羊布魯氏菌S2疫苗免疫與自然感染鑒別方法

郭希萍，紀(jì)新花，王會(huì)英

（安陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 安陽(yáng) 455000）

布魯氏菌病是由布魯氏菌感染引起的人或多種動(dòng)物共患的急性或慢性傳染病，臨床上主要表現(xiàn)為妊娠家畜流產(chǎn)、關(guān)節(jié)腫大等癥狀。疫苗接種是目前控制重點(diǎn)疫區(qū)布病流行的一種方法,但是接種活疫苗以后，布病感染的疫情被掩蓋了，而不是消失了，因?yàn)橐呙缃臃N動(dòng)物與自然患病動(dòng)物無(wú)法甄別，法定檢疫措施嚴(yán)重受阻。

筆者應(yīng)用熒光微球抗體檢測(cè)試紙條進(jìn)行了羊布魯氏菌S2 疫苗免疫與自然感染鑒別試驗(yàn)，隨機(jī)對(duì)應(yīng)用試管凝集試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行復(fù)核，結(jié)合樣品相應(yīng)的免疫背景，經(jīng)分析，效率高，準(zhǔn)確率高，建議將該方法推廣應(yīng)用于羊布魯氏菌免疫或感染的篩查、輔助診斷等。

1 試驗(yàn)原理

熒光標(biāo)記物采用的是鑭系元素及其螯合物經(jīng)特殊包裹加工而成的熒光微球，熒光強(qiáng)度遠(yuǎn)高于普通熒光標(biāo)記物，大大提高了檢測(cè)的靈敏度。鑭系元素及其螯合物的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)間有一個(gè)較大的Stokes位移，減少了由激發(fā)光引起的特異雜散光對(duì)檢測(cè)的干擾，提高熒光檢測(cè)穩(wěn)定性；同時(shí)熒光壽命長(zhǎng)，消除了環(huán)境中熒光物質(zhì)對(duì)待測(cè)物的干擾，而且熒光激發(fā)波長(zhǎng)較寬，發(fā)射波長(zhǎng)較窄，具有本底低、分辨率高、特異性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。

2 試驗(yàn)步驟

樣品選擇：選擇試管凝集試驗(yàn)結(jié)果陰性羊血清10份，陽(yáng)性羊血清20份（結(jié)合樣品采集登記表選擇免疫S2疫苗羊血清10 份，自然感染羊血清10 份），分成陰性對(duì)照組、S2疫苗免疫組、自然感染組，每組10份羊血清。

樣本稀釋：用吸管取9 滴樣本稀釋液，再吸取1 滴羊血清在1.5 ml離心管中做10倍稀釋并混勻。

撕開檢測(cè)試紙鋁箔包裝袋，取出檢測(cè)試紙，放于平整、潔凈的臺(tái)面上。

用配套吸管吸取已稀釋好的樣本，垂直而緩慢地滴加2 ～3滴（約80 ul）到加樣孔內(nèi)。

室溫下放置15 min，讀數(shù)前先將產(chǎn)品配套ID 卡插入便攜式熒光免疫分析儀，之后將反應(yīng)到時(shí)間的檢測(cè)試紙加樣孔朝里插入便攜式熒光免疫分析儀，點(diǎn)擊“快速檢測(cè)”進(jìn)行讀數(shù)。

3 結(jié)果判定

陰性：當(dāng)LPS檢測(cè)值＜0.1時(shí)，判為陰性。

陽(yáng)性：當(dāng)LPS檢測(cè)值≥0.1且NH檢測(cè)值＜0.1時(shí)，判為疫苗免疫陽(yáng)性；當(dāng)LPS和NH檢測(cè)值均≥0.1時(shí)，判為布魯氏菌感染。

試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

表1 各組檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

4 結(jié)果分析

從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，試管凝集試驗(yàn)陰性的血清（抗體滴度＜1:25），LPS 檢測(cè)值、NH 檢測(cè)值均＜0.1；S2 疫苗免疫組LPS 檢測(cè)值≥0.1 且NH 檢測(cè)值＜0.1；自然感染組LPS 和NH 檢測(cè)值均≥0.1，表明應(yīng)用熒光微球抗體檢測(cè)試紙條較準(zhǔn)確地鑒別出疫苗接種動(dòng)物與自然患病動(dòng)物。

S2 疫苗具有良好的免疫保護(hù)效果和優(yōu)越的安全性，它不僅能對(duì)豬、牛和羊產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)效果，并且口服免疫也不會(huì)引起懷孕母畜流產(chǎn)，應(yīng)用范圍較廣。根據(jù)有關(guān)動(dòng)物試驗(yàn)，布病疫苗株可在動(dòng)物體內(nèi)完全被免疫系統(tǒng)清除，而強(qiáng)毒株或自然感染毒株會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)長(zhǎng)期存在。研究顯示，S2 疫苗株在小鼠體內(nèi)完全清除時(shí)間為6周。LPS檢測(cè)值、NH檢測(cè)值數(shù)值大小與免疫時(shí)間長(zhǎng)短、抗體滴度大小之間的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

5 結(jié)論

熒光微球抗體檢測(cè)試紙條是在熒光染料標(biāo)記技術(shù)上發(fā)展起來(lái)的，作為一種免疫學(xué)檢測(cè)方法，熒光微球的發(fā)光強(qiáng)度可以隨激發(fā)光的強(qiáng)度增強(qiáng)而增強(qiáng)，所以熒光微球標(biāo)記有望提高免疫層析技術(shù)的檢測(cè)限；而在微球殼結(jié)構(gòu)的作用下，熒光微球具有相對(duì)穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，粒度均一、單分散性好、穩(wěn)定性好、發(fā)光效率高、重復(fù)性好，有較好的生物相容性；且形成微球后染料熒光淬滅大大減少，發(fā)射強(qiáng)而穩(wěn)定，且不受外界環(huán)境介質(zhì)變化的影響，具有檢測(cè)靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)。綜上所述，熒光微球抗體檢測(cè)試紙條在布魯氏菌病檢測(cè)中有廣闊的應(yīng)用前景。□