強氯精對白斑狗魚幼魚的急性毒性試驗

張俊杰，美合日阿依·喀斯木

新疆農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，烏魯木齊 830052

白斑狗魚（Esox lucius）為鮭形目（Salmoniformes）、狗魚科（Esocidae）、狗魚屬（Esox）的一種大型淡水魚類，兇猛貪食，是世界性著名的游釣魚類，分布于北美洲及歐亞大陸北方的74°N～36°N冷水淡水流域，在我國白斑狗魚僅分布于新疆北部額爾齊斯河流域，在烏倫古湖和博斯騰湖均有產(chǎn)量，是新疆重要的土著經(jīng)濟魚類之一。白斑狗魚的生長速度很快、味道鮮美、肉質(zhì)堅韌少刺、營養(yǎng)很豐富，是人們喜愛的優(yōu)質(zhì)食用魚和重要的經(jīng)濟魚類。

2001年上海海洋大學與新疆額爾齊斯河特種魚類繁育場聯(lián)合攻關(guān)，率先在國內(nèi)實現(xiàn)了白斑狗魚的人工繁殖和苗種培育，各地養(yǎng)殖單位陸續(xù)引入并開展了人工養(yǎng)殖。但是白斑狗魚人工養(yǎng)殖過程養(yǎng)殖中，由于密度不斷加大，導致養(yǎng)殖水體水質(zhì)惡化、細菌大量繁殖，導致白斑狗魚病害的發(fā)生越來越嚴重。為減少白斑狗魚病害的發(fā)生和危害，需要采用相應(yīng)的藥物進行預(yù)防和治療，除了參考其它魚類常用藥物使用方法外，還要考慮這些藥物對白斑狗魚的特殊毒性。

本試驗通過進行強氯精對白斑狗魚幼魚的急性毒性試驗，探討強氯精這一生產(chǎn)上最常用消毒藥物對白斑狗魚幼魚的半致死濃度和安全濃度，以期更好地為在白斑狗魚的疾病預(yù)防和治療時的安全用藥提供參考。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗用魚

試驗用魚為來源于新疆農(nóng)業(yè)大學生命科學學院水產(chǎn)養(yǎng)殖實驗室人工孵化的25 d白斑狗魚幼魚。試驗時選擇體態(tài)正常、體格健壯、活力較強的白斑狗魚幼魚，平均體長3.2±0.2 cm，平均體重是0.22±0.1 g，試驗期間不喂食。

1.1.2 試驗藥品

強氯精為南京萬福金安生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的萬福金安消毒片，有效氯含量為48%～58%，約500mg/片。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗條件

所有試驗在新疆農(nóng)業(yè)大學生命科學學院水產(chǎn)養(yǎng)殖實驗室內(nèi)進行，試驗用水為充分曝氣12 h以上的自來水，試驗過程中，水溫為18～19℃，試驗容器為10 L的塑料盆。

1.2.2 預(yù)備試驗

本試驗的預(yù)備試驗和正式試驗都采用常溫靜水試驗進行。先參考強氯精常用的潑灑濃度和對其它魚類的急性毒性試驗結(jié)果，先設(shè)計5個間距較大濃度作為預(yù)備試驗濃度，分別為50、10、2、0.4、0.08mg/L，同時設(shè)置空白對照組，每個梯度在3個水盆設(shè)置為3個重復(fù)。白斑狗魚幼魚按照濃度梯度從低到高的順序逐個放入，每個重復(fù)放幼魚10尾。

試驗開始后，前8 h連續(xù)觀察，觀察記錄試驗幼魚的表現(xiàn)和存活情況，并于24 h后記錄幼魚的死亡數(shù)，找出引起白斑狗魚幼魚的24 h內(nèi)死亡率0～100%的強氯精濃度范圍。判斷幼魚死亡的標準是用小撈子撈出來看看幼魚的反應(yīng)，用玻璃棒輕輕刺激尾柄部位，5min內(nèi)無反應(yīng)即可確定為個體死亡，死亡的幼魚及時撈出。

1.2.3 正式試驗

根據(jù)預(yù)備試驗，得到引起白斑狗魚幼魚24 h內(nèi)死亡0～100%的強氯精濃度，按寇氏法(Karber)設(shè)計分組，設(shè)置5個等對數(shù)間距梯度，分別為0.4、0.6、0.89、1.34、2.0mg/L，作為正式試驗時所需要的強氯精試驗濃度，每個藥物濃度設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)放幼魚10尾，同時設(shè)一個不含藥物的空白對照組。實驗過程基本上跟預(yù)備實驗的過程一樣，連續(xù)觀察8 h實驗魚的反應(yīng)和中毒癥狀，記錄不同濃度下幼魚在24 h、48 h和96 h時的死亡情況。

1.2.4 半致死濃度和安全濃度的計算

根據(jù)實驗數(shù)據(jù)分別用改進寇氏法（karber）求出強氯精對白斑狗魚幼魚24 h、48 h、96 h的半致死劑量(LD50)，計算公式如下:

式中：

Xm―為最大劑量的對數(shù)值；

i―為相鄰劑量比值的對數(shù)；

∑p―為各組死亡率的總和(以小數(shù)表示)；

Pm―最大劑量組的死亡率；

Pn―最小劑量組的死亡率。

并根據(jù)以下公式計算安全濃度。

SC=LD5048×0.3/(LD5024/LD5048)2

2 結(jié)果與分析

2.1 白斑狗魚幼魚在強氯精水體中的中毒及死亡癥狀

預(yù)備試驗時，放入較高濃度強氯精水體（50、10、2.0mg/L）中的白斑狗魚幼魚一開始反應(yīng)劇烈，表現(xiàn)為狂躁不安，沿盆壁劇烈游動，頭部不時浮出水面，持續(xù)一段時間后尾部擺動幅度增加，但前行緩慢，幼魚身體逐漸失去平衡，出現(xiàn)側(cè)翻。瀕臨死亡時魚側(cè)浮于水面，呼吸急促，口、鰓蓋、鰭條張開幅度增大，偶爾急速翻轉(zhuǎn)數(shù)次，而后漂浮于水面，呈假死狀態(tài)，對刺激反應(yīng)不敏感，死亡后鰓蓋張開。其中在50mg/L強氯精濃度水體，5 min內(nèi)白斑狗魚幼魚全部死亡；在10mg/L強氯精濃度水體，白斑狗魚幼魚放入15 min后開始死亡，5 h內(nèi)全部死亡；在2 mg/L強氯精濃度水體，白斑狗魚幼魚17 h后開始死亡，24 h內(nèi)全部死亡。死亡幼魚顯微觀察，可看到鰓部發(fā)紅，體表黏液增多，體色變淺。而在0.4、0.08mg/L強氯精濃度水體中的白斑狗魚幼魚沒有出現(xiàn)明顯的異常反應(yīng)。

正式試驗時，在2.0mg/L強氯精水體中，白斑狗魚幼魚表現(xiàn)與預(yù)備試驗基本上相同。在1.34mg/L強氯精水體中，白斑狗魚幼魚先狂游一陣，而后平靜下來，并不時亂動，最后一動不動，逐漸死亡。在0.89mg/L強氯精水體中，白斑狗魚幼魚基本上比較平靜，只是死亡前偶爾出現(xiàn)亂游現(xiàn)象。在0.4和0.6mg/L強氯精水體中的白斑狗魚幼魚沒有表現(xiàn)明顯的異常反應(yīng)，但是96 h內(nèi)也分別死亡1-2尾。

2.2 強氯精對白斑狗魚幼魚的半致死濃度和安全濃度

根據(jù)正式試驗中不同濃度強氯精水體中白斑狗魚幼魚的死亡情況統(tǒng)計結(jié)果，分別計算出強氯精對白斑狗魚幼魚的24 h、48 h和96 h的半致死濃度（LD50）為1.38、1.29、0.89mg/L（如表1所示）。并由此計算出強氯精對白斑狗魚幼魚的安全濃度（SC）為0.34mg/L。

表1 白斑狗魚幼魚在不同濃度強氯精水體中死亡率和半致死濃度和安全濃度

3 討論

3.1 強氯精的作用及其對魚類的毒性作用

強氯精，化學名稱為三氯異氰尿酸（trichloroisocyanuric acid），是漁業(yè)生產(chǎn)中用于防治細菌性魚病和改善水質(zhì)的常用藥物，是一種高效、廣譜、低毒的殺菌消毒劑。強氯精在水中產(chǎn)生次氯酸鈉，分解產(chǎn)生初生態(tài)氧將菌體的蛋白質(zhì)氧化或有效氯直接作用于菌體蛋白質(zhì)，殺菌力為漂白粉的100倍左右。但是強氯精在強力殺菌的同時，對魚類也具有比較強的毒性，在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中，稍有不慎就會造成養(yǎng)殖魚類的死亡。草魚幼魚在濃度為3mg/L的強氯精水體中，在30min后開始分泌大量粘液，活動由開始的活躍變得緩慢，沉于缸底，呼吸逐漸放慢，呼吸深度加大，5 h后開始死魚，72 h死亡率達100%。本試驗中白斑狗魚幼魚在強氯精水體中的中毒癥狀與草魚幼魚的中毒癥狀基本相同。

3.2 強氯精對不同魚類的安全濃度與安全使用

強氯精水體對不同的魚類的安全濃度是不同的，強氯精在水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中一般使用濃度是0.1～0.3mg/L，強氯精對部分養(yǎng)殖魚類安全濃度低于0.3mg/L，甚至低于0.1mg/L，表現(xiàn)出很高的毒性，如對月鱧的安全濃度是0.24mg/L，對劍尾魚的安全濃度為0.22mg/L，對厚頜魴魚苗的安全濃度是0.190mg/L，對南方大口鯰的安全濃度是0.147 mg/L，對梭鱸幼魚的安全濃度為0.141mg/L，對鯰魚魚苗的安全濃度為0.0357mg/L，對大刺鰍魚苗的安全濃度為0.041mg/L。在這些魚類的養(yǎng)殖生產(chǎn)和疾病防治過程中，就應(yīng)該禁用強氯精。

強氯精對其他一些養(yǎng)殖魚類的安全濃度超過0.3mg/L，如對云斑鮰的安全濃度為0.38mg/L，對草魚魚苗的安全濃度為0.4436 mg/L，對淡水白鯧的安全濃度為0.492mg/L，對金魚稚魚的安全濃度為0.53mg/L，對鯪魚魚苗的安全濃度為0.73mg/L，在這些魚類養(yǎng)殖過程中可以選擇強氯精，進行水體消毒和水質(zhì)凈化。本試驗結(jié)果表明，強氯精對白斑狗魚幼魚的安全濃度為0.34mg/L，接近強氯精的最高水體潑灑濃度，說明強氯精對白斑狗魚幼魚的毒性較強，從安全的角度來看，實際養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用強氯精時，要準確計算藥物劑量，密切觀察魚的活動情況，高濃度藥物浸泡時最好先用少量魚做試驗，以免導致大量魚類中毒。