相關(guān)指標(biāo)(牙齦指數(shù)，齦溝出血指數(shù))，有非常明顯的改善，表明產(chǎn)品對(duì)牙齦炎有很好的減輕和改善作用；通過(guò)對(duì)牙周社區(qū)指數(shù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異表明，產(chǎn)品對(duì)牙周不健康問(wèn)題有相應(yīng)的改善和修復(fù)作用。

試驗(yàn)同時(shí)表明通過(guò)掌握正確的刷牙方式，養(yǎng)成良好的刷牙習(xí)慣，及每天兩次認(rèn)真刷牙，牙齦炎各項(xiàng)指標(biāo)及牙菌斑指數(shù)均有明顯減少，其減少數(shù)量也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.9不良反應(yīng)情況

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中未見(jiàn)不良事件和副作用發(fā)生。

4 總結(jié)

通過(guò)建立相應(yīng)的動(dòng)物模型，驗(yàn)證了云南白藥提取物和美洲大蠊提取物構(gòu)成的組合物(BYPA)有良好的抗炎、止血、促進(jìn)潰瘍組織愈合的作用，并對(duì)牙周炎大鼠牙周探診深度、齦溝出血指數(shù)、牙齦指數(shù)、牙菌斑指數(shù)均有良好的改善作用，說(shuō)明BYPA對(duì)大鼠牙周炎的緩解和改善是有效的。含有BYPA的云南白藥活性肽牙膏，在臨床觀察中通過(guò)患有牙齦炎或慢性牙周炎(輕度及中度)患者3個(gè)月的連續(xù)使用，對(duì)牙齦指數(shù)、齦溝出血指數(shù)有非常明顯的改善，表明牙膏對(duì)牙齦炎有很好的減輕和改善作用；對(duì)牙周社區(qū)指數(shù)的好轉(zhuǎn)表明牙膏對(duì)牙周不健康問(wèn)題有相應(yīng)的改善和修復(fù)作用。

關(guān)于云南白藥提取物復(fù)配美洲大蠊提取物，對(duì)口腔組織良好的改善和修復(fù)作用機(jī)制，希望在進(jìn)一步的研究中進(jìn)行深入探討。