RhD陰性獻(xiàn)血者1 412例表型分布特征和不規(guī)則抗體

高朋真

(安陽市中心血站，河南 安陽 455000)

Rh血型系統(tǒng)婦女妊娠、輸血治療中可能會引起新生兒溶血病、自免溶貧及免疫性輸血反應(yīng)等臨床癥狀[1]，始終是人們臨床輸血重點關(guān)注的血型系統(tǒng)。對獻(xiàn)血者正確地進(jìn)行RhD血型鑒定，可以鞏固稀有血型獻(xiàn)血者隊伍、減少Rh血型系統(tǒng)同種免疫和輸血反應(yīng)的發(fā)生，保障臨床用血的需求與安全[2-3]?，F(xiàn)將安陽地區(qū)2013年1月至2019年12月RhD陰性獻(xiàn)血者1 412例抗原分型情況、不規(guī)則抗體檢測情況、人口統(tǒng)計學(xué)情況進(jìn)行初步的分析研究，報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象2013年1月至2019年12月安陽地區(qū)無償獻(xiàn)血人群共計301 145例，初篩RhD陰性獻(xiàn)血者1 476例，其中確認(rèn)RhD陰性獻(xiàn)血者1 412例。

1.2 試劑與儀器KA-2200離心機(湖南湘儀)；恒溫水浴箱(湖南湘儀)；IgM抗-D(國械注準(zhǔn)20163402337)、抗-C(國械注準(zhǔn)20173400644)、抗-c(國械注準(zhǔn)20173400634)、抗-E(國械注準(zhǔn)20173400635)、抗-e(國械注準(zhǔn)20173400621)、抗-M(科研用)、抗-N(科研用)，IgG抗-D(科研用)、抗體篩選細(xì)胞(國械注準(zhǔn)20163402229)、普細(xì)胞(科研用)、抗球蛋白試劑IgG+C3d(國械注準(zhǔn)20153401144)均來自上海血液生物醫(yī)藥有限公司；抗D(IgM+IgG)(英國Millipore公司，國食藥監(jiān)械(進(jìn))字2014第340433號)；凝聚胺試劑(臺灣貝索生物技術(shù)公司，國械注準(zhǔn)20163400841)；乙醚(安徽金邦醫(yī)藥)。

1.3 Rh陰性篩選與確認(rèn)試驗

1.3.1初篩試驗 檢驗科采用微量板法對所有無償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行初篩檢測，標(biāo)本結(jié)果為陰性者送血研室做確認(rèn)實驗。

1.3.2確認(rèn)試驗 初篩陰性樣本，血研室使用1支IgM抗-D、1支IgG抗-D和2支不同批號的IgM+IgG抗-D試劑，采用凝聚胺法進(jìn)行確認(rèn)。如果試管均不凝集判為陰性，若出現(xiàn)的凝集度較弱(±～2+)或部分試管弱凝集則判為Dv型。

1.4 Rh抗原分型試驗采用試管法，使用單克隆IgM-C、c、E、e試劑進(jìn)行表型鑒定。

1.5 不規(guī)則抗體篩選與鑒定按抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒說明書要求，用凝聚胺方法進(jìn)行抗體篩查；篩查陽性標(biāo)本按普細(xì)胞試劑盒說明書要求，用間接抗人球蛋白法進(jìn)行抗體特異性鑒定。

1.6 Del型篩查方法按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程(4版)》[4]“乙醚放散法”步驟，進(jìn)行放散試驗。

1.7 信息來源在唐山啟奧血液管理信息化系統(tǒng)中查詢RhD陰性獻(xiàn)血者的“ABO血型”“性別”“籍貫”等信息，將1 412例獻(xiàn)血者逐個進(jìn)行登記。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法采用文獻(xiàn)方法計算Hardy-Weinberg吻合度[5]；采用軟件SPSS 19.0對列表數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Rh陰性試驗確認(rèn)情況301 145例獻(xiàn)血者男女比例為200 207/100 938，檢出1 476例為RhD初篩陰性，其中1 412例為RhD確認(rèn)實驗陰性，獻(xiàn)血人群中RhD陰性率為0.47%(1 412/301 145)；檢出Dv型3例，Del型61例。

2.2 Rh陰性獻(xiàn)血者同種抗體分布情況1 412例RhD確認(rèn)實驗陰性獻(xiàn)血者中，檢出抗-D抗體9例，全部為女性；抗-E抗體1例，全部為男性；IgM型抗-M抗體2例，男女比例為1∶1；冷自身抗體4例，男女比例為1∶3。男女RhD陰性獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.355，P<0.001)。見表1。

表1 RhD陰性獻(xiàn)血者中檢出不規(guī)則抗體情況(n)

2.3 RhD陰性獻(xiàn)血者抗原表型分布及Hardy-Weinberg吻合度情況1 412例RhD陰性獻(xiàn)血者的C、c、E、e 4種表型抗原的基因頻率e最高0.974 7，其次為c>C>E；表型以ccdee為最高0.565 9(799/1 412)，其次為Ccdee>ccdEe>CCdee>CcdEe>CCdEe，未發(fā)現(xiàn)CCdEE、ccdEE、CcdEE表型。見表2。

表2 RhD陰性獻(xiàn)血者基因型頻率及Hardy-Weinberg吻合度

2.4 RhD陰性獻(xiàn)血者人口統(tǒng)計學(xué)分布情況1 412例RhD陰性獻(xiàn)血者不同ABO血型分布情況、不同性別分布情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；1 412例RhD陰性獻(xiàn)血者不同籍貫分布情況比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 1 412例RhD陰性獻(xiàn)血者人口統(tǒng)計學(xué)分布特征

3 討論

Rh血型系統(tǒng)主要有D、C、c、E、e 5種抗原，其中D抗原是最重要、最具免疫原性的抗原，在臨床實踐中具有重要意義[6]。在我國，漢族人群中RhD陰性人口占漢族總?cè)丝诘?%～5%[7]，所以RhD陰性血又稱“熊貓血”。本研究共301 145例樣本，檢出RhD陰性獻(xiàn)血者1 412例，陰性率為0.47%(1 412/301 145)，說明安陽地區(qū)RhD陰性人群分布與全國平均水平大體一致。但通過籍貫比較安陽市區(qū)及所屬縣(市)之間獻(xiàn)血者中RhD陰性分布有差異，其中滑縣RhD陰性占比高于其他地區(qū)及全市總體水平，可能與當(dāng)?shù)孛褡鍢?gòu)成有關(guān)。

在檢驗科送檢的1 476例初篩RhD陰性獻(xiàn)血者中檢出Dv型3例(本研究因未做遺傳學(xué)基因分型無法進(jìn)一步準(zhǔn)確分類)，檢出Del型61例(通過吸收放散實驗才能檢測到D抗原的，統(tǒng)稱為Del型)，占初篩RhD陰性的4.1%，低于張志梅等[8]報道的我國漢族RhD陰性人群中24%的比例。在臨床實踐中由于Dv型個體和Del型個體仍存在一定的免疫原性[9-10]，且我國各級各類采供血機構(gòu)均未對Del型進(jìn)行區(qū)分，將其一律視為RhD陰性血供應(yīng)臨床，對于未妊娠女性患者在臨床救治中輸注該類型血液有產(chǎn)生抗-D特異性抗體的風(fēng)險。所以，對于有特殊需求的患者，應(yīng)提供更加精準(zhǔn)的輸血服務(wù)，開展獻(xiàn)血者Dv型和Del型篩選，能有效避免此類風(fēng)險發(fā)生，存在一定的臨床意義。在采供血工作中，對于存在特異性抗體的血液一般將血漿做報廢處理，紅細(xì)胞洗滌后供應(yīng)臨床，從而避免血液浪費，保證臨床用血的效果與安全。

本研究顯示，安陽地區(qū)Rh抗原D、C、c、E、e的表型及基因型頻率結(jié)果與西安地區(qū)、徐州地區(qū)、湖北地區(qū)[11-13]報道的RhD陰性表型分布結(jié)果一致。通過對安陽地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者人類遺傳學(xué)及基因型分布的調(diào)查分析，進(jìn)一步補充了該地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者的相關(guān)數(shù)據(jù)，為計劃采血、合理調(diào)配血液、臨床患者配血和減少再次輸血困難的發(fā)生提供了有力的數(shù)據(jù)支持。

綜上所述，詳細(xì)掌握安陽地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者在性別、籍貫、ABO血型等方面的分布情況，在Rh抗原表型及基因型方面的分布特征，對預(yù)判安陽地區(qū)RhD陰性血的臨床需求，合理安排血液庫存，精準(zhǔn)輸血，避免血液浪費或RhD陰性血液供應(yīng)不足等具有積極的現(xiàn)實意義。