DC-CIK細(xì)胞免疫聯(lián)合干擾素治療腎細(xì)胞癌的臨床療效評(píng)價(jià)

李勛鋼，張文圣，顏小平

（九江市第一人民醫(yī)院（南昌大學(xué)附屬九江醫(yī)院）泌尿外科，江西 九江 332000）

腎癌又稱為腎細(xì)胞癌，是最常見(jiàn)的實(shí)質(zhì)性惡性腫瘤，腎細(xì)胞癌占成人惡性腫瘤的2%～3%，腎臟原發(fā)性惡性腫瘤的85%～90%。在泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中，僅次于膀胱癌，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[1]。目前，根治性腎癌切除術(shù)是最有效、最常用的治療方法，放射、化學(xué)和激素等治療可提高患者的臨床療效，但總體效果不佳，近年來(lái)研究表明細(xì)胞免疫治療已成為一種重要且有效的抗癌的治療方法[2-3]。本研究選取80例行腹腔鏡腎癌手術(shù)的腎細(xì)胞癌患者進(jìn)行DC-CIK細(xì)胞免疫聯(lián)合干擾素治療，評(píng)價(jià)其臨床療效及安全性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年3月至2018年3月于本院行腹腔鏡腎癌手術(shù)的腎細(xì)胞癌患者80 例作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，每組40例。其中男47例，女33例；年齡43.5～78.3 歲，平均年齡（65.7±12.3）歲。術(shù)后病理腎透明細(xì)胞癌65 例，嫌色細(xì)胞癌6 例，其他9 例。治療前均取得患者及家屬同意并簽署知情同意書，本研究通過(guò)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：參照美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）分期標(biāo)準(zhǔn)，TNM 分期為T3～T4 期病理確診斷的腎癌患者；治療前Karnofsky 評(píng)分（KPS）＞60 分；預(yù)計(jì)生存時(shí)間＞6 個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：有生物制品過(guò)敏患者；術(shù)后復(fù)發(fā)及非原發(fā)性腎癌患者；心、肝、肺等重要器官功能不全或衰竭患者；妊娠或哺乳期婦女；患有嚴(yán)重的自身免疫性疾病患者；嚴(yán)重凝血功能異?；颊摺?/p>

1.2 方法 對(duì)照組采用干擾素治療。患者術(shù)后第2周開始使用α-干擾素，每次5×106U，隔天1 次，肌內(nèi)注射，1 個(gè)療程8～12周，并給予對(duì)癥治療。定期行肝腎功能、血清鈣，胸部、腹部CT或MRI及全身骨掃描。

治療組采取DC-CIK細(xì)胞免疫聯(lián)合干擾素治療。DC-CIK細(xì)胞免疫治療方法：抽取患者外周血，采用血細(xì)胞分離機(jī)分離患者外周血單核細(xì)胞，體積為0.3倍血容量。采用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液從單個(gè)核細(xì)胞分離淋巴細(xì)胞，用培養(yǎng)液洗滌2 次BIN，無(wú)血清培養(yǎng)基混懸于培養(yǎng)瓶中并置于37 ℃5%CO2孵育箱中，2 h后將懸浮細(xì)胞移出，加入IL-4 500 U/LGM-CSF 1 000 U/mL 繼續(xù)培養(yǎng) 2～3 d，換液 1 次，第 6 天加入 TNF-α 500 U/mL。LCIK細(xì)胞培養(yǎng)、分離后加入重組人IFN 1 000 U/mL和10% AB 型人血清的RPMI 1 640 培養(yǎng)液，24 h 后更換成含100 ng/mL小鼠抗人CD3單克隆抗體1 000 U/mL。IL-1和IL-2的RPMI 1 640完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)2 d后更換為含IL-2的完全培養(yǎng)液，隔日換液維持培養(yǎng)DC-CIK細(xì)胞培養(yǎng)。采集第7天的 DC 和 CIK 細(xì)胞按 1∶5 混合培養(yǎng)，3 d 后開始應(yīng)用?？刂茦?biāo)準(zhǔn)：CD3+CD56+NKT≥50%，CD3+CD8+≥30%，細(xì)胞存活率≥95%，不含細(xì)菌和內(nèi)毒素。DC-CIK 細(xì)胞回輸：靜脈輸注DC-CIK 細(xì)胞，6次為1 個(gè)療程，每例患者至少治療2 個(gè)療程，最多治療6 個(gè)療程。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組臨床療效、治療前后免疫功能、生活質(zhì)量及不良反應(yīng)情況。臨床療效評(píng)價(jià)根據(jù)RECIST實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[4]，分為完全緩解（completeremission，CR）：病變完全消失并維持4 周以上；部分緩解（partialremission，PR）：腫瘤病灶最大垂直兩徑乘積縮小≥50%，并維持4周以上；病情穩(wěn)定（stabledisease，SD）：腫瘤縮小或增大＜25%，疾病進(jìn)展（progressiondisease，PD）：腫瘤增大≥25%或出現(xiàn)新病灶。以CR 和PR 為有效，疾病控制率（diseasecontrolrate，DCR）=（CR+PR+SD）/總例數(shù)×100%?？陀^緩解率（objectiveresponserate，ORR）=（CR+PR）/總例數(shù)×100%。隨訪總體中位時(shí)間為32個(gè)月，第1次隨訪為術(shù)后第4周，每3個(gè)月隨訪1 次，觀察患者疾病進(jìn)展及生存情況；采用生活質(zhì)量KPS評(píng)分比較患者治療前后生活質(zhì)量情況，KPS＞80分，患者生活自理，50～79 分，患者生活半自理，評(píng)分越高表示生活質(zhì)量越好；采用流式細(xì)胞儀分析患者治療前后T細(xì)胞亞群及NK等細(xì)胞變化，并對(duì)患者免疫功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“”表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床療效比較 治療組疾病控制率為82.5%，客觀緩解率為52.5%；對(duì)照組疾病控制率為62.5%，客觀緩解率為22.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床療效比較[n（%）]Table 1 Comparison of clinical efficacy between the two groups[n(%)]

2.2 兩組免疫功能與生活質(zhì)量評(píng)分比較 治療后，治療組免疫功能、KPS評(píng)分明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），且與治療前比較明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組治療前后免疫功能及生活質(zhì)量比較（）Table 2 The comparing of the immune function and quality of life between two groups before and after treatment()

表2 兩組治療前后免疫功能及生活質(zhì)量比較（）Table 2 The comparing of the immune function and quality of life between two groups before and after treatment()

注：與對(duì)照組治療后比較，aP＜0.05

組別治療組（n=40）時(shí)間治療前治療后P值治療前治療后P值KPS（分）61.31±1.36 78.53±4.67a＜0.05 61.50±3.32 65.11±1.47＜0.05免疫功能評(píng)價(jià)對(duì)照組（n=40）CD3+（%）56.27±0.96 76.27±1.73a＜0.05 55.31±1.16 59.27±0.59＜0.05 CD4+（%）33.08±1.08 54.08±1.12a＜0.05 33.97±0.85 42.08±1.20＜0.05 CD8+（%）18.51±2.36 30.08±3.04a＜0.05 18.03±2.19 21.43±3.26＜0.05 CD56+（%）15.01±0.76 21.52±1.26a＜0.05 15.52±0.81 18.73±0.96＜0.05 CD4+/CD8+1.31±0.16 2.03±0.35a＜0.05 1.33±0.12 1.43±0.28＜0.05

2.3 兩組平均生存期比較 治療組平均生存期為（41.6±3.1）個(gè)月，明顯長(zhǎng)于對(duì)照組的（39.3±2.9）個(gè)月（t=3.427，P＜0.05）。

2.4 兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較 兩組均未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，部分患者出現(xiàn)輕微的不良反應(yīng)。其中治療組輕度乏力3例，惡心嘔吐2例，發(fā)熱1例，不良反應(yīng)發(fā)生率為15.0%；對(duì)照組發(fā)熱3例，較嚴(yán)重的血細(xì)胞減少等骨髓抑制1例，惡心、嘔吐及納差1例，不良反應(yīng)發(fā)生率為12.5%，均停藥或?qū)ΠY治療后好轉(zhuǎn)，兩組不良反應(yīng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.105）。

3 討論

目前腎細(xì)胞癌的治療仍以手術(shù)治療為主，但臨床診斷腎癌時(shí)，發(fā)現(xiàn)約25%～33%的患者已有轉(zhuǎn)移病灶，術(shù)后20%～40%的患者可能出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，在部分轉(zhuǎn)移患者中其中位生存期僅8～12 個(gè)月，且5 年生存率不足10%。術(shù)后的化學(xué)治療及放射治療效果不滿意，不能降低腫瘤復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移。目前，生物免疫治療廣泛應(yīng)用于腎細(xì)胞癌術(shù)后輔助治療[2]

α-干擾素（INF-α）是目前研究較多的生物免疫治療制劑，1983年開始應(yīng)用于臨床，是首個(gè)用于臨床的基因重組細(xì)胞因子。有文獻(xiàn)[5]報(bào)道，單獨(dú)應(yīng)用IFN-α治療轉(zhuǎn)移腎癌的有效率為10%～15%，α-干擾素主要由白細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等在細(xì)菌、DNA 或RNA 病毒、多核苷酸等刺激物誘導(dǎo)下產(chǎn)生，具有抗病毒、抑制某些細(xì)胞生長(zhǎng)、免疫調(diào)節(jié)、抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞等多種作用。其中,抗腫瘤作用主要通過(guò)抗細(xì)胞增殖作用、直接細(xì)胞毒性作用等多種機(jī)制[6-7]。其抗腫瘤活性包括3個(gè)方面：①直接或間接抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)；②調(diào)控宿主抗腫瘤免疫反應(yīng)；③改變宿主和腫瘤之間的關(guān)系。通過(guò)抑制腫瘤血管形成、分解營(yíng)養(yǎng)因子等抑制腫瘤發(fā)展。但應(yīng)用干擾素治療會(huì)產(chǎn)生發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛、乏力等不良反應(yīng)，多次給藥后患者多可耐受。大劑量應(yīng)用可出現(xiàn)消化道反應(yīng)、骨髓抑制、神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)癥狀，且IFN-α 的最佳方案目前尚無(wú)定論。本研究對(duì)照組1例出現(xiàn)較嚴(yán)重的血細(xì)胞減少等骨髓抑制，1例出現(xiàn)惡心、嘔吐及納差等嚴(yán)重消化道不良反應(yīng)。

目前，以DC-CIK 細(xì)胞生物免疫治療方法為主的細(xì)胞過(guò)繼免疫治療越來(lái)越受到關(guān)注[8]。樹突狀細(xì)胞（dendriticcells，DC）是Steinman 等[9]首次在小鼠脾臟中發(fā)現(xiàn)，其抗瘤機(jī)制為：①分泌IL-12、IL-10、Ⅰ型干擾素、TGF-p、IL-lp 等細(xì)胞因子；②誘導(dǎo)產(chǎn)生大量效應(yīng)T細(xì)胞；③保持效應(yīng)T細(xì)胞在腫瘤部位的長(zhǎng)期存在；④啟動(dòng)效應(yīng)T 細(xì)胞遷移至腫瘤部位；⑤抑制腫瘤血管的生成[10]。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokineinducedkillcells，CIK）是一非主要組織相容復(fù)合體（majorhistocompatibilitycomplex，MHC）限制性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（主要包括CD3+CD56+）。CIK抗瘤作用主要有以下3個(gè)方面：①產(chǎn)生分泌大量的炎性細(xì)胞因子（IFN、TNF、IL-2 等），通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)反應(yīng)性或抑制腫瘤細(xì)胞而殺傷腫瘤細(xì)胞；②通過(guò)釋放大量能穿透腫瘤細(xì)胞膜的細(xì)胞毒性顆粒，使腫瘤細(xì)胞破壞溶解；③通過(guò)介導(dǎo)Fas-FasL途徑致腫瘤細(xì)胞凋亡及壞死[11-12]。近年來(lái)，DC-CIK生物免疫治療作為新的腫瘤治療手段，已應(yīng)用于腎細(xì)胞癌術(shù)后輔助治療。Wang等[13]分別采用DC聯(lián)合CIK治療晚期腎細(xì)胞癌患者，與單獨(dú)用DC聯(lián)合干擾素治療轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌相比，均獲得較好療效。本研究研究顯示，治療組免疫功能和KPS評(píng)分均明顯高于對(duì)照組，治療組免疫功能較治療前明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05）。隨訪期間，治療組總生存期較對(duì)照組延長(zhǎng)（P＜0.05）。兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均未出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，安全性較高。

綜上所述，DC-CIK 細(xì)胞免疫聯(lián)合干擾素治療腎細(xì)胞癌安全可行，療效顯著，不良反應(yīng)發(fā)生率較低，可作為腎細(xì)胞癌的治療選擇。