口蹄疫病毒O型抗體檢測注意事項及結(jié)果分析

呂寶珍

（洛南縣動物疫病預(yù)防控制中心，陜西洛南 726100）

1 樣品來源

該實驗樣品來自于全縣16個鎮(zhèn)，隨機(jī)抽取生豬養(yǎng)殖場20個，每場采集血清樣品15份；零散養(yǎng)殖戶隨機(jī)抽取16戶，每戶采集血清樣品5份，共計380份。

2 實驗儀器

量筒、燒杯、離心管架、超純水機(jī)、電熱恒溫箱、洗板機(jī)、酶標(biāo)分析儀、移液槍頭、單道移液器、多道移液器、離心管、一次性洗液皿、一次性吸水紙。

3 洗滌液配制

用量筒取900ml蒸溜水或去離子水與100ml洗滌液混合（洗滌液是濃縮洗液，需要稀釋），充分混勻即為工作濃度洗滌液。

4 具體實驗步驟

4.1 實驗前的準(zhǔn)備工作

將阻斷ELISA抗體檢測試劑盒和待檢血清從冷藏和冷凍箱中取出，將待檢血清豎行排列于離心管架上，并做好編碼，等試劑和血清樣品溫度恢復(fù)到室溫20℃～25℃，在進(jìn)行實驗。

4.2 操作步驟

4.2.1 加樣

（1）預(yù)先取出包被板，取出樣品稀釋液，在每孔加入樣品稀釋液50 μl。

（2）再用10 μl的移液器添加50μl待檢樣品。

（3）在包被板最后加入50μl陰性和陽性對照品各2孔，蓋膜，避光在37℃反應(yīng)60min。

4.2.2 洗板

60min時間到取包被板，揭掉封板膜，倒掉孔內(nèi)液體，用預(yù)先配制好的洗滌液洗滌3次，每次停留1min；最后一次倒干凈后，用吸水紙將包被板內(nèi)液體拍干。

4.2.3 檢測

（1）在包被板中加酶標(biāo)結(jié)合物（1號液）100μl，蓋膜，避光在37℃反應(yīng)60min。60min時間到后取出包被板，揭膜，倒掉孔內(nèi)液體，用預(yù)先配制好的洗滌液洗滌3次，每次停留1min；最后一次倒干凈后，用吸水紙將包被板內(nèi)液體拍干。

（2）按所需要用量，臨用前用單道移液器取等體積底物液（3號液）和顯色液（4號液）充分混勻，每孔加入100μl，蓋膜，避光37℃反應(yīng)15min。

（3）15min時間到后取出反應(yīng)后的酶標(biāo)板，每孔用多道移液器加入終止液（6號液）50μl。用酶標(biāo)儀讀取OD值。

5 結(jié)果判定

（1）有效判定：當(dāng)陰性對照孔OD值≥0.5（若小于0.5則實驗無效），當(dāng)陽性對照孔IP值≥60%（若小于60%則實驗無效）。

（2）檢驗結(jié)果：樣品PI≥50%時，判定為口蹄疫病毒抗體陽性；樣品PI＜50%時，判定為口蹄疫病毒抗體陰性。

6 注意事項

（1）洗滌液的配置必須用蒸溜水或去離子水稀釋，避免水質(zhì)不符合要求，影響實驗結(jié)果的判定。

（2）實驗前所用的試劑盒和畜種血清樣品都應(yīng)恢復(fù)至室溫時再開始做實驗。

（3）洗滌液的配置應(yīng)比實際需要量多配置一些，避免因試劑在各個器具上的殘留而導(dǎo)致的洗滌液的不足，需臨時加配延誤時間使反應(yīng)時間不同步，影響實驗結(jié)果。同時還應(yīng)注意洗板機(jī)的注水口注水是否通暢、吸水口吸水是否通暢，確保反應(yīng)板每孔必需注滿洗滌液洗滌干凈。

（4）添加酶標(biāo)結(jié)合物時，槍頭不要碰包被板孔內(nèi)壁和外壁。

（5）做實驗時應(yīng)做好個人防護(hù)，穿好防護(hù)服、佩戴好防護(hù)帽、手套和口罩，實驗中試劑使用結(jié)束后應(yīng)立即將試劑瓶蓋緊，防止剩余試劑被污染，影響后續(xù)的檢測；實驗結(jié)束廢棄物由醫(yī)療廢棄物處理機(jī)構(gòu)統(tǒng)一處理，不可以隨意丟棄，以免造成環(huán)境的污染。

7 結(jié)果分析

全縣有16個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，244個行政村，隨機(jī)抽取生豬養(yǎng)殖場20個，每場采集血清樣品15份；零散養(yǎng)殖戶隨機(jī)抽取16戶，每戶采集血清樣品5份，共計380份，合格340份、合格率89%?？傮w來看我縣生畜口蹄疫病毒O型的免疫抗體水平較高，確保了我縣常年處于疫苗保護(hù)狀態(tài)，有效預(yù)防控制了動物疫病的發(fā)生流行，確保了全縣全年動物疫情的穩(wěn)定控制態(tài)勢。