嵊縣花豬凍精配種繁育研究

章曉煒，朱志偉，馬敏彪，劉莉君，王友杉

(1.浙江省畜牧技術推廣與種畜禽監(jiān)測總站，浙江 杭州 310021；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學研究院畜牧獸醫(yī)研究所； 3.紹興市嵊花種豬有限公司)

畜禽遺傳資源是生物多樣性的重要組成部分，是維護國家生態(tài)安全、農(nóng)業(yè)安全的重要戰(zhàn)略資源，是畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展的物質基礎，畜禽遺傳資源一旦滅絕，具有不可再生性。為有效應對非洲豬瘟威脅，2019年3月至10月期間，浙江省采集制作凍存了9個地方豬種83個家系，97頭公豬的精液，共計9.3萬劑，每劑0.25 mL，為確保我省地方豬種資源不丟失，作了很必要的資源儲備。

為進一步評定地方豬精液冷凍保存效果與探索利用方式，本項目結合嵊縣花豬國家級保種場實際需求，開展地方豬凍精配種繁育復群試驗研究，旨在檢驗冷凍精液的配種效果，以及滿足地方豬保種場擴充保種群體的實際需求開展本次研究。

1 材料和方法

1.1試驗材料

1.1.1冷凍精液 根據(jù)已制作凍精數(shù)量、保種資源場需求、飼養(yǎng)管理等因素，擬在嵊縣花豬保種場開展冷凍精液配種繁育研究，該場有后備母豬20頭，每個家系擬使用凍精數(shù)量詳見表1。

1.1.2受體母豬 嵊縣花豬保種場有10個家系，每個家系擬配2頭母豬，可配母豬20頭，實際配種19頭母豬。受試母豬達體成熟，性周期節(jié)律正常、健康狀況良好，生殖器官無異常，免疫程序記錄完整(受體母豬的體重大于60 kg、月齡在6月齡以上、初情期后觀測2個發(fā)情期)。

1.1.3試驗程序 采用母豬定時輸精程序中的同步處理方法： 試驗豬在發(fā)情間期內任一天開始投藥記為第1天，每天14:00后在喂料之前以拌料投飼方式給后備母豬飼喂烯丙孕素20 mg/頭，連續(xù)飼喂 18 d，第19天停藥1 d。第20天08:00 給每頭后備母豬肌肉注射PMSG 1 000 IU，第23天16:00給每頭后備母豬肌肉注射GnRH 100 μg。第24天16:00對所有后備母豬進行第1次配種，第25天 08:00對所有后備母豬進行第2次配種，第26天上午對仍表現(xiàn)靜立反應的母豬補配1次。

表1 擬使用的凍精家系數(shù)量及使用計劃(實際配種19頭)

1.1.4凍精解凍復蘇 (1)稀釋液準備：輸精前提取稀釋液30-40 mL在36 ℃水浴平衡20 min以上。(2)解凍步驟：提取凍精迅速投入50 ℃水浴鍋中，來回搖晃8-10 s(或16 s)，拭干切口，倒入稀釋液管，混勻，殘留樣預觀活力，5-10 s，移入36 ℃水浴鍋，裝瓶恒溫保存，待輸。

1.1.5輸精劑量 按定時輸精程序中查情點確認輸精時間，采用“深部輸精法(AI)”間隔12 h，2次/頭的輸精標準深部法導入復蘇精液，劑量為20億/40 mL的標準。

1.1.6B超早孕檢查 AI操作實施豬只在正常情期18-20 d后觀測是否發(fā)情，并在30 d左右進行B超早孕檢查確認，若確認有早期孕囊的則判定為受胎，未懷孕的依據(jù)試驗程序再次輸精配種。

2 結果與分析

2.1庫存冷凍精液質量檢測 凍精的保存質量及凍后品質和受精能力直接影響人工授精的成功率與母畜受胎率與產(chǎn)仔率。衡量精液冷凍后的主要技術指標為凍后復蘇活力(直線運動精子的百分比率)。本試驗實施期間，委托浙江大學動物科學學院檢測。總體評價為：大部分樣品凍后活力在0.30以上，凍精合格率為82.8%。

2.2稀釋液配方 解凍復蘇的精子需要有一定能量、滲透壓、pH的緩沖稀釋液作為載體，以期通過稀釋液獲取能量，增加精子的運動能力提高受精率。稀釋液配方：葡萄糖3.7 g，EDTA 8.125 g，二水檸檬酸三鈉0.5 g，NaHCO30.125 g，KCl 0.0075 g，雙抗1%，PVA，茶堿或咖啡因5 mM，稀釋液pH 7.25，滲透壓315 mOsm/L。

2.3后備母豬定時輸精同步發(fā)情程序 試驗豬主要為后備母豬，由于初情期的不一致，自然發(fā)情周期無疑存在差異，為此，進行了后備母豬同期操作處理。按精準定時輸精(投藥+PMSG+GnRH)操作，實驗結果顯示：精準定時輸精同步發(fā)情率達100%(15/15)(表2)，并順利進行了深部輸精凍精授配，受胎6頭，受胎率為40%，證實此程序可以進行后備母豬同步發(fā)情處理。

表2 后備母豬定時輸精同步發(fā)情結果

2.4冷凍精液配種結果 本次試驗共2批次對19頭試驗豬操作，先后受胎11頭，總受胎率57.89%，獲得嵊縣花豬仔豬36頭，頭均產(chǎn)仔3.27頭(表3)，公母均衡，扣除木乃伊及死淘，存活31頭。

表3 受胎產(chǎn)仔情況

3 小結及討論

3.1本次實驗證明，采用冷凍精液保存地方豬遺傳資源是可行的，這為地方豬種的保種方式提供了一種新的途徑。

3.2試驗中反映出指標，如受胎率、產(chǎn)仔率偏低的結果，一方面可能是受采精公豬的影響，如公豬年齡老化，采精時，精子活力偏低等客觀原因；另一方面也為今后繼續(xù)開展相關技術研究，進一步提高凍精質量，提供了參考意義。

3.3本次試驗，通過開展相關技術研究建立了地方豬種精液的冷凍、批量解凍、稀釋定容、受體豬的同步發(fā)情、定時深部輸精等集成的配套地方豬冷凍精液應用復繁技術體系，成功產(chǎn)出了嵊縣花豬8個家系的仔豬，這對地方豬種及其它品種資源的保護和利用具有重大的意義。