肉牛飼用復(fù)合益生菌組合的篩選及添加試驗(yàn)

左秀峰，左秀麗，楊東英，左可吉

（1.山東省莒南縣畜牧發(fā)展促進(jìn)中心，山東莒南 276600；2.德州學(xué)院，山東德州 253023；3.山東省莒南縣文疃鎮(zhèn)左家溝村，山東莒南 276600）

本課題組篩選乳酸糞腸球菌、酵母菌和芽孢桿菌配制了四種肉牛飼用復(fù)合益生菌組合，另設(shè)不添加復(fù)合益生菌基礎(chǔ)日糧組作對(duì)照，優(yōu)選出最佳肉牛飼用復(fù)合益生菌組合，再進(jìn)行犢牛育肥添加試驗(yàn)，確定飼用復(fù)合益生菌在精補(bǔ)料中的最佳添加比例。

1 肉牛飼用復(fù)合益生菌組成

根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定，選擇可用于生產(chǎn)微生態(tài)制劑的微生物，即乳酸桿菌、乳酸鏈球菌、糞腸球菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌和酵母菌等六種微生物，在前期研究的基礎(chǔ)上，與德州學(xué)院、江西農(nóng)業(yè)大學(xué)和國(guó)家肉牛體系臨沂實(shí)驗(yàn)站聯(lián)合篩選出酵母菌、乳酸糞腸球菌、芽孢桿菌三種益生菌，經(jīng)不同比例組合按一定工藝研制了四種飼用復(fù)合益生菌組合（表1），代號(hào)分別為I、II、III、IV。

2 體外培養(yǎng)試驗(yàn)

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用體外培養(yǎng)方法，研究不同飼用復(fù)合益生菌組合對(duì)利雜黃牛瘤胃體外發(fā)酵的影響。體外培養(yǎng)試驗(yàn)設(shè)5個(gè)組，不添加益生菌的基礎(chǔ)日糧為對(duì)照組，4個(gè)試驗(yàn)組分別添加I、II、III、IV號(hào)飼用復(fù)合益生菌，添加量均為200 mg/kg。

表1 飼用復(fù)合益生菌組合

2.2 試驗(yàn)動(dòng)物及日糧組成 選擇2頭體重為（275±15）kg的安裝有永久性瘤胃瘺管的健康利雜黃牛，用于瘤胃液采集。試驗(yàn)期間每天飼喂2次（8點(diǎn)和18點(diǎn)），自由飲水?；A(chǔ)日糧為玉米-豆粕-青貯玉米秸日糧，按肉牛1.3倍維持需要配制，精粗比為60∶40，基礎(chǔ)日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平見表2。

2.3 體外培養(yǎng)試驗(yàn)

2.3.1 產(chǎn)氣量測(cè)定 每隔半小時(shí)記錄注射器的氣體量（mL），記錄完后排氣，累計(jì)培養(yǎng)24 h，計(jì)算總產(chǎn)氣量。

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

2.3.2 瘤胃液pH值測(cè)定 培養(yǎng)24 h后立即用PHS-320酸度計(jì)直接測(cè)定。

2.3.3 瘤胃液NH3-N濃度測(cè)定 參照馮宗慈等［1］的比色法進(jìn)行。

2.3.4 瘤胃液菌體蛋白（MCP）的測(cè)定 取經(jīng)預(yù)處理去除原蟲和飼料大顆粒的上清液10 mL，高速離心20 min，棄去上清液，沉淀的細(xì)菌部分加入9 mL 10%三氯乙酸溶液，混勻，再以4 000 r/min離心10 min，取沉淀物加入5%氫氧化鈉溶解，然后稀釋至25 mL。此稀釋液又經(jīng)4 000 r/min離心10 min，取上清液在紫外分光光度計(jì)上用280 nm和260 nm波進(jìn)行比色，應(yīng)用如下公式求出細(xì)菌蛋白質(zhì)含量：

細(xì)菌蛋白含量（mg/mL）＝（1.45×D280-0.74×D260）×稀釋倍數(shù)

2.3.5 瘤胃液揮發(fā)性脂肪酸（VFA）濃度測(cè)定 參照戈婷婷等［2］的氣相色譜法進(jìn)行。

2.4 數(shù)據(jù)分析 采用Excel 2003和 SPSS 16.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn)。

2.5 體外試驗(yàn)結(jié)果

2.5.1 不同飼用復(fù)合益生菌組合體外培養(yǎng)24 h的產(chǎn)氣量、pH值、MCP含量、NH3-N濃度和干物質(zhì)降解率 由表3可見，添加I、II、III、IV號(hào)飼用復(fù)合益生菌組合的試驗(yàn)組和對(duì)照組，其培養(yǎng)液的pH值均在正常范圍內(nèi)。添加I、II、III號(hào)飼用復(fù)合益生菌組合的24 h總產(chǎn)氣量比對(duì)照組有顯著提高（P＜0.05），各處理組間差異不顯著（P＜0.05），但I(xiàn)I號(hào)飼用復(fù)合益生菌組合的產(chǎn)氣量最高，為170.50 mL。I、II號(hào)飼用復(fù)合益生菌組合產(chǎn)生的微生物蛋白含量極顯著高于其他組（P＜0.01），其中II號(hào)飼用復(fù)合益生菌組合的微生物蛋白含量最高，達(dá)270.43 mg/100 mL，顯著高于I、III號(hào)（P＜0.05）。I、II、III號(hào)飼用復(fù)合益生菌組合產(chǎn)生的氨態(tài)氮濃度極顯著低于對(duì)照組和IV號(hào)組合（P＜0.01），IV號(hào)組合顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。II、III號(hào)飼用復(fù)合益生菌組合的干物質(zhì)降解率極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。

2.5.2 瘤胃液揮發(fā)性脂肪酸濃度 對(duì)照組和I、II、III、IV號(hào)組合的總VFA濃度分別為139.69±0.17、144.51±0.98、145.96±0.63、145.89±0.10、140.67±0.12 mmol/L，II號(hào)組顯著高于對(duì)照組。

綜上得出：添加飼用復(fù)合益生菌能夠穩(wěn)定瘤胃內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)瘤胃發(fā)酵功能改善。從生化指標(biāo)分析，以II號(hào)飼用復(fù)合益生菌組合（50%酵母菌+25%乳酸糞腸球菌+25%芽孢桿菌）的效果最佳，其最佳添加量和體內(nèi)應(yīng)用效果報(bào)告如下。

3 II號(hào)肉牛飼用復(fù)合益生菌添加試驗(yàn)

3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在山東省沂水縣某牛場(chǎng)選擇出生日期接近、體重相近的健康犢牛（3月齡以上）24頭，采用單因子隨機(jī)設(shè)計(jì)，均分為4組，每組6頭牛，試驗(yàn)期30 d，飼養(yǎng)環(huán)境一致。

表3 不同飼用復(fù)合益生菌組合對(duì)體外培養(yǎng)液中產(chǎn)氣量、pH值、MCP含量、NH3-N濃度和干物質(zhì)降解率的影響

3.2 日糧及飼養(yǎng)管理 所有犢牛在試驗(yàn)期內(nèi)每日人工哺喂牛奶1 kg，飼喂相同的基礎(chǔ)日糧，優(yōu)質(zhì)苜蓿干草3 kg，精料2 kg。3個(gè)試驗(yàn)組分別按精料量的0.05%、0.1%、0.2%添加II號(hào)肉牛飼用復(fù)合益生菌，于35～45 ℃拌料發(fā)酵3 d后飼喂，對(duì)照組不添加，每日飼喂2次，自由飲水。精料主要營(yíng)養(yǎng)成分見表4。

表4 精料主要營(yíng)養(yǎng)成分

3.3 生產(chǎn)性能指標(biāo)測(cè)定 犢牛在試驗(yàn)開始和結(jié)束日早晨空腹稱重，測(cè)定體尺指標(biāo)；每天飼喂?fàn)倥r(shí)觀察其糞便狀況，記錄腹瀉情況。

腹瀉頻率＝（腹瀉頭數(shù)×腹瀉天數(shù)）/（試驗(yàn)頭數(shù)×試驗(yàn)期天數(shù)）×100

糞便指數(shù)＝糞便評(píng)分之和/總頭數(shù)［3］

試驗(yàn)期內(nèi)每日對(duì)每頭犢牛的糞便打分，當(dāng)犢牛糞便評(píng)分＞2時(shí)記為一個(gè)腹瀉日；糞便評(píng)分為4時(shí)，按照牛場(chǎng)常規(guī)治療方案治療，每頭犢牛腹瀉一天記為腹瀉一次。評(píng)分準(zhǔn)則如下：

1分：正常，條形或粒狀；2分：輕度，軟糞，能成形；3分：中度，稠狀，不成形，糞水無分離；4分：嚴(yán)重，液狀，不成形，糞水有分離。

3.4 結(jié)果及分析 由表5可知，試驗(yàn)開始時(shí)各組犢牛的體尺和體重指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05），飼喂復(fù)合益生菌精料后，0.1%組和0.2%組的體高極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），顯著高于0.05%組（P＜0.05），0.05%組與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）；0.1%組和0.2%組的胸圍顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；試驗(yàn)結(jié)束時(shí)0.1%組和0.2%組的體重同樣顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)期間，0.1%組的日增重最高，顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其次是0.2%組和0.05%組。分析可得，添加0.1%的II號(hào)肉牛飼用復(fù)合益生菌（50%酵母菌+25%乳酸糞腸球菌+25%芽孢桿菌）可顯著提高犢牛的瘤胃消化率和全消化道消化率，糞便細(xì)膩松軟、無臭味［4］，且對(duì)犢牛生長(zhǎng)發(fā)育有顯著提高，在日增重上高于其他各組。

表5 各組犢牛生長(zhǎng)性能測(cè)定結(jié)果

由表6和表7可知，飼喂不同比例II號(hào)肉牛飼用復(fù)合益生菌的試驗(yàn)組和對(duì)照組均有腹瀉，但腹瀉程度有一定的差別，其中對(duì)照組的腹瀉頻率和糞便評(píng)分最高，0.1%組最低，整體來看，各組發(fā)生腹瀉的概率都不高。由此可見，添加不同比例肉牛飼用復(fù)合益生菌對(duì)犢牛腹瀉具有很好的抑制作用。

表6 各組犢牛腹瀉發(fā)生情況統(tǒng)計(jì)

表7 各組犢牛腹瀉評(píng)分

4 結(jié)論

4.1 本次創(chuàng)新模擬瘤胃菌群環(huán)境，優(yōu)選出肉牛飼用復(fù)合益生菌的最佳組合為50%酵母菌+25%乳酸糞腸球菌+25%芽孢桿菌，該組合的飼料干物質(zhì)降解率、MCP含量、產(chǎn)氣量和總VFA濃度顯著提高，NH3-N濃度明顯降低，瘤胃液pH值保持穩(wěn)定。

4.2 按精料量的0.1%比例添加肉牛飼用復(fù)合益生菌飼喂?fàn)倥＃茉鰪?qiáng)瘤胃消化粗纖維、木質(zhì)素、粗蛋白的能力，緩解酸中毒，很好地抑制犢牛腹瀉，糞便細(xì)膩松軟、臭味輕，且能顯著提高犢牛體尺、胸圍、體高、日增重等生長(zhǎng)性能指標(biāo)。

4.3 添加肉牛飼用復(fù)合益生菌，提高了非常規(guī)粗飼料的利用率，干物質(zhì)排放量減少3.5%，經(jīng)濟(jì)效益提高10%以上。■