膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物疫病診斷中的應(yīng)用

周孝明，張延濤

（1. 煙臺(tái)市園林建設(shè)養(yǎng)護(hù)中心，山東 煙臺(tái) 264009；2. 青島市即墨區(qū)溫泉街道辦事處，山東 青島 266200）

膠體金在抗原抗體反應(yīng)中用作示蹤劑，用于白磷，硼氫化鈉，乙醇，過(guò)氧化氫，抗壞血酸，檸檬酸鈉，單寧酸。膠體金可以直接制備，這種方法處理的玻璃器皿不需要硅化。還可以在玻璃器皿的表面上用相同粒徑的金溶液涂覆玻璃，然后丟棄，然后清洗2 次。使用前應(yīng)使用蒸餾水，這樣效果更好，因?yàn)樗鼫p少了金顆粒的吸附。

1 層析技術(shù)

沙門(mén)氏菌抗血清與膠體金顆粒結(jié)合使用直接免疫，細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)沙門(mén)氏菌的表面抗原，為膠體金標(biāo)記技術(shù)在免疫分析中的應(yīng)用指明了方向。在過(guò)去的30 年中，免疫膠體金快速診斷技術(shù)已廣泛用于人類(lèi)醫(yī)學(xué)和其他領(lǐng)域的臨床試驗(yàn)中，例如妊娠試驗(yàn)、感染等，鼠疫耶爾森氏菌的快速診斷技術(shù)也已廣泛應(yīng)用于人類(lèi)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。GICA 是一種簡(jiǎn)單而快速的檢測(cè)方法。無(wú)需復(fù)雜的操作技術(shù)和專(zhuān)用設(shè)備，結(jié)果可由肉眼判斷。靈敏度高，無(wú)污染，攜帶方便。與其他檢測(cè)技術(shù)相比，膠體金快速檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用不需要對(duì)樣品和試劑進(jìn)行特殊處理。體積很小，樣本量可低至1-2mL，可長(zhǎng)期用于抗原檢測(cè)、抗體檢測(cè)和檢測(cè)結(jié)果的保存。這項(xiàng)新興技術(shù)已成為醫(yī)學(xué)方面臨床快速診斷領(lǐng)域的一個(gè)全新的方向，并在很多科技發(fā)達(dá)國(guó)家中廣泛應(yīng)用。

2 反應(yīng)模式

以最常用的雙抗體夾心試驗(yàn)AIV 為例，闡述了膠體金免疫層析法的反應(yīng)原理。首先，將兩種病原體抗體包被在NC膜上并用膠體金標(biāo)記。導(dǎo)致質(zhì)量控制線上的膠體金染色，并獲得了陽(yáng)性結(jié)果。當(dāng)檢測(cè)產(chǎn)物中無(wú)致病菌時(shí)，膠體金標(biāo)記抗體不能通過(guò)病原體與檢測(cè)線連接，不能與兔抗小鼠多克隆抗體連接。人體結(jié)合后，膠體金標(biāo)記抗體中具有小鼠抗原性的單克隆抗體可以連接到質(zhì)量控制材料，結(jié)果是負(fù)面的。如果測(cè)試線和質(zhì)量控制線未著色，則說(shuō)明測(cè)試條不合格。

3 在動(dòng)物診斷中的應(yīng)用

程安春等應(yīng)用銀加強(qiáng)膠體金探針檢測(cè)減蛋下降綜合癥的應(yīng)用研究。病毒抗原的最低可檢測(cè)量為0.11719g/ mL，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CPV 在卵巢、輸卵管峽部、喉和軟殼卵中的陽(yáng)性率分別為100%和92%，對(duì)純化的犬細(xì)小病毒單克隆抗體進(jìn)行了標(biāo)記和純化。將犬細(xì)小病毒多克隆抗體噴涂在玻璃纖維膜上，用于犬細(xì)小病毒抗原的快速診斷。保存6 個(gè)月后，測(cè)試結(jié)果的可重復(fù)性為100%。用膠體金標(biāo)記經(jīng)典豬瘟病毒抗原，用雙抗原夾心法建立經(jīng)典豬瘟病毒對(duì)抗體檢測(cè)免疫的特征，并分析試紙條。與蘭州獸醫(yī)學(xué)院的間接血凝試劑相比，通過(guò)間接血凝和IDEXX 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)三種方法對(duì)不同養(yǎng)豬場(chǎng)收集的20 例可疑病例的符合率均在98%以上。該方法簡(jiǎn)單，靈敏。具體來(lái)說(shuō)，它可以區(qū)分強(qiáng)感染和弱感染，適合于豬瘟的臨床診斷。結(jié)果表明，試紙條與血凝抑制試驗(yàn)一致，與瓊脂糖凝結(jié)一致。凝膠擴(kuò)散是一致的，并且比測(cè)試具有更高的一致性和靈敏度。該方法適用于抗體檢測(cè)和膠體金免疫層析分析。當(dāng)試紙用于交叉測(cè)試時(shí)，其他無(wú)關(guān)疾病的陽(yáng)性血清為陰性。唐景峰等使用膠體金標(biāo)記的單克隆抗體治療布魯氏菌病，多克隆抗體用作檢測(cè)線上的捕獲抗體。 PCR 的符合率為100%。近年來(lái)，關(guān)于細(xì)菌性疾?。ɡ缰гw和霍亂）的診斷性測(cè)試紙?jiān)絹?lái)越多，其中一些已廣泛用于基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)。王艷華等利用膠體金標(biāo)記弓形蟲(chóng)的分泌抗原，并制備了膠體金免疫檢測(cè)條用于弓形體抗體的檢測(cè)。 I 法和ha 法的重合率為82.5%，高于IHA 法。

4 結(jié)束語(yǔ)

本文介紹膠體金免疫層析技術(shù)在減蛋綜合癥、犬細(xì)小病毒、豬瘟等病診斷中的應(yīng)用，提供了對(duì)應(yīng)的預(yù)防技術(shù)，以及疾病診斷和動(dòng)物疾病監(jiān)測(cè)與預(yù)防支持，其中一些已在基層獸醫(yī)站得到推廣。