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    瑤族復(fù)方山茶油對(duì)變應(yīng)性接觸性皮炎小鼠的作用及機(jī)制研究

    2021-03-15 11:10:04馮秋瑜黎敏航胡宇婷黃慧學(xué)梁秋云
    廣西中醫(yī)藥 2021年1期
    關(guān)鍵詞:山茶油右耳勻漿

    馮秋瑜,黎敏航,胡宇婷,黃慧學(xué),3,梁秋云

    (1.廣西中醫(yī)藥大學(xué),廣西 南寧 530200;2.桂林醫(yī)學(xué)院,廣西 桂林 541199;3.廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西 南寧 530200)

    新生兒尿布疹,是由于被大小便浸污的尿布未及時(shí)更換或細(xì)菌感染等造成新生兒的尿布包裹區(qū)域出現(xiàn)紅腫、水皰、膿皰,甚至出現(xiàn)潰爛等皮膚炎癥反應(yīng),屬于變應(yīng)性接觸性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD)的范疇[1-2]。病灶部位的皮膚再次或反復(fù)接觸過(guò)敏原,特異性T細(xì)胞大量聚集于接觸部位,分泌過(guò)量的細(xì)胞因子,引發(fā)炎癥反應(yīng)[3]。目前,尿布疹發(fā)生率高達(dá)43.8%,由于過(guò)敏原排查難度大,臨床用藥存在很大的隨意性和盲目性[4]。本課題組在前期調(diào)研中發(fā)現(xiàn),瑤族民間常用山茶油混合扛板歸、火炭藤、黃連、黃柏等藥材涂抹于尿布疹部位,效果顯著。本研究通過(guò)2,4-二硝基氯苯(DNCB)誘導(dǎo)的小鼠ACD模型,探討瑤族復(fù)方山茶油的作用及機(jī)制。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 動(dòng)物 BALB/c小鼠,雄性,3周齡,體質(zhì)量14~16 g,由廣西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物許可證號(hào):SCXK桂2014-0002;動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK桂2014-0003。小鼠在實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d。

    1.2 試藥 ①瑤族復(fù)方山茶油(SCY):將蛇不過(guò)、火炭藤、黃連、黃柏、石韋等藥材搗爛,加山茶油適量,浸泡48 h,用80目篩濾過(guò)除去藥渣,得到高劑量瑤族復(fù)方山茶油(SCY-H,0.50 g生藥/ml),取SCY-H適量,用山茶油稀釋得中劑量瑤族復(fù)方山茶油(SCY-M,0.25 g生藥/ml)、低劑量瑤族復(fù)方山茶油(SCY-L,0.125 g生藥/ml),備用。上述藥材由廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定:山茶油為山茶科植物油茶(Camellia oleiferaAbel)的種子經(jīng)壓榨而得的植物油;扛板歸為蓼科植物扛板歸Polygonum perfoliatumL.的莖葉;火炭藤為蓼科植物火炭母Polygonum chinenseL.的全草;黃連為毛茛科植物短萼黃連Coptis chinensisFranch.var.brevisepalaW.T.Wang et Hsiao的根莖;黃柏為蕓香科植物禿葉黃皮樹(shù)Phellodendron chinense var.glabriuscu?lumSchneid.的樹(shù)皮;石韋為水龍骨科植物廬山石韋Pyrrosia sheareri(Bak.)Ching的全草。②尤卓爾丁酸氫化可的松乳膏:每1 g含丁酸氫化可的松1.0 mg,天津金耀藥業(yè)有限公司產(chǎn)品,批號(hào):17100301。用時(shí)稀釋至1 mg/ml的濃度。③2,4-二硝基氯苯(DNCB):美國(guó)Sigma-Aldrich產(chǎn)品。

    1.3 試劑 IgE、INF-γ、IL-4等ELISA試劑盒:美國(guó)BD Biosciences產(chǎn)品。

    2 方 法

    2.1 造模及藥物干預(yù) 取BALB/c小鼠60只,按隨機(jī)數(shù)字表法分為6組:正常對(duì)照組、模型組、SCY-H組、SCY-M組、SCY-L組和氫化可的松組,每組10只。除正常對(duì)照組外,其余小鼠于實(shí)驗(yàn)前1 d腹部刮毛,面積約3 cm×3 cm,以5% DNCB丙酮-橄欖油(4∶1)溶液致敏,每只涂予25μl。致敏后5 d,于小鼠右耳以0.25%DNCB丙酮-橄欖油(4∶1)溶液20μl激發(fā),左耳涂等量丙酮-橄欖油(4∶1)作對(duì)照[5]。各實(shí)驗(yàn)組于DNCB激發(fā)后1 h開(kāi)始給藥,每隔1 h給藥1次,連續(xù)給藥7次。氫化可的松組和SCY各劑量組涂以相應(yīng)藥物,每次25μl,正常對(duì)照組和模型組以蒸餾水替代。

    2.2 觀察指標(biāo)與方法

    2.2.1 耳腫脹度及耳腫脹抑制率的測(cè)定 DNCB激發(fā)后24 h,脫頸處死小鼠,剪下雙耳,用6 mm打孔器取雙耳片,稱(chēng)重,計(jì)算耳腫脹度和耳腫脹度抑制率。公式如下:耳腫脹度(mg)=右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量;耳腫脹抑制率(%)=(模型組右耳質(zhì)量平均值-實(shí)驗(yàn)組右耳質(zhì)量)/模型組右耳質(zhì)量平均值×100%。

    2.2.2 血清中IgE含量的測(cè)定 小鼠處死前5 min行眼球采血,4℃、3 500 r/min離心15 min,分離血清,按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定血清中IgE的含量。

    2.2.3 耳勻漿中INF-γ和IL-4含量的測(cè)定 取稱(chēng)重后的右耳,用預(yù)冷的PBS研磨制成2.0%的勻漿,4℃、3 500 r/min離心15 min,取上清液,按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定勻漿液中INF-γ和IL-4的含量,計(jì)算INF-γ/IL-4比值。

    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間比較選用單因素方差分析(One-Way ANOVA),兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)。

    3 結(jié) 果

    3.1 SCY對(duì)ACD小鼠耳腫脹的影響 與正常對(duì)照組比較,模型組小鼠耳腫脹明顯(P<0.01);與模型組比較,氫化可的松組和SCY各劑量組對(duì)小鼠耳腫脹均有明顯抑制作用(P<0.01),且SCY對(duì)小鼠耳腫脹抑制率與劑量呈正相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

    表1 SCY對(duì)ACD小鼠耳腫脹的影響(n=10,x±s)

    3.2 SCY對(duì)ACD小鼠血清中IgE和耳勻漿中INF-γ、IL-4含量的影響 與正常對(duì)照組比較,模型組小鼠血清中IgE和耳勻漿中INF-γ、INF-γ/IL-4比值明顯升高(P<0.01),而耳勻漿中IL-4水平明顯降低(P<0.01);與模型組比較,SCY高劑量組能降低血清中IgE水平(P<0.01);SCY各劑量組還能抑制耳勻漿中的INF-γ上升,恢復(fù)INF-γ/IL-4比值的平衡(P<0.05或P<0.01),但對(duì)IL-4水平未見(jiàn)明顯影響(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 SCY對(duì)ACD小鼠血清中IgE和耳勻漿中INF-γ、IL-4含量的影響 (n=10,x±s)

    4 討 論

    目前,隨著嬰幼兒護(hù)理技術(shù)和方法的不斷提高,以大面積糜爛、潰瘍的Ⅲ度尿布疹已少見(jiàn),多為肛周與臀部皮膚紅腫,或有少量潰爛、滲出的Ⅰ、Ⅱ度尿布疹[6]。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠右耳接受抗原DNCB刺激后,再次接觸DNCB而表現(xiàn)出的紅斑、水腫及易有滲出液的ACD特征,與臨床Ⅰ、Ⅱ度尿布疹病理學(xué)特征相似。依據(jù)首都醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科推薦的尿布疹療效診斷標(biāo)準(zhǔn),用藥24~48 h后臀部紅斑、丘疹等消退為顯效;用藥72 h后潰瘍消失,局部丘疹、水腫基本消退為有效[7]。因此,本實(shí)驗(yàn)采用1 d內(nèi)多次給藥、觀察瑤族復(fù)方山茶油給藥后24 h的療效。在本實(shí)驗(yàn)中,模型組小鼠耳腫脹明顯,血清中IgE水平顯著上升,符合ACD病理過(guò)程。SCY在24 h內(nèi)能明顯抑制小鼠耳腫脹,且存在劑量依賴(lài)性;SCY高劑量組還能顯著降低血清中IgE水平,提示SCY對(duì)ACD的改善作用與其降低機(jī)體的過(guò)敏反應(yīng)有關(guān)。

    瑤藥的組方配伍主要為主藥、配藥和引路藥。瑤醫(yī)認(rèn)為[8],尿布疹發(fā)病原因主要是由于新生兒胎中蘊(yùn)毒未清,或因其后天喂養(yǎng)不當(dāng),飲食失調(diào),脾胃受損,濕熱之邪浸淫血脈,郁于肌腠?;純函彾荆ㄌザ荆┗驖駸嶂斑^(guò)盛為盈,機(jī)體脾胃受損為虧,盈虧失衡,發(fā)為本病。治則為風(fēng)虧打盈,打其毒邪之盈,健其脾胃;治法為清熱燥濕、散瘀消腫、祛風(fēng)止癢、健胃利水?,幾鍙?fù)方山茶油中的山茶油,味苦,性平,具有行氣除滯、消腫止痛、清熱解毒、殺蟲(chóng)止癢之功效,屬于打藥;扛板歸與火炭母能清熱解毒、收斂止癢、利水消腫,皆為打藥,能助山茶油清熱止癢、消腫止痛;黃連與黃柏能清熱燥濕、解毒療瘡,為風(fēng)打相兼藥,助主藥加強(qiáng)涼血解毒、療瘡止癢之功;石韋清熱解毒、利水通淋,為風(fēng)藥,用之作引路藥,引瘡毒和濕邪下行;以上風(fēng)虧打盈配伍,能起到清熱燥濕、散瘀消腫、祛風(fēng)止癢的功效。因本復(fù)方為外用藥,故在治標(biāo)之際,仍需在患兒日常喂養(yǎng)時(shí)注意調(diào)養(yǎng)其脾胃,最終達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。

    研究表明,ACD主要是由Th1細(xì)胞介導(dǎo)、Th2細(xì)胞和多種細(xì)胞因子參與的Ⅳ型超敏反應(yīng),其中Th1/Th2比值的失調(diào)是重要環(huán)節(jié)[9]。Th1細(xì)胞能活化巨噬細(xì)胞,介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答;Th2則輔助B細(xì)胞活化,發(fā)揮體液免疫的功能。INF-γ和IL-4分別是Th1和Th2細(xì)胞分泌的代表性細(xì)胞因子,二者之間存在交互調(diào)節(jié)、相互拮抗的作用,維持著免疫平衡的作用[10]。當(dāng)INF-γ和/或IL-4水平異??梢l(fā)Th1/Th2比值改變,導(dǎo)致ACD的發(fā)生[11]。在本實(shí)驗(yàn)中,模型組小鼠耳勻漿中INF-γ水平明顯升高,而IL-4則顯著降低,導(dǎo)致INFγ/IL-4比值增大;通過(guò)SCY的治療,雖然IL-4水平上升水平不顯著(P>0.05),但能下調(diào)INF-γ水平,恢復(fù)INF-γ/IL-4比值的平衡,提示SCY對(duì)ACD的作用機(jī)制與下調(diào)炎癥部位INF-γ水平及調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡有關(guān)。

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