兔病實驗室診斷

時少磊

（山東省莒南縣農業(yè)農村局，山東 莒南 276600）

1 病毒性疾病

1.1 病毒分離技術 該技術能檢測被檢材料中存活的、能在體外復制的傳染性病毒。病毒分離技術特異性強，假陽性少，但需時較長，對實驗室要求較高。

1.2 病毒檢測

1.2.1 紅細胞凝集試驗 有些病毒具有凝集某些動物紅細胞的能力，利用這種特性設計的試驗稱血凝試驗。

兔出血癥簡單而準確的診斷方法就是進行血凝試驗，利用兔的肝臟、脾等組織進行紅細胞凝集試驗能較快確診是否感染。

1.2.2 血清學診斷 是利用陽性血清檢測病毒性感染。常用的有直接凝集試驗、間接凝集試驗、瓊脂免疫擴散試驗、免疫熒光試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等。

1.2.3 包涵體檢測 有些病毒感染細胞后會產生包涵體，對此可通過組織切片或涂片檢查包涵體進行診斷。如兔的黏液瘤病可通過檢查其皮膚組織中的包涵體來確診。

1.2.4 電鏡技術某些病毒感染早期可在標本中用電鏡檢查到病毒顆粒，并可從形態(tài)學上鑒別病毒的種類。

1.2.5 病毒核酸檢測 核酸探針雜交法和聚合酶鏈反應（PCR）是檢測病毒核酸的常用方法。

核酸探針雜交法的基本原理是使彼此準確互補的兩條核苷酸序列在一定條件下牢固地相互結合形成雙鏈核苷酸，用放射自顯影可證實靶序列的存在。

PCR法靈敏度高，可以檢出單個受感染細胞內的病毒核酸甚至單個分子的DNA，但假陽性率相對較高。

2 細菌性疾病

2.1 細菌分離培養(yǎng)技術 即無菌取病兔心血、肝臟、淋巴結、腸內容物等接種到合適的培養(yǎng)基上，挑取可疑的單個菌落純化培養(yǎng)，再通過生化試驗或血凝試驗進行驗證。

2.2 組織觸片鏡檢 取病兔心血涂片或肝臟觸片在火焰上固定后，用美藍染色，再通過顯微鏡觀察有無細菌存在。

2.3 動物試驗 在進行細菌分離純化試驗、生化試驗的基礎上，利用實驗動物進行接種試驗，以進一步明確所分離細菌的致病力。

3 寄生蟲性疾病

3.1 蟲體檢查法 對寄生在家兔體表的寄生蟲，如癢螨、疥螨等，可采用肉眼觀察和顯微鏡觀察相結合的方法進行檢查。

可取患兔頭、耳、鼻、足等易感染寄生蟲部位的毛發(fā)、皮屑等，或刮取病、健皮膚交界處皮屑，置載玻片上，滴加50%甘油溶液后置顯微鏡下檢查。

3.2 蟲卵檢查法

3.2.1 肝球蟲檢查 將肝結節(jié)置于載玻片上，加蓋玻片后置顯微鏡下觀察，如見大量球蟲卵囊，則可診斷為感染肝型球蟲。

3.2.2 腸內容物檢查 取患兔腸內容物置于載玻片上涂抹，再滴幾滴蒸餾水后，于低倍顯微鏡下觀察，如見球蟲卵囊，則可診斷為感染腸球蟲。

3.2.3 糞便檢查 許多寄生蟲，特別是寄生于消化道的寄生蟲，其蟲卵、卵囊或幼蟲均可通過糞便排出體外。通過檢查兔的糞便，可以確定其是否感染寄生蟲及感染強度。

直接涂片法：取50%甘油水溶液1～2滴滴于載玻片上，再取黃豆大小的被檢糞便與之混勻后蓋上蓋玻片鏡檢。直接涂片法簡便，但檢出率不高。

漂浮集卵法：取5～10 g 被檢糞便置于燒杯中，加入少量飽和鹽水攪拌混合后，加入約20 倍的漂浮液，再用金屬篩或紗布濾去糞渣。濾液靜置30～60 min，用直徑0.5～1 cm的金屬圈蘸取表面液膜抖落于載玻片上，并加蓋片后鏡檢。

沉淀集卵法：取1～2 g 被檢糞便置于試管中，加5倍量的水制成懸浮液后，經銅篩過濾到離心管中，再以800 r/min 離心3～5 min 后，棄上清液，將沉渣置載玻片上鏡檢蟲卵。

麥氏計數(shù)法：是常用的蟲卵計數(shù)方法。取被檢糞樣2 g放入三角燒瓶內，加飽和鹽水58 mL和玻璃珠若干充分震蕩制成混懸液。吸取混懸液注入麥氏計數(shù)室，置顯微鏡下計數(shù)計數(shù)室（1 cm2）內蟲卵數(shù)。由于每室混懸液等于0.15 mL，結果乘以200，即為每克糞便蟲卵數(shù)。通常一次計數(shù)4室，然后按平均值計算。